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兰花组织培养的外植体如何采集和灭菌？爱问知识人

花匠小妙招
2024-11-18 00:36

  用于兰花组织培养的外植体可以是芽、叶片或茎段等。正在生长中的芽是较好的培养采集物；也可以选择无病虫害的植株作为取材母株，剪切所需叶片与茎段（长2〜3厘米）；注意采集的材料要是一年生的，裁下的枝条至少要有一个节，采集时要从节间剪切，培养后从节处长芽，愈伤组织从切口处生长。
   不同种类的兰花采集芽的大小有所不同，如虎头兰采3〜8厘米、卡特兰采6~8厘米、国兰采2~3厘米,单轴类的兰花（如万带兰、树兰等）应从顶尖上采集一段，取其生长点部位。切取下来的芽或茎段，放在自来水下冲洗干净，并将最外面的1~2片荀叶或老叶去掉。
  再将材料倒于1000毫升烧杯中，倒入500~800毫升自来水，加1~5滴吐温（Tween) 40,用玻璃棒搅拌数分钟后，倒去含吐温40的水，换上清水后再搅拌，连洗3次即可。将上述清洗干净的材料浸没在10%次氯酸钠溶液或含3%有效氯的漂白粉清液中，火菌10〜15分钟（灭菌时间和灭菌液的浓度应根据芽或茎段的大小及不同种类进行适当调整，做到既能防止菌类的污染，又可避免因灭菌液的杀伤作用而引起组织坏死)。
  然后移至无菌条件下，用无菌水将灭过菌的材料连洗3次，待用。如果上述灭菌方法未能达到灭菌的目的，可采用二次灭菌法：即先将材料放入70%酒精中浸泡30秒，再将材料移入0。1%升汞中灭菌3〜10分钟，取出后用无菌水冲洗 3~4次，然后再按上述常规灭菌方法灭菌1次，即能达到目的。
  将灭菌后的外植体放在培养皿中，在无菌条件下进行剥离和切割，切成所需大小，用镊子将剥出的组织直接接种在培养瓶的培养基上（在瓶上做好标记)，然后移到培养室。卡特兰类容易产生褐变，在进行切割时可将芽放在无菌水中操作，这样会比在空气中操作产生褐变的机会少些。
  如果担心母株材料本身带菌，则可在培养基内加入少量抗生素（如橄榄霉素20毫克/升、氨苄西林50毫克/升与适量制霉菌素等)，以便抑制细菌与霉菌的生长。在含抗生素的培养基上经多次继代培养，可使植物组织无菌化，达到无菌苗的标准。

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