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血清学方法和分子生物学方法检测植物病毒研究进展①

花匠小妙招
2024-11-12 06:01

血清学方法和分子生物学方法

检测植物病毒研究进展

①

袁小环李青

(北京林业大学园林学院北京100083)

摘要

血清学方法是目前最常用的植物病毒检测方法,分子生物学方法检测植物病毒正处于

从实验研究转向实际应用阶段。介绍了这2类方法的研究进展、应用状况,并对几种常用方

法(ELISA、RT-PCR、IC-PCR、h

ybridization)的检测灵敏度作了比较分析。

关键词

血清学;分子生物学;植物病毒检测

中图法分类号

Q331

常用的植物病毒的检测方法有传统生

物学方法、血清学方法、电镜检测法、分子生

物学方法4种。生物学方法中指示植物法

应用较普遍,但存在诸多限制

[1,2]

。电镜检

测法要求设备昂贵,且操作技术不易掌握,应用不多。本文只介绍现今应用最多的血

清学方法和处于研究前沿的分子生物学检

测法。1血清学方法检测植物病毒研究进展

目前,血清学方法仍是国内外检测植物

病毒的常用方法。其于20世纪六七十年代

发展起来,利用抗原抗体的免疫学反应进行

检测植物是否带病毒。其中应用最广泛的

为酶联免疫吸附反应法

(enzymelinkedim2

munosorbentassay,ELISA)

。自1976年Voller和Clark等首次将ELISA应用于植物病毒

检测,已形成多种测试方法。常用的方法有

6种:直接细胞法,间接细胞法,双抗体夹心法,直接竞争法,酶抗酶法,抗体夹心法

[3]

。

它们的应用范围各不相同。ELISA具有灵

敏度高、特异性强、安全、快速及容易观察结果等优点;但手续较繁琐,需要特殊仪器。

针对ELISA反应中免疫反应物消耗量

较大,抗体被酶标板吸附后与抗原结合力下

降,而且抗原-抗体结合比在液相中慢的缺

点,1982年Hawkes等建立了DIBA

(dotim2

munobindin

gassa

y,点免疫结合测试技术)

。DI2

BA用硝酸纤维素膜代替酶标板,使检测更为简便、快速、经济[4,5],其检测SMV(大豆花叶病毒)和CMV(黄瓜花叶病毒)的灵敏度分别为1.7和1.2ng/mL[1ng(纳克)=1×10-9g]。陈剑平等认为,ELISA容易忽视较弱的交叉反应或不能从病毒-抗体之间真正的特异性反应中区分寄主蛋白和其相应抗体之间的非特异性反应。O’Donnell等—36—2001年12月热带农业科学第6期(总第94期)Dec.2001CHINESEJOURNALOFTROPICALAGRICULTURENo.62001

①收稿日期:2001-10-22编辑/凌青根