高通量筛选及基因组重排选育维吉尼亚霉素高产菌
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目录
第一章 绪论
1．1 维吉尼亚霉素概述
1．1．1 发现与命名
1．1．2 结构特点
1．1．3 理化性质
1．1．5 VGM的作用
1．1．6 VGM的市场现状
1．1．7 VGM的检测
1．2 菌种选育策略
1．2．1 物理诱变
1．2．2 化学诱变
1．2．3 复合诱变
1．2．4 筛选
1．2．5 原生质体融合
1．2．6 基因组重排育种
1．2．7 维吉尼亚链霉菌菌种选育
1．2．8 发酵原料
1．2．9 维吉尼亚链霉菌发酵调控
1．3 本课题研究的意义和主要内容
1．3．1 本课题研究的意义
1．3．2 本课题研究的技术路线及主要内容
第二章 VGM检测方法的研究
2．1 实验材料
2．1．1 菌种
2．1．2 主要试剂
2．1．3 主要仪器
2．1．4 培养基
2．1．5 培养条件
2．2 实验研究方法
2．2．1 检测波长的选择
2．2．2 色谱图
2．2．3 提取溶剂的选择
2．2．4 流动相的选择
2．3．1 检测波长的选择
2．3．2 色谱图
2．3．3 提取溶剂的选择
2．3．4 流动相的选择
2．3．5 方法线性范围
2．4 本章小结
第三章 VGM高产菌株的高通量筛选方法的建立
3．1 引言
3．2 实验方法
3．2．1 菌种
3．2．2 试剂和仪器
3．2．3 微孔板培养器
3．2．4 培养基
3．2．5 培养条件
3．2．6 分析条件
3．3 结果与分析
3．3．1 24微孔板高通量最佳培养体系的确定
3．3．2 深孔板微量培养替代摇瓶培养用于评估VGM产量
3．3．3 深孔板微量培养与摇瓶培养的比较
3．3．4 生物活性检测法可HPLC方法比较用于快速检测VGM
3．3．5 高通量筛选方法进行高产菌的筛选
3．4 本章小结
4．1 前言
4．2 实验材料与方法
4．2．1 菌种
4．2．2 试剂和仪器
4．2．3 培养基
4．2．4 培养条件
4．3 实验方法
4．3．1 维吉尼亚链霉菌种的保藏方法
4．3．2 发酵液中维吉尼亚链霉菌生物量测定方法
4．3．3 发酵液中VGM测定方法
4．3．4 诱变育种方法
4．3．5 筛选方法
4．4 结果与分析
4．4．1 菌种传代培养
4．4．2 硫酸链霉素最小抑制浓度的确定
4．4．3 自然选育筛选VGM高产突变株
4．4．4 超声波诱变育种筛选VGM高产突变株
4．4．5 氮离子束诱变育种筛选VGM高产突变株
4．4．6 微波诱变育种筛选VGM高产突变株
4．4．7 紫外诱变育种筛选VGM高产突变株
4．4．8 传代稳定性试验
4．5 本章小结
4．5．1 出发菌株筛选
4．5．2 超声诱变筛选VGM高产菌株
4．5．3 离子束诱变筛选VGM高产菌株
4．5．4 微波诱变筛选VGM高产菌株
4．5．5 紫外诱变筛选VGM高产菌株
第五章 VGM产生菌的原生质体融合
5．2 材料与方法
5．2．1 菌种
5．2．2 试剂和仪器
5．2．3 培养基
5．2．4 培养条件
5．3 结果与分析
5．3．1 维吉尼亚链霉菌的种子液生长曲线
5．3．2 再生培养基确定
5．3．3 甘氨酸浓度对原生质体形成的影响
5．3．4 原生质体制备与再生最佳条件确定
5．3．5 双灭活对原生质体的影响
5．3．6 PEG浓度对融合率的影响
5．3．7 融合温度对融合率的影响
5．3．8 双灭活的原生质体融合及再生
5．4 本章小结
6．1 前言
6．2 材料与方法
6．2．1 菌种
6．2．2 试剂和仪器
6．2．3 培养基
6．2．4 培养条件
6．2．5 分析条件
6．3 结果与分析
6．3．1 基因组重排亲本的选择
6．3．2 五轮基因组重排提高硫酸链霉素耐受性
6．3．3 五轮基因组重排提高VGM产量
6．3．4 重排菌株G5-103遗传稳定性测定
6．3．5 G5-103与原始菌株菌落形态的比较
6．3．6 重排菌株G5-103摇瓶发酵过程曲线
6．4 本章小结
第七章 结论与展望
7．1 结论
7．2 展望
参考文献
致谢
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