植物病原真菌检测技术研究进展.doc
植物病原真菌检测技术研究进展传统的植物病害诊断方法往往根据病组织的症状、病原菌的特征以及研究人员的经验进行。但某些病原引起的症状相似例如胡萝卜的细菌枯萎病与交链孢黑斑病病毒与难养菌不同病原物复合侵染造成的症状。有些病原菌不能进行纯培养因而单靠传统的分离培养生物学测定等常规方法进行检测诊断困难较大并且效率低速度慢。目前随着我国对外开放国际贸易不断扩大进出口的种子苗木等繁殖材料日益增多更迫切需要进行快速的检疫检测近年来分子生物学生物化学免疫学等领域取得的巨大进步尤其血清学核酸技术的应用为植物病原的快速检测提供了许多新技术。1血清学技术血清学就是以抗原与抗体的特异性反应为基础而发展起来的一种技术。目前已广泛应用到植物病毒的检测但在真菌的检测中还不普遍这主要因为缺乏促进发展的动力。一般真菌象白粉病锈病黑粉病霜霉病等具有典型的症状较易诊断并且大部分真菌都可进行分离纯培养根据形态特征即可鉴定。但是由于分离纯化培养程序繁杂耗时较多且只能集中在实验室中进行而且有些真菌尤其土传病菌较难分离需要才用特殊方法所以近十几年来血清学技术在病原真菌中发展较快充分显示了常规方法所不具有的特性1.简单快速准确灵敏2.可检测未显示症状时的病原3.可检测症状不典型或与其它病原物复合侵染时情况4.可定量检测病原物5.可同时检测大量样品6.可制成试剂盒在田间进行检测诊断。总之无需对病原真菌进行分离即可检测。1.1免疫原在真菌的血清学研究中利用菌丝可溶性蛋白成分作免疫原的报道较多其次菌丝细胞壁成分、低等真菌的游动孢子、休眠孢子等高等真菌的分生孢子厚垣孢子等也被用作免疫原制备过多种病原菌的抗血清。另外Gendlodff(1983)等人报道用菌丝碎片Takenake(1992)利用菌丝核糖体作免疫原制备的抗血清效果也较好。到目前为止对真菌免疫原的特异性成分了解还不是太多大都认为是糖蛋白和多糖类物质。虽然了解不多但利用真菌的许多成分作免疫原免疫原性还是较好较易产生特异性的抗体因而血清学方法用于真菌的检测具有广阔的前景。但也应考虑菌龄培养基的种类等众多因素会影响免疫原性的高低。1.2抗体抗体分多克隆和单克隆抗体两种。在病原真菌的血清学诊断检测中两者各有其特点单克隆抗体特异性强灵敏度高而多克隆抗体制备方便经济所以二者都有较多的报道。效价高低和特异性好坏是衡量抗体质量的两个重要指标大部分只达到属较少具有种及种以下的特异性这也是制约血清学检测技术在真菌鉴定中应用的一个重要因素。不过检测某些病害时广谱性属的水平抗血清就能达到要求并不苛求特异性非常强种及种以下的抗血清美国SIGMA公司商品化生产诊断疫霉菌立枯丝核菌腐霉菌的试剂盒便是很好的例证。
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