烟草Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及功能鉴定

• 花匠小妙招
• 2024-11-13 04:10

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声明

1引言

1.1植物的抗病性

1.1.1植物的真菌病害及植物抗真菌病害基因工程的策略

1.1.2在植物与病原识别水平上调控而激活植物的抗病机制

1.1.3导入植物防卫反应基因增强植物抗病性

1.1.4导入降解或抑制病原菌致病因子的基因使植物抗病

1.2植物防御反应信号途径

1.2.1植物防御反应中的信号分子

1.2.2植物防御反应信号转导途径

1.3蛋白酶抑制剂研究进展

1.3.1植物蛋白酶抑制剂的种类

1.3.2蛋白酶抑制剂在植物抗虫与抗病中的作用

1.3.3蛋白酶抑制剂基因的转基因研究

1.4本课题的研究目的及意义

2材料与方法

2.1材料

2.1.1植物材料

2.1.2植物材料培养与处理

2.1.3载体和菌株

2.1.4其它材料

2.1.5实验引物

2.2实验方法

2.2.1大肠杆菌DH5α感受态的制备及转化

2.2.2质粒DNA的提取

2.2.3凝胶电泳中DNA片段的回收

2.2.4 DNA片段与克隆载体的连接

2.2.5序列测定

2.2.6植物基因组DNA的提取

2.2.7植物RNA的提取

2.2.8 Northern杂交

2.2.9 Southern杂交

2.2.10烟草真菌诱导cDNA文库的构建与筛选

2.2.11 RT-PCR

2.2.12原核表达

2.2.13 NtKTIl启动子的扩增及分析

2.2.14植物表达载体的构建与转化

2.2.15转基因植株的真菌抗性实验

2.2.16网络资源及数据库

2.2.17生物学软件及其使用

3结果与分析

3.1立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）诱导烟草幼苗cDNA文库的筛选

3.2 NtKTI1的序列分析及预测

3.2.1 NtKTI1的序列分析

3.2.2 NtKTI1同源比对

3.2.3 NtKTI1在拟南芥和水稻中的同源基因及进化分析

3.2.4 NtKTI1基因的表达分析

3.3 NtKTI1基因的功能分析

3.3.1 NtKTI1基因的原核表达、蛋白纯化及抑菌活性检测

3.3.2转基因烟草的获得及抗病性鉴定

3.4 NtKTI1基因的启动子扩增及元件分析

3.5拟南芥和水稻中的蛋白酶抑制剂的分类比较

4讨论

4.1 NtKTI1编码一种Kunitz型蛋白酶抑制剂

4.2 NtKTI1可能的信号机制

4.3 NtKTI1可能的抗病机制

4.4融合蛋白的原核表达和培养条件对表达产量的影响

5结论

参考文献

附录

致谢

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