首页 > 分享 > 医学PPT课件大全荧光化学发光在植物分子生物学的应用.ppt

医学PPT课件大全荧光化学发光在植物分子生物学的应用.ppt

花匠小妙招
2024-11-18 11:23

医学PPT课件大全荧光化学发光在植物分子生物学的应用

1、荧光技术 FI应用的优势 FI应用－核酸定量分析 2）时间分辨荧光（TRF） 3）荧光偏振（FP） 4）荧光共振能量传递（FRET） 5）均相时间分辨荧光（HTRF） 2、化学发光技术发光应用－基因调控 BRET应用示例－蛋白质相互作用技术总结 Tecan多功能酶标仪家族多功能酶标仪支持的微孔板类型以GFP为基础的Ca++显示剂（cameleons）将一个青色荧光蛋白通过钙调蛋白（CaM）和CaM结合肽（M13）连结到一个黄色荧光蛋白上。 Ca＋＋与CaM的结合导致CaM与M13结合，分子构型变化，使两个GFP分子更接近，就会发生荧光共振能量转移。化学发光技术的分类发光发光共振能量传递 1）发光（Lum） Substrate Product + Light Enzyme 优势：超高灵敏度 Lum应用范围钙流检测基因调控 ATP检测发光免疫分析发光应用－钙流检测水母发光蛋白Aequorin Ca++ Kinetics of the β-glucan（葡聚糖）elicitor-induced enhancement of the [Ca2+]cyt in soybean cells. （Biological Procedures Online 2002- 4/1, p105-118）发光应用示例－钙流检测 pSP-luc+ (转化拟南芥细胞) Cultured cells show diurnal rhythms (Arabidopsis) (Plant Cell Physiol, 2004-45/1, p57-67) CCA1的启动子区域 CCA1－在昼夜节律调节起中心作用的转录因子发光应用示例－基因调控 2）发光共振能量传递（BRET） Donor = Renilla luciferase (Rluc) Acceptor = YFP BRET应用范围蛋白组学: 蛋白-蛋白相互作用胞内细胞器间的相互作用对酵母双杂交结果的验证受体研究: 受体的同源和异源二聚体化受体应答传导途径孤儿受体的筛选发光光谱（关注530/480 ratio） COP1的二聚体化 COP1-光形态建成的关键抑制因子 COP1蛋白突变体的二聚体化研究 (PNAS, 2004-101/17, p6798–6802) BRET应用示例－蛋白质相互作用 cytoplasmic localization signal (CLS) 荧光技术利用荧光物质进行特异性标记；特异性好，灵敏度高；特别适合于细胞研究和分子间相互作用研究。发光技术灵敏度超高，特别适合于基因表达和基因调控研究。针对各种光检测技术的Total Solution 通用型检测系统功能全面的滤光片型检测系统独一无二的全光谱扫描型检测系统 384 96 48 24 12 6 1536 从6孔-48孔的细胞培养板、96孔酶标板到384、1536板等高密度筛选板谢谢大家！ haixu_chen@ FP－淀粉酶，SNP FRET－钙流，DNA探针 HTRF－ Lum－钙流，Luciferase，BRET Ns-us 溴化乙锭观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的NDA条带。溴化乙锭可以用来检测单链或双链核酸（DNA或RNA）。但是染料对单链核酸的亲和力相对较小，所以其荧光产率也相对较低。事实上，大多数对单链DNA或RNA染色的荧光时通过染料结合到分子内形成较短的链内螺旋产生的。尽管在该染料存在的情况下，线状DNA的电泳迁移率约降低15%，因此，当需要知道DNA片段的准确大小（如DNA限制酶酶切图谱的鉴定），凝胶应该在无EB情况下电泳，电泳结束后用EB染色。染色