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一种兰花发酵液及其制备方法和应用与流程

花匠小妙招
2024-11-20 10:37

一种兰花发酵液及其制备方法和应用与流程

本技术涉及生物发酵，尤其涉及一种兰花发酵液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、近年来，以兰科植物制备的兰花提取物广泛应用于化妆品领域，具体包括有多种兰花品种，如蝴蝶兰、文心兰、蕙兰等。研究表明，兰科植物的主要护肤美容活性成分有多糖、酚类、生物碱、有机硫化合物及萜烯类挥发性芳香成分等，具有很好的保湿、抗氧化、抗炎、美白、抗衰老、抑菌、赋香等护肤美容功效。

2、蝴蝶兰(phalaenopsis aphrodite rchb.f.)为兰科蝴蝶兰属，原产于亚热带雨林地区，为附生性兰花。蝴蝶兰白色粗大的气根露在叶片周围，除了具有吸收空气中养分的作用外，还有生长和光合作用。新春时节，蝴蝶兰植株从叶腋中抽出长长的花梗，并且开出形如蝴蝶飞舞般的花朵，深受花迷们的青睐，素有“洋兰王后”之称。目前以蝴蝶兰作为原料制备兰花提取物的方法多为醇提或超声波提取等方法，提取方法较为简单，且提取物中的活性物质成分仍有待提高。并且，现有的兰花提取物常存在光照变色等问题。

3、二裂酵母胞溶物(bifida ferment lysate)是经双歧杆菌(bifidobacterium)培养、灭活及分解得到代谢产物、细胞质片段、细胞壁组分及多糖复合体，富含氨基酸、维生素、多肽及矿物质等有多种活性成分，具有捕获自由基、抑制脂质过氧化等生物活性，在改善皮肤微生态与皮肤功能方面具有较好作用，已作为化妆品原料广泛用于相关产品的开发。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种兰花发酵液及其制备方法和应用，首次采用双歧杆菌对蝴蝶兰进行发酵处理，获得了兼具安全性能和抗氧化性能的化妆品原材料，本发明还提供了含有该兰花发酵液的组合物，该组合物体系稳定性好，见光不易分解，能够长期保存。

2、一方面，本技术提供了一种兰花发酵液的制备方法，所述方法包括如下步骤：

3、步骤一、将兰花干燥，粉碎，获得兰花粉末，将所述兰花粉末与培养基混合获得发酵底物；

4、步骤二、将双歧杆菌种子液接种至所述发酵底物中，进行厌氧发酵，获得兰花发酵液；所述双歧杆菌为长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)cicc24935；所述双歧杆菌种子液的od600值为5-6，所述双歧杆菌种子液的接种量为1％-5％。

5、所述双歧杆菌为长双歧杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)cicc24935，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。

6、优选的，所述双歧杆菌种子液的od600值为5.5，经验证，长双歧杆菌长亚种cicc24935的od600值为5.5时其达到对数生长期，菌株活力较高。

7、od600指的是种子液在600nm波长处的吸光值。

8、优选的，所述双歧杆菌种子液的接种量为4％。

9、所述双歧杆菌种子液的培养方法：将长双歧杆菌长亚种cicc24935接种于mrs固体培养基中，温度为37℃、转速为200rpm、ph为6.8，培养至od600值为5.5，大约培养24h。

10、优选的，由于兰花材料中的抗氧化活性物质多为生物酶，多数生物酶在高温环境下容易失活，因此，为最大程度保留兰花材料中的抗氧化成分，所述干燥采用20℃-50℃低温干燥。

11、进一步的，所述厌氧发酵的条件包括：温度为36.5℃-38.5℃，转速为100-200rpm，ph值为5-6，罐压为3×105-4×105pa，时间为36-48h。

12、优选的，所述厌氧发酵的条件包括：温度为37.5℃，转速为150rpm，ph值为5，罐压为3.530×105pa，时间为36h。

13、在一种优选的实施方式中，所述厌氧发酵过程通过通5％接种量的氮气保持厌氧环境。

14、进一步的，所述兰花为蝴蝶兰；优选的，所述兰花为盛开期蝴蝶兰的花瓣。

15、进一步的，所述步骤一中，所述兰花粉末的目数为80-100目；和/或，

16、所述培养基为mrs液体培养基；优选的，所述兰花粉末与培养基的质量比为1：(5-10)。

17、优选的，所述步骤一中，所述兰花粉末的目数为90目；和/或，

18、所述兰花粉末与mrs液体培养基的质量比为1：6。

19、在一种优选的实施方式中，所述兰花粉末与mrs液体培养基的料液比为1g：6ml。

20、进一步的，所述制备方法还包括将所述兰花发酵液于1200-1300mpa进行高压匀浆破碎处理，破碎处理完成后进行过滤；优选的，所述破碎处理的温度不高于25℃；更优选的，所述破碎处理的温度为4℃-25℃。

21、优选的，所述高压匀浆的压力为1300mpa。

22、更优选的，所述破碎处理进行6个循环。

23、更优选的，所述过滤为利用50-220nm膜进行过滤，以去除大分子蛋白和微生物，得到无菌滤液。

24、为最大程度保留兰花发酵液中的抗氧化成分不被高温破坏，所述破碎处理的温度为4℃-25℃。

25、在一种优选的实施方式中，兰花发酵液的制备方法包括如下步骤：

26、步骤一、将蝴蝶兰盛开期花瓣清洗干净后20℃-50℃低温干燥，粉碎至80-100目，获得蝴蝶兰粉末，将蝴蝶兰粉末和mrs液体培养基以料液比为1g:5-10ml的比例混合均匀，获得发酵底物；

27、步骤二、将双歧杆菌种子液(od600值约为5-6)接种到含有发酵底物的发酵罐中，接种量为1％-5％，控制温度在36.5℃-38.5℃，发酵罐转速100-200rpm，控制ph为5-6，发酵过程中通过通接种量为4％-6％的氮气保持厌氧环境，罐压为3×105-4×105pa，厌氧发酵时长为36-48h；

28、步骤三、将发酵结束获得的发酵液利用高压匀浆机进行破碎处理，其中匀浆压力1200-1300mpa，破碎处理3-6个循环，破碎过程中控制温度不高于25℃；将高压匀浆处理后的匀浆液利用50-220nm膜进行过滤去除大分子蛋白和微生物，得到无菌滤液，低温储罐保藏使用，即为蝴蝶兰发酵液。

29、另一方面，本技术提供了一种如上述方法制备的兰花发酵液。

30、另一方面，本技术提供了一种组合物，所述组合物包括如上述的兰花发酵液；优选的，所述组合物还包括依克多因、透明质酸、三肽-1中的一种或多种；更优选的，所述透明质酸的分子量为5000-10000da；更优选的，以质量百分比计，所述组合物包括：10％-20％兰花发酵液、5％-10％依克多因、5％-10％透明质酸、5％-10％三肽-1，余量为水。

31、更优选的，以质量百分比计，所述组合物包括：15％蝴蝶兰发酵液、10％依克多因、10％分子量为5000-10000da的透明质酸、5％三肽-1，余量为水。

32、另一方面，本技术还提供了一种包含如上述的兰花发酵液或如上述的组合物的化妆品，所述化妆品的剂型选自乳剂、水剂、油剂、凝胶中的一种。

33、另一方面，本技术还提供了如上述的兰花发酵液或如上述的组合物或如上述的化妆品在抗氧化、抗衰老和/或美白中的应用。

34、本发明具有如下有益效果：

35、1、本技术中首次采用双歧杆菌(长双歧杆菌长亚种cicc24935)发酵蝴蝶兰，获得了蝴蝶兰发酵液，该发酵液中富含多种抗氧化活性物质，并且还含有双歧杆菌经破碎处理后逸出的二裂酵母(双歧杆菌)胞溶物以及经发酵产生的多种活性物质，总酚含量和β-葡聚糖含量高，具有优异的抗氧化性能；

36、2、本技术中还提供了包含上述蝴蝶兰发酵液的组合物，该组合物体系稳定，见光不易变色，能够长期保存，还具有优异的抗氧化性能和抗老性能，且安全无刺激，能够广泛适应用于化妆品产品的制备和生产中。