山东徐长卿几种重要真菌病害病原鉴定
山东农业大学硕士学位论文 摘要 徐长卿 (Cynanchumpaniculatum(Bge．)Kitagawa)属于萝蘼科，为多年生草本植物， 是常用的中药和民间草药、民族药，历代临床及民问都有广泛的应用，常作为镇静剂治 疗风湿关节痛、腹胀及荨麻疹和湿疹等。已从徐长卿中提存的有效药物成分包括丹皮酚、 C21类固醇及多种生物碱等，最近从徐长卿中提纯的菲骈吲哚类生物碱在肿瘤治疗方面 显示明显疗效，因此，徐长卿在医药上的用途也在不断拓宽。 随着医药业对徐长卿的需求量不断增加，野生徐长卿已不能满足医药企业的需求。 白1998年我国很多地区开始人工种植，由此带来的病害问题也越来越突出，但关于该 药用植物病害方面的资料非常有限。为了解徐长卿病害种类及其发生危害特点， 2010— 2013年，我们对山东新泰、蒙阴、平邑等产区的徐长卿进行了系统调查，明确了 山东徐长卿病害的种类及分布，对引起各病害的病原从形态学和分子生物学等方面进行 了鉴定，研究结果填补了国内外对该植物病害研究的空白。具体研究结果如下： 1．山东徐长卿真菌病害种类及分布 调查发现，山东徐长卿产区常见真菌病害包括炭疽病、丝核菌叶枯病、立枯病和白 绢病等。其中，炭疽病可危害茎秆、叶片和荚果，普遍分布于各调查地块；叶枯病主要 危害叶片和茎秆，常造成植株成片枯死；白绢病主要危害植株茎基部，在发病部位形成 大量白色絮状菌丝体和颗粒状菌核，并可导致根系皮层腐烂和植株枯死：立枯病主要危 害3—5叶期幼苗，可导致根系腐烂和幼苗枯死等症状。这几种病害在徐长卿上发生均为 国内外首次报道。 选择部分代表菌株进行致病性测定，结果表明，各菌株都可使徐长卿的茎叶和荚果 表现典型的病害症状，并可从发病组织上再次分离到相应的病原，符合柯赫氏法则。并 初步测定了炭疽病菌各类型菌株的寄主范围，结果发现，各代表菌株都能使番茄、芒果 等果实表现典型的病害症状，表明徐长卿并非该类炭疽菌的唯一寄主。 2．徐长卿炭疽病 从新泰、平邑、蒙阴等地采集徐长卿病害样本，经单胞分离，从发病叶片、茎秆和 荚果共获得103株炭疽菌分离物：形态学观察发现，103株分离物分可为4种类型，其 中50株可产生弯月形分生孢子，53株产生柱状分生孢子；从中选择代表性菌株，对其 中的[I-tubulin(tub2)、HIS3、actin(ACT)、glyceraldehyde一3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)和rDNA ITS等多个基因进行序列分析和比较，并用MEGA 4．0软件对其聚类 万方数据 山东徐长卿几种重要真菌病害病原鉴定 分析，结果表明，48株鉴定为平头炭疽菌(Colletotrichum truncatum)，25株属于尖孢 炭疽菌 (C口cutatum) ，其它30株分别属于2个不 同类 型 ，但 与 目前 已报道 的 Colletotrich“m种都存在较大差异，经初步鉴定，确定这2个种为新种。经致病性鉴定 发现，该几种分离物为炭疽病致病菌。 3．徐长卿叶枯病 从蒙阴和新泰徐长卿种植区采集表现叶枯病症状的植株，组织分离法获得24株丝 核菌分离物。经培养性状和核相观察、菌丝融合测定，结合rDNA ITS序列分析，将该 分离物鉴定为立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)的AGI．IB融合群。致病性测定发现，该 分离物为引起叶枯病的致病菌。 4．徐长卿立枯病 从蒙阴和泰安等地采集徐长卿发病幼苗，组织分离法从发病根部分离到32株丝核 菌分离物，根据培养特征、核相观察和菌丝融合测定，结合rDNA ITS序列分析，发现 其中30株为立枯丝核菌 (尼solani)AG4一HG—I融合群，1株为立枯丝核菌 (R．solani) AG4一HG．III融合群，1株为双核丝核菌AG-F融合群。致病性测定表明，各代表菌株均 可使徐长卿幼苗表现典型的立枯病症状。说明该分离物为徐长卿立枯病的致病菌。 5．白绢病 从平邑和新泰等地采集病株样本和发病植株上的菌核，经组织分离和菌核直接培 养，获得11株分离物，观察发现，各分离物在PDA平板形成白色絮状菌丝和褐色菌核， 表现核盘菌属 (S
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