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植物病毒病害诊断方法

花匠小妙招
2024-11-11 06:32

1、如何根据症状特征诊断植物病毒病

感病植物在病原物或不良环境条件干扰下，其生理、组织结构和形态上所发生的病变特征。肉眼可直接观察到的病变，称为宏观症状；借助显微镜才能辨别的病变，称为微观症状。微观症状多应用于病细胞或病组织的研究范围内，只在植物的病毒病诊断上具有一定的参考价值，如观察韧皮部中有无坏死细胞，筛管和导管中有无增生结构，以及在感染病毒病的病细胞中出现的各种内含体的形态和类型等。

因寄主植物和病原物所表现的特征不同，宏观症状常分为病状和病征两个方面。

病状感病植物的外部特征。一般有以下几种类型。

变色指整个植株、整个叶片或叶片的一部分变色。主要表现为褪绿和黄化，也有的表现为紫色或红色等其他色泽的变化，叶色变深成蓝绿色或叶片表面呈金属光泽(银叶病)等。叶片上不均匀的变色，如常见的花叶，是由不规则的深浅绿或黄绿相间形成的。变色部分呈不规则斑块的为斑驳，呈环状的为环斑或几个环斑组成的同心斑和线条状变色的线纹。单子叶植物的花叶症状是在平行叶脉间出现条纹或条点等不规则变色。沿叶脉变色的症状有脉带和脉明，花部颜色的变化有花色变绿等。变色症状是由于叶绿素或其他色素受破坏或抑制所致。常表现于植物病毒病和有些非侵染性病害，如土壤中缺铁时植物褪绿，缺氮则黄化，土壤中积累盐碱太多或含其他有毒物质导致植株发黄或变红等。有些类菌原体引起的病害，往往表现黄化。

坏死局部细胞和组织的死亡。症状表现因坏死部位不同而异。叶片上的局部坏死称叶斑；有各种形状和表现：呈轮纹的为坏死环斑或轮纹斑；而蚀纹则仅是表皮细胞的坏死，不同形状的蚀纹又分别称为线纹和橡叶纹等。坏死的叶斑组织脱落即形成穿孔。各种器官均可产生局部坏死，如茎部的条斑坏死(幼苗茎基坏死表现为立枯或猝倒)、果实上的坏死等。内部组织的坏死有块茎内的褐斑、网腐和黑心，维管束的褐死和韧皮部坏死以及果实苦陷等。

腐烂整个组织和细胞的破坏和消解。植物的根、茎、花、果实都可发生，尤易见于幼嫩组织。组织腐烂时可随着细胞的消解而流出水分和其他物质。细胞消解较慢时则腐烂组织中的水分会及时蒸发而形成干腐，如果实受侵染腐烂后形成的僵果即是。反之，如细胞的消解很快,腐烂组织不能及时失水,则形成湿腐或软腐。一些病原细菌和真菌可分泌果胶酶，使连结细胞的中胶层分解，导致细胞离析、内含物死亡或分解。从受害部位的细胞或组织中流出分解产物的情况，称异常分泌，其性质与腐烂相似。病部流出胶体物的称流胶；松柏科植物反常溢出树脂的称流脂；流出乳状液的称流乳；流出不能凝固的树液时称流液。

萎蔫植病中的萎蔫是植物输导系统被病原物毒害或病组织的产物阻塞造成的不可逆性萎蔫。一般根或主茎的维管束受害引起的萎蔫多是全株性的，分枝叶柄或部分叶脉的维管束受害则是局部性的。

畸形感病植物组织和器官所发生的皱缩、卷曲、矮缩、丛簇、丛枝、发根、肿瘤、花器和种子变态等现象。矮缩是全株发生抑制性病变，生长发育不良、植株矮小。丛簇只是主轴节间的缩短，或节间的数目也同时减少，但叶片的大小仍正常。枝条不正常的增多形成丛枝，根的增多或不正常的过度分根形成发根，肿瘤在根、茎、叶上均有发生。茎和叶脉上可形成突起的增生组织，如耳突、疱疹、刺疣以及器官的增生等。此外植株还会产生生长习性或对称性的改变，如由匍匐性变为直立性等。叶子受病后发生的病变也很多，如叶片变小，全缘叶变为缺刻叶，叶面高低不平形成的皱缩叶，叶片沿主脉向上或向下翻卷形成的卷叶等。花的各部分变为绿色叶片状的叶变等则是一些特殊的变化。

病征病原物在病株发病部位所表现的特征。主要有：①霉状物。感病部位产生的各种霉层，其颜色、质地和结构等变化较大，如霜霉、绵霉、绿霉、青霉、灰霉、黑霉、红霉等。②粉状物。病部产生的白色或黑色粉状物。白色粉状物多见于病部表面；黑色粉状物多见于植物器官或组织被破坏之后。③锈粉状物。病部表面形成一堆堆的小疱状物，破裂后散出白色或铁锈色的粉状物。④粒状物。病部产生的大小、形状及着生情况差异很大的颗粒状物,有的是针尖大小的黑色小粒,不易与组织分离，为真菌的分生孢子器或子囊壳；有的是形状、大小、颜色不同的颗粒，为真菌菌核。⑤根状菌索。感病植物根部以及附近的土壤中产生的紫色线索状物。⑥菌脓。病部产生的胶粘脓状物，干燥后形成白色的薄膜或黄褐色的胶粒，是细菌性病害所特有的病征。发生机制植物受病后表现各种症状是因其细胞、组织或器官受到某种破坏而变质所致。许多真菌和细菌以及线虫能分泌多种酶，可使植物的细胞或组织分解和受到破坏，从而造成坏死或腐烂。

2、花卉病毒类似病害的诊断和鉴定方法有哪些？

植原体、螺原体等无壁菌门的原核生物造成的植物病害与植物病毒产生的症状相似，无病症表现，因此，它们又叫病毒类似病害。花卉上比较常见的是植原体病害，因此我们介绍一下植原体病害的诊断和鉴定。

1 超薄切片，电镜下观察植原体

方法如植物病毒的超薄切片和电镜观察。

2 抗生素治疗诊断

用四环素、土霉素和金霉素等对受病植株进行叶面喷施和灌根，植原体对这几种抗生素敏感，病害症状可以得到缓解。而植物病毒对抗生素不敏感，如果施用，对病害无效。

3 植原体PCR检测

根据植原体的共同保守序列，用植原体16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2进行植原体直接PCR扩增，可扩增到植原体的特异扩增带。

还可以将直接PCR产物分别稀释40倍后，引物换为R16R2/R16F2进行巢式PCR扩增，可得到与引物设计相符的植原体的特异扩增带，说明为植原体病害。

这里以仙人掌植原体丛枝病的PCR检测为例，介绍植原体的PCR检测技术。

实验操作如下：

Ⅰ.总核酸提取

（1）取0.3g植株幼嫩组织，用液氮冷冻后充分研磨成粉状。

（2）移入含有0.6ml预热到60℃的CTAB DNA提取缓冲液中，在60℃水浴中温浴30min。

（3）加入等体积酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），抽提30min。

（4）12000r/min离心8min，取上清液，重复（3）、（4）步直至蛋白质除尽。

（5）加入氯仿∶异戊醇（24∶1），抽提30min，12000r/min离心8min，取上清液。

（6）加入等体积预冷的异丙醇及1/10体积的醋酸钠（3mol/L，pH5.2），混匀，-20℃保持至少30min，14000r/min离心10min，使核酸沉淀。

（7）用70%乙醇洗涤2次后，.真空干燥。

（8）沉淀溶解于100μl TE缓冲液中。

（9）取10μl DNA经0.7%琼脂糖凝胶电泳后观察结果，计算DNA浓度。其余于-20℃冰箱中保存备用。

Ⅱ.PCR扩增

参照Lee所报道的植原体16S rRNA基因通用引物对R16mF2/R16mRl序列和R16F2/R16R2序列合成引物，引物序列如下：

R16mF2：5′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′

R16mRl：5′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′

R16F2：5′-ACGACTGCTGCTAAGACTGG-3′

R16R2：5′-TGACGGGCGGTGTGTACAAACCCCG-3′

引物溶解于适量灭菌水中至终浓度为10μmol/L。

直接PCR（Direct-PCR）：

（1）取一PCR薄壁管，依次加入下列试剂

10×PCR反应缓冲液 5μl

5mmol/L MgCl2 4μl

2.5mmol/L dNTP 4μl

R16mF2（或R16F2） 3μl

R16mRl（或R16R2） 3μl

4U/μl 1TaqDNA聚合酶 1μl

模板 2μl

加入双蒸水至终体积为50μl，混匀并加入30μl石蜡油。

（2）PCR扩增。反应循环为95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸90s，35个循环后于72℃保温10min，4℃冰箱中保存。

（3）取5μl PCR产物于1%琼脂糖凝胶检测PCR扩增结果。

巢式PCR（Nested-PCR）：

将用引物对R16mF2/R16mRl扩增的直接PCR产物按1∶40比例稀释后，作为反应模板，引物对换为R16F2/R16R2，退火温度升高至60℃，其余反应条件同直接PCR。

Ⅲ.结果

用植原体16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2进行植原体直接PCR扩增，可扩增到一条约1.5kb的特异扩增带（图1）。通过实验，用泡桐丛枝作为植原体的阳性对照，检测出YNOl样品（仙人掌品种珊瑚枝丛枝）和YNO2（仙人掌品种堆罗汉丛枝）为植原体病害。其他YNO3（仙人掌品种猪耳掌丛枝）、YNO4（仙人掌品种金狮子丛枝病）、YNO5（仙人掌品种青海波丛枝）不是植原体病害，可能为品种的特性。

图1 直接PCR扩增结果

将直接PCR产物分别稀释40倍后，引物换为R16R2/R16F2进行巢式PCR扩增，可得到一条约1.2kb的特异条带，与引物设计相符（图2），说明为植原体病害。直接PCR的检测灵敏度为10pg DNA，而巢式PCR可以提高检测灵敏度。使用直接PCR的检测得到比较模糊条带的，使用巢式PCR可以得到非常明显的条带。

图2 巢式PCR扩增结果

3、如何识别和防治植物病毒病害？

植物病毒病表现特点有：叶片卷曲、萎缩、斑块。
会引起植物生长衰弱，减产。
防治方法一般需要先清理环境杂草，及时防治蚜虫，因为蚜虫是传播病毒病的常见媒介；化学防治一般是喷施病毒A、病毒K、病毒立克等。
目前世界上防治病毒病也没有特效药，还是需要杀灭蚜虫为根本，以预防为主。

4、植物病害病毒引起植物病害症状有哪些

保护植物不受或减轻病害为害的措施。20世纪70年代国际上提出有害生物综合治理原则，把植物病害防治提高到一个新的水平。
病害诊断　正确的诊断是植物病害防治工作的首要前提。可分为田间诊断和病原物鉴定。
田间诊断　即以观察田间植株症状特点为主要依据，确定病害的种类。病害与伤害、虫害不同，具有病变过程。通过诊断，应区分病害属侵染性或非侵染性。非侵染性病害在田间往往成片状发生，且发病地点常与地形、土质或特殊环境有关。而侵染性病害，如患病毒病的植株则周围常有健株,在田间呈分散状态,病株呈畸形、褪绿或花叶；真菌性的病株多腐烂萎蔫，畸形，具坏死斑点、霉状物、粉状物以及黑点或菌核；细菌性的病株多具溃疡、腐烂、坏死和菌脓；寄生性种子植物的为害症状更为明显。
病原物鉴定　一些常见病害可通过对宏观症状的快速诊断而得出结论。但由于不同的病原物可导致相同的症状，而相同的病原物也可导致不同的症状，同时植物的种类和环境条件也会影响症状的表现，因此对有些病害需要进行实验室鉴定才能确诊。区分非侵染性与侵染性病害病原的方法可通过显微镜观察病害组织是否有病原物，并观察其内部组织变化；通过人工接种试验观察病害有无传染性；通过分析植物组织和土壤中矿质元素的含量，确定是否属于缺素症（见植物营养诊断）；以及通过人工诱发试验观察是否发病等。
在排除了非侵染性病害的可能后，即可进行侵染性病害病原的鉴定。基本的方法是直接的微观镜检和对病原物进行分离、培养、接种后再进行镜检。根据不同病原物可采取不同方法：①真菌病原的鉴定。利用显微镜检，对病原的形态如菌丝、孢子和子实体的形状、大小、结构、颜色进行观察判断。必要时可进行人工诱发试验，即将分离出的菌体接种在同类健株上，观察是否发生相同的病害。②细菌病原的鉴定。通常是切取小块病组织，置玻片上的水滴中，在显微镜下观察有无大量细菌从组织中流出。细菌种类可根据其形状、大小、鞭毛数、着生部位和染色反应以及培养特征和生理性状等观察判断。③植物病毒病原的鉴定。主要靠侵染性试验如汁液接种、嫁接试验、昆虫传毒试验等进行诊断。判断病毒种类时，可利用电子显微镜直接观察病毒的形态，同时鉴定病毒的生物学特性，如传播方式、寄主范围、寄主反应、体外保毒期、稀释终点和对温度的反应等。还可将病毒注入动物血液中，根据血清反应鉴定病毒的种类和株系。④线虫鉴定。剖切虫瘿或膨肿部分，取线虫进行镜检。肉眼观察困难时，可采用漏斗分离法或叶片染色法进行检查。
防治原则和方法　植物病害的防治原则是：消灭病原物或抑制其发生与蔓延;提高寄生植物的抗病能力;控制或改造环境条件，使之有利于寄主植物而不利于病原物，从而抑制病害的发生和发展。一般以预防为主，因时因地根据作物病害的发生、发展规律，采取具体的综合治理措施。每项措施要充分发挥农业生态体系中的有利因素，避免不利因素，特别是避免造成公害和人畜中毒，使病害压低到经济允许水平之下，以求达到最大的经济效益。防治的方法和措施主要如下：
植物检疫　以立法手段防止在植物及其产品的流通过程中传播病虫害的措施，由植物检疫机构按检疫法规强制性实施。严格执行植物检疫法规可保护无病区，限制和缩小疫区，铲除新传入而未蔓延开的包含病原物在内的检疫性病虫和杂草（见植物检疫）。
抗病育种　培育抗病品种是经济有效的防治方法。在防治传染快、潜育期短、面积大的气传和土传病害如小麦锈病、稻瘟病、棉花枯、黄萎病等方面应用尤为普遍。为防止抗病品种遗传基因单一化，可利用诱发病圃或人工接种方法，鉴定对不同病原物和不同专化小种的抗病品种，通过杂交，集中多个抗病主效基因于一个或几个栽培品种，并结合农艺性状优良和高产育种，培育出高产优质的多抗性和兼抗性品种。还可利用植物体细胞杂交，导入抗病基因，以及将植物的抗病物质通过细胞质遗传以提高植物的抗病性。
栽培防治　改进耕作制度可改变病原物严重发生的生态条件，有利于作物生长发育和提高抗病能力。如轮作可防治棉花枯、黄萎病等土传病害；保持果园田间清洁，可消灭或降低越冬菌量；严禁操作人员在烟草田和番茄田吸烟，移苗或整枝打杈前用肥皂水洗手，可防止烟草花叶病毒传染；适期播种、阔窄行密植和增施厩肥和饼肥，可使玉米大、小斑病为害减轻；深沟窄行可降低地下水位和土壤湿度，从而减轻小麦赤霉病；勤灌对控制水稻白叶枯病有较好效果；除草灭虫可减少病原物侵染来源或错开病原物发育的最适季节；建立无病种苗基地可防止种苗传病等（见农业防治）。
化学防治　应用化学药剂消灭病原物使作物不受侵害的措施（见化学防治、杀菌剂）。
物理和机械防治　有多种方法。如通过筛选、风选种子或泥水、盐水选种，可利用不同比重汰除受病害的子粒；播种前晒种,用1％石灰水浸种或用一定温度的温汤浸种,可有效地防治由种子传带的多种稻病和麦病;烧土和熏土对防治某些土传病害如花生青枯病、十字花科软腐病有一定效果；在温室内以一定温度处理果苗，可钝化某些果苗内病毒以防治病毒病；贮藏室(窖)短时间升温可促进薯块伤口愈合以防治甘薯软腐病；在温床用高温蒸气进行土壤灭菌，可防治立枯病、猝倒病等。此外，各种射线、超声微波、高频电流也在试用于病虫防治（见物理机械防治）。
生物防治　主要是利用或协调有益微生物与病原物之间的相互关系，使之有利于微生物而不利于病原物的生长发育，以防治病害。如土壤和植物根际的大量微生物群与病原物之间的拮抗作用就常被利用于防治土传病害。由于不同作物根际的微生物群种类和数量有差异，因此轮作对调整土壤和作物根际的有益微生物以及病原物之间的相互关系有很大的影响，很多病害可以通过轮作减轻发病程度。此外，将一些化学物质施入土壤或植物根际也可刺激某些微生物的大量繁殖，从而抑制某些病害。使用微生物农药可减轻污染，避免杀死有益生物从而保护农业生态系的稳定，并弥补化学农药之不足。因此，扩大拮抗菌、占领菌、诱抗菌、促生菌、增产菌、催熟菌等的利用,将使植病的生物防治有更大的发展(见生物防治)。

5、什么是植物病毒病害的初步鉴定！！！急！！！

植物病毒病害的初步鉴定,

就是初步的鉴定植物病毒的病害。

鉴定方法：把植物病毒弄到植物上专，看看有什属么病害。

坚定步骤:1把植物病毒弄到植物上
2过一久看看植物发生什么情况
3得出结论

给我分吧哥哥！

6、谈谈植物病害的诊断及防治。

植物病害的诊断目前主要是根据病害的外部特征、表现去判断。比如作物病害主要分为真菌性、细菌性、病毒性、生理性病害，各病害表现的病症不同。
一、真菌性病害
会产生不同形状的病斑，病斑上产生不同颜色的霉状物或粉状物,无臭味。
二、细菌性病害
1、叶片上病斑无霉状物或粉状物，而且病斑处很薄易破裂或串孔。
2、根茎叶易腐烂，有臭味。
3、果实上有疮痂，果实表面有小突起。
4、根部尖端维管束易变褐色。
三、病毒性病害
主要表现在嫩叶上，种类虽少，但危害大，易得难治。
1、花叶病毒：叶片皱缩，黄绿相间，金黄易凹，深绿易凸。
2、厥叶型：叶片细长，叶脉上冲，呈线状。
3、卷叶型：叶片扭曲，向水弯曲。
4、条斑型：在西红柿要成熟果实上，出现青白色，渐变铁锈色，不易着色，果实皮里肉外有褐色条纹。辣椒果尖端向变黄色，在变黄部位出现短的褐色条纹。
四、生理性病害
不具传染性。易出空洞果、畸形果、落花落果、花打顶、自打顶，叶片黑厚而小浓绿、易老化、干枯。

7、类病毒引起的植物病害有哪些症状？

植物类病毒（viroid）是相对分子质量1*10左右的，由246～574个核苷酸组成的单链环状RNA寄生物。典型的类病毒为马铃薯纺锤块茎类病毒（Potatospindletuberviroid，PSTVd）。类病毒无蛋白质外壳、耐热性高、侵染活性高、仅存在于植物细胞核中以及不显症侵染等，这些是类病毒不同于病毒的特点。迄今已发现了类病毒引起的30余种植物病害，病株无明显表观症状或表现畸形、坏死、变色等症状。

8、植物病原病毒的基本特点如何？它们所引起的病害症状类型有哪些

①植物病毒属于非细胞生物，结构非常简单，主要由核酸及保护性蛋白质外壳组成，分子量小于 3×103U。
②植物病毒的基本形态为粒体，大部分植物病毒的粒体为球状、杆状、线状和弹状等。线状病毒多为 11—30nm× 750nm，个别可达 2000nm。
③植物病毒的主要成分是核酸和蛋白质，有得病毒还含有少量的糖蛋白和脂类。一般杆状或线条状的植物病毒，中间是螺旋状核酸链外面是由许多蛋白质亚基组成的衣壳。
④植物病毒是一种严格的细胞内专性寄生物。作为一种分子寄生物，没有细胞结构，不像真菌那样具有复杂的繁殖器官，也不像细菌那样进行裂殖生长，而是分别合成核酸和蛋白组分再组装成子代粒体。这种特殊的繁殖方式称为复制增殖