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蕙兰杂交育种的方法.pdf

花匠小妙招
2024-11-23 05:38

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1、(10)申请公布号 CN 102893871 A (43)申请公布日 2013.01.30 C N 1 0 2 8 9 3 8 7 1 A *CN102893871A* (21)申请号 201210408721.7 (22)申请日 2012.10.24 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人泰安市泰山林业科学研究院地址 271000 山东省泰安市泰山区罗汉崖路 1号 (72)发明人王长宪李承秀王厚新王峰孙忠奎孙芳王郑昊张林杜辉王传光 (74)专利代理机构泰安市泰昌专利事务所 37207 代理人姚德昌 (54) 发明名称蕙兰杂交育种的方法 (57) 摘要本发。

2、明公开了一种蕙兰杂交育种的方法，涉及中国兰花的育种领域，针对蕙兰不同的生长阶段选择出适合的培养基组分，以达到最高效的培养效果，节省了成本又提高了成活率，瓶苗的成活率达到94%以上，年生长量达810cm，大大降低了产业化生产育苗周期，另外，对于果实采用75% 酒精杀毒消菌即可达到很好的效果，污染率低，减少了升汞等其他药剂对蒴果的药害作用，操作简单，有利于环保。 (51)Int.Cl. 权利要求书2页说明书7页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 2 页说明书 7 页 1/2页 2 1.一种蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，通过如下步骤实现。

3、：（1）杂交授粉：选择开放 4-7天的蕙兰植株作为母本，取当天开花的蕙兰植株作为父本，取下父本和母本药帽中的花粉，将父本的花粉放入母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去，挂牌注明授粉组合和授粉时间，授粉后遮光 75%， 2426条件下生长，待人工授粉 56个月，子房膨大明显；（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，阴凉处晾干。

4、果实表面水分后，将其放入冰箱低温冷藏处理 23天，处理后的果实用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次，取出其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，并将其置于 2327 下暗培养，种胚开始萌发，所述诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.01.5mg/LNAA、 1.02.0 mg/L6-BA、 100150mg/L 椰汁、 2030g/L蔗糖、 68g/ L琼脂和 1.53g/L活性炭的混合物， PH=。

5、5.50.1；（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中继续繁殖，所述根状茎增殖培养基为 MS、 0.51.5mg/L NAA、 0.10.5mg/L 6-BA、 1.52.0g/L蛋白胨、 2030g/ L蔗糖、 68g/L琼脂和 1.53g/L活性炭的混合物， PH=5.50.1，将处理好的增殖培养基放置在光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养，根状茎快速增殖，继续将增殖后的根状茎进行几次继代培养，得到一定的规模；（4）不定芽诱导 :将增殖后得到的根状茎接到分化培养基。

6、上，使其分化出不定芽，所述分化培养基为 H、 1.02.0mg/LNAA、 2.05.0mg/L6-BA、 2030g/L蔗糖、 68g/L 琼脂和 100120g/L香蕉泥的混合物， PH=5.50.1，将处理好的分化培养基放置在光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养；（5）生根壮苗：当不定芽高度增长到 45cm时将其转移到生根壮苗培养基中，所述生根壮苗培养基为 1/2MS、 0.5 2.0mg/LNAA、 2030g/L蔗糖、 68g/L琼脂和 1.53g。

7、/ L活性炭的混合物， PH=5.50.1，将处理好的生根壮苗培养基置于光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养；（6）炼苗移栽：当幼苗生长到 10cm以上，根多于 3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中 37天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长 25天，即可将其从培养瓶中取出移栽，将组培苗取出移栽时，用甲基托布津溶液 1.10%1.15%浸泡 2040分钟 ,置于营养杯中，用腐殖三年以上的质量比为松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石 =15%:15%:15%:25%:30%的混合物。

8、作为基质填埋；将幼苗上盆之后，放到温室大棚中，保证通风、空气湿度 70 80 %、光线 15002000lx的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴、甲基托布津或苯醚甲环唑，预防病虫害，根据基质的含水量情况来决定喷水量。 2.根据权利要求 1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述的诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.0mg/LNAA、 1.0 mg/L6-BA、 100mg/L 椰汁、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.5。 3。

9、.根据权利要求 1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述根状茎增殖培养基为 MS、 1.0mg/L NAA、 0.5mg/L 6-BA、 1.5g/L蛋白胨、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.5。 4.根据权利要求 1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述分化培养基为 H、 1.0mg/LNAA、 4.0mg/L6-BA、 25g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 100g/L香蕉泥的混合物， PH=5.5。权利要求书CN 。

10、102893871 A 2/2页 3 5.根据权利要求 1所述的蕙兰杂交育种的方法，其特征在于，所述生根壮苗培养基为 1/2MS、 1.0mg/LNAA、 30g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.5。权利要求书CN 102893871 A 1/7页 4 蕙兰杂交育种的方法技术领域 0001 本发明涉及中国兰花的育种领域，具体地说是一种蕙兰杂交育种的方法。背景技术 0002 蕙兰 (Cymbidium faberi)是中国栽培历史最久和最普及的兰花之一，为我国二级重点保护野。

11、生物种。随着各国经济的发展和生活水平的提高，国民对兰花的需求也日益增加。美国、荷兰、日本、韩国等国家相继通过各种技术措施大力发展兰花产业，培育出观赏价值高的品种，带动了经济增长。我国的蕙兰主要集中在南方地区，以挖掘野生兰花资源，并依靠传统的分株方式进行繁殖；我国北方地区蕙兰资源少，传统分株方式繁殖慢，新品种的繁育速度大大落后于其他国家。通过人工杂交以及组织培养的方式可以大大加快。

12、蕙兰繁殖速度，是加快兰花产业化生产的重要途径之一。发明内容 0003 为解决上述存在的技术问题，本发明提供了一种蕙兰杂交育种的方法，根据蕙兰不同生长阶段所需要的生长条件，分阶段解决杂交授粉、果实消毒、原球茎诱导、根状茎增殖、根状茎分化、生根壮苗、幼苗移栽等技术问题，简单高效，易于产业化生产。 0004 为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：本蕙兰杂交育种的方法，通过如下步骤实现：（1）杂交授粉：选择开放 4-。

13、7天的蕙兰植株作为母本，取当天开花的蕙兰植株作为父本，取下父本和母本药帽中的花粉，将父本的花粉放入母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去，挂牌注明授粉组合和授粉时间，授粉后遮光 75%， 2426条件下生长，待人工授粉 56个月，子房膨大明显；（2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，阴凉处晾干果实表面水分后，将其放入冰箱。

14、低温冷藏处理 23天，处理后的果实用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次，取出其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，并将其置于 2327 下暗培养，种胚开始萌发，所述诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.01.5mg/LNAA、 1.02.0 mg/L6-BA、 100150mg/L 椰汁、 2030g/L蔗糖、 68g/ L琼脂和 1.53g/L活性炭的混合物， PH=5.50.1；（3）根状茎增殖：将萌发的原球茎。

15、转移到根状茎增殖培养基中继续繁殖，所述根状茎增殖培养基为 MS、 0.51.5mg/L NAA、 0.10.5mg/L 6-BA、 1.52.0g/L蛋白胨、 2030g/ L蔗糖、 68g/L琼脂和 1.53g/L活性炭的混合物， PH=5.50.1，将处理好的增殖培养基放置在光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养，根状茎快速增殖，继续将增殖后的根状茎进行几次继代培养，得到一定的规模；（4）不定芽诱导 :将增殖后得到的根状茎接到分化培养基上，使其分化出不定芽，所述分。

16、化培养基为 H、 1.02.0mg/LNAA、 2.05.0mg/L6-BA、 2030g/L蔗糖、 68g/L 琼脂和 100120g/L香蕉泥的混合物， PH=5.50.1，将处理好的分化培养基放置在光照说明书CN 102893871 A 2/7页 5 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养；（5）生根壮苗：当不定芽高度增长到 45cm时将其转移到生根壮苗培养基中，所述生根壮苗培养基为 1/2MS、 0.5 2.0mg/LNAA、 2030g/L蔗糖、 68g/L琼脂和 1.53。

17、g/ L活性炭的混合物， PH=5.50.1，将处理好的生根壮苗培养基置于光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养；（6）炼苗移栽：当幼苗生长到 10cm以上，根多于 3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中 37天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长 25天，即可将其从培养瓶中取出移栽，将组培苗取出移栽时，用甲基托布津溶液 1.10%1.15%浸泡半小时左右 ,置于营养杯中，用腐殖三年以上的质量比为松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石 =1。

18、5%:15%:15%:25%:30%的混合物作为基质填埋；将幼苗上盆之后，放到温室大棚中，保证通风、空气湿度 70 80 %、光线 15002000lx的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴、甲基托布津或苯醚甲环唑，预防病虫害，根据基质的含水量情况来决定喷水量。 0005 优选的，所述的诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.0mg/LNAA、 1.0 mg/L6-BA、 100mg/L 椰汁、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.5。 0006 优选的，所述根状。

19、茎增殖培养基为 MS、 1.0mg/L NAA、 0.5mg/L 6-BA、 1.5g/L蛋白胨、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.5。 0007 优选的，所述分化培养基为 H、 1.0mg/LNAA、 4.0mg/L6-BA、 25g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 100g/L香蕉泥的混合物， PH=5.5。 0008 优选的，所述生根壮苗培养基为 1/2MS、 1.0mg/LNAA、 30g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L 活性炭的混合物， PH=5.5。 0009 本发明针对蕙兰不同的生长阶段选择。

20、出适合的培养基组分，以达到最高效的培养效果，节省了成本又提高了成活率，瓶苗的成活率达到 94%以上，年生长量达 810cm，大大降低了产业化生产育苗周期，另外，对于果实采用 75%酒精杀毒消菌即可达到很好的效果，污染率低，减少了升汞等其他药剂对蒴果的药害作用，操作简单，有利于环保。具体实施方式 0010 下面结合具体实施例对本发明进行详细描述：本发明所阐述的蕙兰杂交育种的方法，通过如下步骤实现：（1）杂交授粉：选择开放 47天的蕙兰植株作为母本，取当天开花的。

21、蕙兰植株作为父本，取下父本和母本药帽中的花粉，将父本的花粉放入母本蕊柱先端下侧的蕊腔中。为防止昆虫的再次授粉，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去，挂牌注明授粉组合和授粉时间。授粉后遮光 75%， 2426条件下生长，待人工授粉 56个月，子房膨大明显。 0011 （2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，阴凉处晾干果实表面水分后，将其放入冰箱低温冷藏处理 23天，处理后的果实用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次，将。

22、处理好的果实放入已经灭菌处理带有滤纸的培养皿中，令果实上面的水分被充分吸收。用高温灭菌过刀片沿着果实的棱将其纵切，用镊子将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上。并将其置于 2327下暗培养，种胚开始萌发，出现白色的原球茎，继续培养。所述诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.01.5mg/ L NAA、 1.02.0 mg/L 6-BA、 100150mg/L 椰汁、 2030g/L蔗糖、 68g/L琼脂和说明书CN 102893871 A 3/7页 6 1.53g/。

23、L活性炭的混合物， PH=5.50.1。 0012 （3）根状茎增殖：出现大量的白色原球茎之后，将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中继续繁殖，增大品种规模。所述根状茎增殖培养基为 MS、 0.51.5mg/L NAA、 0.10.5mg/L 6-BA、 1.52.0g/L蛋白胨、 2030g/L蔗糖、 68g/L琼脂和 1.53.0g/ L活性炭的混合物， PH=5.50.1，将处理好的增殖培养基放置在光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室。

24、中培养，根状茎快速增殖，根状茎既多又壮绿，达到分瓶的效果，继续将增殖后的根状茎进行几次继代培养，得到一定的规模。其中 B11、 H和 MS 是基本培养基， NAA为 - 萘乙酸， 6-BA为 6-苄氨基腺嘌呤，下文不再赘述。 0013 （4）不定芽诱导 :将增殖后得到的根状茎接到分化培养基上，使其分化出不定芽，所述分化培养基为 H、 1.02.0mg/LNAA、 2.05.0mg/L6-BA、 2030g/L蔗糖、 68g/L 琼脂和 100120g/L香蕉泥的混合物， PH=5.50.1，将处理好的分化培养基放置。

25、在光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌室中培养，分化培养基中相继分化出不定芽。 0014 （5）生根壮苗：当不定芽高度增长到 4-5cm时将其转移到生根壮苗培养基中，所述生根壮苗培养基为 1/2MS、 0.5 2.0mg/LNAA、 2030g/L蔗糖、 68g/L琼脂和 1.53.0g/L活性炭的混合物， PH=5.50.1，将处理好的生根壮苗培养基置于光照 15002000lx、温度 2327、 1214h/d光照的无菌。

26、室中培养，让其分化出根的同时使叶片更加强壮，使之为适应温室环境打下基础。 0015 （6）炼苗移栽：当幼苗生长到 10cm以上，根多于 3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中 37天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长 25天，即可将其从培养瓶中取出移栽，将组培苗取出移栽时，用甲基托布津溶液 1.12%1.15%浸泡 4060分钟 ,置于营养杯中，用腐殖三年以上的质量比为松针：仙土。

27、：草炭：椰壳：麦饭石 =15%:15%:15%:25%:30%的混合物作为基质填埋，幼苗不可埋的太深，将根部盖起后，添加薄层基质即可。将幼苗上盆之后，放到温室大棚中，保证通风、空气湿度 70%80 %、光线 15002000lx的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴、甲基托布津或苯醚甲环唑，预防病虫害，根据基质的含水量情况来决定喷水量。可使瓶苗的成活率达到 94%，年生长量达 810cm。 0016 实施例 1: 蕙兰（新极品元字）的杂交授粉、种子萌发。

28、以及快速繁育幼苗的方法：（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种新极品与元字，取开放 4天的蕙兰植株作母本，取当天开花的新极品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。24 条件下生长，人工授粉 5个月时子房膨大明。

29、显，结实率 90%。 0017 （2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理 3天。用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于 23下暗培养。诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.0mg/L NAA、 1.0 mg/L 6-BA、 100mg/L 椰汁、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.4，培养 2个月种胚萌发。说明书CN 102893。

30、871 A 4/7页 7 0018 （3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为 MS、 0.5mg/L NAA、 0.2mg/L 6-BA、 1.5g/L蛋白胨、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.6。将处理好的增殖培养基放置在光照 1500lx，温度 25， 12h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到 310%。 0019 （4）不定芽诱导 :增殖 2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为 H、。

31、 1.0mg/LNAA、 2.0mg/L6-BA、 20g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 100g/L香蕉泥的混合物， PH=5.4。将处理好的分化培养基放置在光照 1500lx，温度 24， 13h/d光照的无菌室中培养。分化率达到 85%。 0020 （5）生根壮苗：诱导 3个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高 4cm的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为 100%。生根壮苗培养基为 1/2MS、 1.。

32、0mg/LNAA、 20g/L蔗糖、 8g/L琼脂和 2g/L活性炭的混合物， PH=5.5。将处理好的生根壮苗培养基置于光照 1500lx、温度 23、 12h/d光照的无菌室中培养。 0021 （6）炼苗移栽：当幼苗生长到 10cm，根有多于 3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中 4天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长 3天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用 1.10%甲基托布津溶液侵泡 40分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以。

33、上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石 =15%： 15%： 15%： 25%： 30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度 75%、光线 1500lx的调控，定期喷施抗菌剂百菌清或甲基托布津，预防病虫害，定期施肥（花宝 5号、 KH 2 PO 4 ）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到 95%。 0022 实施例 2: 蕙兰（老极品新上海）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：（1）杂交授粉。

34、：取开花的蕙兰品种老极品与新上海，取开放 6天的新上海植株作母本，取当天开花的老极品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。 26条件下生长，人工授粉 6个月时子房膨大明显，结实率 100%。 0023 （2）无菌播种：蒴果尚未完全成熟时，将果实从果。

35、柄基部剪下，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理 3天。用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于 27下暗培养。诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.2mg/L NAA、 1.5 mg/L 6-BA、 120mg/L 椰汁、 25g/L蔗糖、 8g/L琼脂和 1.5g/L活性炭的混合物， PH=5.5，培养 40天种胚萌发。 0024 （3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为 MS、。

36、 1.5mg/L NAA、 0.3mg/L 6-BA、 1.7g/L蛋白胨、 30g/L蔗糖、 6g/L琼脂和 3g/L活性炭的混合物， PH=5.4。将处理好的增殖培养基放置在光照 1700lx，温度 24， 14h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到 280%。 0025 （4）不定芽诱导 :增殖 2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为 H、 1.5mg/LNAA、 5.0mg/L6-BA、 25g/L蔗糖、 6g/L琼脂说明书CN 102893871 A 5/7页 8 和。

37、120g/L香蕉泥的混合物， PH=5.6。将处理好的分化培养基放置在光照 1700lx，温度 25， 12h/d光照的无菌室中培养。分化率达到 90%。 0026 （5）生根壮苗：诱导 3个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高 5cm的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为 95%。生根壮苗培养基为 1/2MS、 2.0mg/LNAA、 30g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 3g/L活性。

38、炭的混合物， PH=5.6。将处理好的生根壮苗培养基置于光照 2000lx、温度 27、 14h/d光照的无菌室中培养。 0027 （6）炼苗移栽：当幼苗生长到 10cm，根有多于 3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中 5天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长 5天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用 1.13% 甲基托布津溶液侵泡 30分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草炭：椰壳：麦饭石 =15%： 15%： 15%： 25%： 30%的。

39、基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度 70%、光线 2000lx等的调控，定期喷施抗菌剂咯菌晴或甲基托布津，预防病虫害，定期施肥（花宝 5号、 KH 2 PO 4 ）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到 90%。 0028 实施例 3: 蕙兰（新上海大一品）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：（1）杂交授粉：取开。

40、花的蕙兰品种新上海与大一品，取开放 7天的蕙兰大一品做母本，取当天开花的新上海确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。 25条件下生长，人工授粉 160天时子房膨大明显，结实率 95%。 0029 （2）无菌播种：将果实从果柄基部剪下。

41、，清洗果实表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理 3天。用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于 25 下暗培养。诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.5mg/L NAA、 2.0 mg/L 6-BA、 130mg/L 椰汁、 30g/L蔗糖、 6g/L琼脂和 3g/L活性炭的混合物， PH=5.6，培养 50天种胚萌发。 0030 （3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状。

42、茎增殖培养基为 MS、 1.0mg/L NAA、 0.5mg/L 6-BA、 2.0g/L蛋白胨、 25g/L蔗糖、 8g/L琼脂和 1.5g/L活性炭的混合物， PH=5.5。将处理好的增殖培养基放置在光照 2000lx，温度 23， 13h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到 300%。 0031 （4）不定芽诱导 :增殖 2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为 H、 2.0mg/LNAA、 3.0mg/L6-BA、 30g/L蔗糖、 8g/L琼脂和 110g/L香蕉泥的混合物。

43、， PH=5.5。将处理好的分化培养基放置在光照 2000lx，温度 23， 14h/d光照的无菌室中培养。分化率达到 80%。 0032 （5）生根壮苗：诱导 2个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高 4cm以上的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为 88%。生根壮苗培养基为 1/2MS、 0.5mg/LNAA、 25g/L蔗糖、 7g/L琼脂和 1.5g/L活性炭的混合物， P。

44、H=5.6。将处理好的生根壮苗培养基置于光照 1800lx、温度 25、 13h/d光说明书CN 102893871 A 6/7页 9 照的无菌室中培养。 0033 （6）炼苗移栽：当幼苗生长到 10cm，根有多于 3条时，将组培瓶从无菌培养室中取出，封口放置温室中 7天，之后将组培瓶打开，让瓶中的组培苗暴露在空气中生长 2天，即可将其从培养瓶中取出移栽。用 1.15%甲基托布津溶液侵泡 20分钟，置于营养杯中，用腐殖三年以上松针：仙土：草。

45、炭：椰壳：麦饭石 =15%： 15%： 15%： 25%： 30%的基质填埋，将根部恰好填埋之后再添加薄层基质即可，不可埋得太深。将幼苗上盆之后，放到特定环境的温室大棚中，保证通风、空气湿度 70%、光线 1800lx等的调控，定期喷施抗菌剂百菌清或咯菌晴，预防病虫害，定期施肥（花宝 5号、 KH 2 PO 4 ）根据基质的含水量情况来决定喷水量。瓶苗的成活率达到 92%。 0034 实施例 4: 蕙兰（大一品元字）的杂交授粉、种子萌发以及快速繁育幼苗的方法：（1）杂交授粉：取开花的蕙兰品种。

46、大一品与元字，取开放 5天的蕙兰元字植株作母本，取当天开花的大一品确定为父本，分别取下两株中成熟花朵的药帽中的花粉块，把父本的花粉块牢牢粘在母本蕊柱先端下侧的蕊腔中，将授粉过的花朵唇瓣从基部除去。授粉后挂上标签，注明授粉组合，授粉时间。 25条件下生长，人工授粉 165天时子房膨大明显，结实率 100%。 0035 （2）无菌播种：将果实从果柄基部剪下，清洗果实。

47、表面，晾干后将其放入冰箱中进行低温冷藏处理 2天。用 75%的酒精进行表面消毒杀菌 10分钟，再用无菌水冲洗 3次。将其种胚播撒在诱导原球茎的培养基上，置于 25 下暗培养。诱导原球茎的培养基为 B 11 、 1.3mg/L NAA、 1.5 mg/L 6-BA、 150mg/L 椰汁、 20g/L蔗糖、 8g/L琼脂和 2.5g/L活性炭的混合物， PH=5.5，培养 2个月种胚萌发。 0036 （3）根状茎增殖：将萌发的原球茎转移到根状茎增殖培养基中，让其继续繁殖。根状茎增殖培养基为。

48、MS、 1.5mg/L NAA、 0.1mg/L 6-BA、 2.0g/L蛋白胨、 25g/L蔗糖、 6g/L琼脂和 2.5g/L活性炭的混合物， PH=5.6。将处理好的增殖培养基放置在光照 1800lx，温度 27， 13h/d光照的无菌室中培养。增殖率达到 280%。 0037 （4）不定芽诱导 :增殖 2个月即可得到一定规模的根状茎，将其接到分化培养基上，使其分化出不定芽。分化培养基为 H、 1.5mg/LNAA、 4.0mg/L6-BA、 30g/L蔗糖、 6g/L琼脂和 120g/L香蕉泥的混合物， PH=5.6。

49、。将处理好的分化培养基放置在光照 1800lx，温度 27， 12h/d光照的无菌室中培养。分化率达到 90%。 0038 （5）生根壮苗：诱导 2个月之后，分化出大量高低不等不定芽，一部分分化出不定根。将高 5cm以上的不定芽接种的生根壮苗培养中，让其分化出不定根，使叶片生长更壮，生根率为 90%。生根壮苗培养基为 1/2MS、 1.5mg/LNAA、 20g/L蔗糖、 6g/L琼脂和 2.5g/L活性炭的混合物， PH=5.4。将处理好的生根壮苗培养基置于光照 1800lx、温度 25、 13h/d光照的。