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一种包含天女木兰提取物的组合物和抗抑郁产品的制作方法

花匠小妙招
2024-11-23 08:25

1.本发明涉及植物提取物技术领域，尤其涉及一种包含天女木兰提取物的组合物和抗抑郁产品。

背景技术：

2.据世界卫生组织数据显示，抑郁症仅次于艾滋病、心脏病等重大疾病，在全球十大疾病中位居第5位，严重影响人们的生活质量。对于抑郁症，常见的治疗方法中，药物治疗最为广泛，且相对来说效果更好。然而，目前的抗抑郁药物会对胃造成刺激，而且对人体免疫系统也会产生不良影响，给人带来很多副作用，比如头晕、恶心、高血压、便秘等，过量药物可致急性中毒甚至死亡，因此，目前采用药物治疗抑郁症存在较大的风险。
3.非药物治疗主要有芳香疗法等，芳香疗法采用的药用成分主要为植物提取物。采用植物提取物的芳香疗法虽然治疗效果不如药物治疗效果快，但优势在于植物提取物纯天然，安全性高，几乎无药物依赖性、撤药反应等副作用。
4.目前，采用植物提取物的非药物治疗方法治疗抑郁比较罕见。

技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一种包含天女木兰提取物的组合物和抗抑郁产品，该组合物全部为植物提取物，且该组合物抗抑郁效果显著，该组合物可以采用非药物治疗方法治疗抑郁。
6.其具体技术方案如下：
7.本发明提供了一种组合物，天女木兰提取物、红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油。
8.红橘精油具有抗菌、抗氧化、镇静、助消化、抗炎等作用；欧洲赤松精油具有抗菌、抗氧化、抗呼吸系统炎症、促进血液循环抗过敏等作用；柠檬精油具有抗菌、抗氧化、抗癌、防龋、抑制酪氨酸酶活性、降血脂、抗敏等作用；柠檬马鞭草精油具有抗氧化、治疗腹泻，肠胃气胀，失眠及风湿病等作用；佛手柑精油具有降血脂、降血糖、抗菌、抗氧化、抗癌的作用；胶冷杉精油具有缓解呼吸道炎症、止咳化痰、驱虫、抗菌、抗痉挛、抗关节炎、增强免疫的作用；生姜精油具有杀菌、抗风湿病、抗炎、抗血栓、缓解疲劳、活血化瘀、美肤、抗氧化等作用。
9.本发明意外的发现，本发明提供的上述组合物具有抗抑郁作用，其中天女木兰提取物与红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油相互配合，进一步提高了抗抑郁效果。实验证明，相比于未加入天女木兰提取物的组合物，加入了天女木兰提取物的组合物抗抑郁效果显著增强，同时说明天女木兰提取物具有抗抑郁作用。
10.本发明中，天女木兰提取物为天女木兰醇提取物、天女木兰水提物和天女木兰水蒸气蒸馏提取物中的一种或两种以上。
11.优选地，所述天女木兰醇提取物、天女木兰水提物和天女木兰水蒸气蒸馏提取物
均为天女木兰精油。
12.精油是从植物的花、叶、茎、根或果实中萃取的挥发性芳香油脂性液体，具有渗透性强和生物活性多样等特点，不同种类的精油有不同的功效。精油因其本身的天然特性和分子小、易进入人体达到特定效果的优点。因此，本发明所述天女木兰提取物优选为天女木兰精油。
13.本发明中，所述天女木兰提取物的原料取自天女木兰的叶、根、花、果实和茎中的一种或两种以上，优选取自天女木兰叶。因此，本发明所述的天女木兰精油为天女木兰叶精油。
14.本发明中，天女木兰精油的制备方法优选为：
15.取天女木兰粉碎至10
‑
20目，装在3
‑
5个串联水蒸气蒸馏反应釜中，分散均匀，加上网罩，通入水蒸气，打开冷凝器，反应1
‑
2h，收集提取物，分离油和水，得到天女木兰精油。
16.本发明采用急性强迫游泳实验和悬尾实验，利用精油疗法来检测精油对利血平模型小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间的影响。结果显示，相比于未加入天女木兰叶精油的组合物，本发明提供的加入了天女木兰叶精油的组合物可以显著缩短利血平模型小鼠的游泳不动时间和悬尾不动时间。
17.进一步地，本发明采用尼氏染色检测实验小鼠神经元的数目。结果显示，相比于未加入天女木兰叶精油的组合物，本发明提供的加入了天女木兰叶精油的组合物可以显著提高小鼠大脑皮层区、下丘脑区的正常神经元数量。
[0018]5‑
羟色胺受体(5ht
‑
1a)是5
‑
羟色胺的一个受体，5
‑
羟色胺(5ht)脑内一类重要的单胺类神经递质。目前的研究认为，5
‑
羟色胺通过与不同受体亚型结合，发挥各种生理及病理作用，参与了对情绪、焦虑、睡眠、体温、食欲、性行为、运动、心血管功能、痛觉等功能的调制。抗抑郁药通过增加5ht和/或ne水平起作用，这通常是通过抑制5
‑
ht和/或ne转运体发生的。5ht可以与海马体中的5
‑
ht1a、5
‑
ht4和5
‑
ht7突触后受体结合，以及位于海马体神经祖细胞中的5
‑
ht1a受体结合。因此，检测小鼠大脑组织中5
‑
ht1a的表达水平可以确定大脑组织中5
‑
ht的含量，从而确定产品对抑郁小鼠的治疗效果。
[0019]
在正常的生理条件下，糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor，gr)存在于胞浆中，与包括fkbp5在内的复合物结合。在正常hpaa活动下发生的应激反应需要相对低水平的皮质醇来刺激gr
‑
fkbp5复合体中gr的激活和释放。gc
‑
gr复合体转移到细胞核并影响靶基因。这伴随着fkbp5 mrna的诱导和适当的hpaa反馈，而拥有风险等位基因和/或患有慢性压力/抑郁可能会扰乱这一机制。细胞质中fkbp5水平升高导致更高水平的皮质醇将gc
‑
gr复合物从fkbp5中分离出来，从而导致gc
‑
gr活性降低、皮质醇基线水平升高和hpaa反馈异常。因此，检测小鼠大脑组织中gr的表达水平可以确定产品对抑郁小鼠的治疗效果。
[0020]
本发明采用石蜡切片免疫组化检测小鼠大脑组织中5ht
‑
1a蛋白和gr蛋白的表达情况。结果显示，相比于未加入天女木兰叶精油的组合物，本发明提供的加入了天女木兰叶精油的组合物可以显著提高大脑组织中5ht
‑
1a蛋白和gr蛋白的表达。
[0021]
进一步地，本发明还对小鼠造模前后、治疗前后的小鼠体重进行了测试。结果显示，使用本发明提供的加入了天女木兰叶精油的组合物治疗后，可以使造模小鼠体重下跌后较快恢复回来，对造模导致的体重下跌有较好的抵御效果。
[0022]
本发明中，天女木兰提取物、红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精
油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油的体积比为(20～40)：(7～13)：(3～7)：(7～13)：(3～7)：(20～40)：(3～7)：(3～7)，优选为30:10:5:10:5:30:5:5、40:13:7:13:7:40:7:7或20:7:3:7:3:20:3:3。
[0023]
本发明还提供了一种组合物的制备方法，包括以下步骤：将天女木兰提取物、红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油混合即得。
[0024]
本发明还提供了上述组合物或制备方法制得的组合物在制备抗抑郁产品中的应用。
[0025]
本发明还提供了一种抗抑郁产品，包括上述组合物或上述制备方法制得的组合物。
[0026]
本发明中，所述抗抑郁产品的给药方式为嗅吸、涂抹或香薰，优选为嗅吸。
[0027]
本发明中，所述组合物在抗抑郁产品中的质量含量为0.001％～10％，优选为。
[0028]
本发明中，所述抗抑郁产品为日化产品。所述日化产品优选为化妆品、护肤品或洗护用品，具体为爽肤水、乳液、精华、面霜、精油、洗发水和护发素、香薰、蜡烛等。
[0029]
本发明中，所述抗抑郁产品中组合物的有效剂量为625～2500μl/天/kg，优选为2500μl/天/kg。
[0030]
从以上技术方案可以看出，本发明具有以下优点：
[0031]
本发明提供了一种组合物，该组合物中天女木兰提取物具有抗抑郁作用，天女木兰提取物与红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油相互配合，协同作用，进一步提高了抗抑郁效果。由本发明实验结果可知，包含有天女木兰提取物的组合物可以有效缩短抑郁小鼠的fts不动时间和tst不动时间，提高大脑组织神经元的数量，提高与抗抑郁相关蛋白的表达量，具有优异的抗抑郁功效。
附图说明
[0032]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0033]
图1为本发明实施例提供的抗抑郁
‑
fst不动时间的柱状图；
[0034]
图2为本发明实施例提供的抗抑郁
‑
tst不动时间的柱状图；
[0035]
图3为本发明实施例提供的各组小鼠脑组织尼氏染色神经元显微镜图(标尺为50μm)；
[0036]
图4为本发明实施例提供的各组小鼠大脑皮层区正常神经元数目统计图；
[0037]
图5为本发明实施例提供的各组小鼠下丘脑正常神经元数目统计图；
[0038]
图6为本发明实施例提供的各组小鼠大脑组织免疫组化切片中5ht
‑
1a蛋白表达显微镜图(标尺为50μm)；
[0039]
图7为本发明实施例提供的各组小鼠大脑海组织免疫组化切片中5ht
‑
1a蛋白表达柱状图；
[0040]
图8为本发明实施例提供的各组小鼠大脑组织免疫组化切片中gr蛋白表达显微镜
图(标尺为50μm)；
[0041]
图9为本发明实施例提供的各组小鼠大脑组织免疫组化切片中gr蛋白表达柱状图；
[0042]
图10为本发明实施例提供的各组小鼠体重变化折线图。
具体实施方式
[0043]
为使得本发明的发明目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而非全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0044]
本发明实施例中，欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油购自雅琪实业(上海)有限公司、红橘精油和佛手柑精油购自重庆正元商贸有限公司、胶冷杉精油购自广州贝捷肽生物科技有限公司、生姜精油购自广州立颖贸易有限公司。
[0045]
实施例1
[0046]
本实施例为精油组合物的制备
[0047]
本实施例采用专利cn 105708760 a天女木兰提取液作为抑菌剂的用途中实施例1的制备方法制备天女木兰叶精油，具体制备步骤如下：取天女木兰叶粉碎至20目，装在4个串联水蒸气蒸馏反应釜中，分散均匀，加上网罩，通入水蒸气，打开冷凝器，反应1h，收集提取物，分离油和水，得到天女木兰叶提取精油。
[0048]
实施例2
[0049]
将天女木兰叶精油、红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油分别以40:13:7:13:7:40:7:7、30:10:5:10:5:30:5:5、20:7:3:7:3:20:3:3的比例混合，得到精油组合物，分别记为测试组合物1、测试组合物2和测试组合物3。
[0050]
对比例1
[0051]
本对比例为精油组合物的制备，具体制备步骤如下：
[0052]
将红橘精油、欧洲赤松精油、柠檬精油、柠檬马鞭草精油、佛手柑精油、胶冷杉精油和生姜精油按质量比10:5:10:5:30:5:5的比例调制得到精油组合物。
[0053]
实施例3
[0054]
本实施例为利血平诱导建立急性抑郁症造模小鼠模型
[0055]
原理:利血平通过消耗脑组织中的儿茶酚胺和5
‑
羟色胺(5
‑
hydroxytryptamine，5
‑
ht)贮存来抑制中枢神经系统活动，可引起啮齿类动物体温下降、上眼睑下垂、快感缺失、体质量减轻、运动能力减弱等。
[0056]
造模：5周龄雄性km小鼠(30
±
5g)适应性饲养一周后开始造模。利血平现配现用，配制浓度是0.6mg/ml，除空白对照组外，其余组按小鼠体重0.1ml/10g用量进行腹腔注射，给药剂量为6mg/kg。小鼠单次给予腹腔注射利血平(6mg/kg)，此剂量导致抑郁症状在注射后持续72小时。空白组在同一天给予dmso/生理盐水i.p.注射，第二天进行行为试验，即强迫游泳试验(fst)尾部悬挂试验(tst)。经过刺激后，与正常和造模前小鼠相比，小鼠悬尾测试实验和强迫游泳实验不动时间百分比应显著延长，体质量显著降低或无明显差异，血清
5
‑
ht浓度显著下降，表明抑郁造模成功。
[0057]
给药：空白组小鼠未建立利血平抑郁模型，将利血平抑郁小鼠随机分为6组，实验组动物嗅闻相同浓度的实施例2制得的测试组合物，记为实验组1、实验组2和实验组3，小鼠吸入体积为2500μl/天/kg；对照组小鼠闻嗅对比例1精油组合物，小鼠吸入体积为2500μl/天/kg，空白组和利血平抑郁模型组小鼠吸入含1％tween80的生理盐水，体积均为2500μl天//kg，每组中每只小鼠每天嗅闻30分钟，阳性组小鼠在行为学测试前30min时注射盐酸氟西汀溶液，使用剂量为20mg/kg。
[0058]
实施例3
[0059]
本实施例进行强迫游泳测试(fst)
[0060]
将小鼠放入直径为25cm，高30cm的透明玻璃水缸里，内注有15cm高的水，水温为21～25℃，总记录时间为360s，记录的数据为120～360s时间内，小鼠漂浮不动或轻微肢体活动的时间百分比，用来反映小鼠的无助程度。
[0061]
从表1可以看出，实验组1～3提供的含天女木兰叶精油的精油组合物均可以显著缩短小鼠的游泳不动时间，其中实验组2效果最佳，因此，本发明采用实验组2与其它各组进行比对，并进行后续实验。。
[0062]
图1为本实施例抗抑郁
‑
fst不动时间的柱状图(与模型组相比，*p<0.05，表示显著，**p<0.01表示极显著)。由图1可知，相比于模型组，阳性组、对照组、空白对照组和实验组2小鼠的游泳不动时间都有了明显的缩短，其中，实验组2的抗抑郁
‑
fst不动时间小于对照组，效果更优。
[0063]
表1
[0064] 实验组1实验组2实验组3fst不动时间70.12
±
2.1365.25
±
3.5669.08
±
4.26
[0065]
实施例4
[0066]
本实施例进行悬尾测试(tst)
[0067]
悬尾实验也是绝望模型中的一种，它的作用机理与强迫游泳类似，也是提供一个避无可避的绝望环境，观察小鼠处于此绝望环境中的状态来判断小鼠是否产生抑郁样症状。固定小鼠尾部使其处于倒悬状态，保持6min，并且记录下后4min内小鼠停止挣扎，保持静立不动的时长，测定指标为悬挂时静止不动的时间百分比，以此反映小鼠无助程度。
[0068]
从表2可以看出，实验组1～3提供的含天女木兰叶精油的精油组合物均可以显著缩短小鼠的悬尾不动时间，其中实验组2效果最佳，因此，本发明采用实验组2与其它各组进行比对，并进行后续实验。
[0069]
图2为本实施例抗抑郁
‑
tst不动时间的柱状图(与模型组相比，*p<0.05，表示显著，**p<0.01表示极显著)。由图2可知，相比于模型组，阳性组、对照组、实验组2和空白组的小鼠的悬尾不动时间都有明显的缩短，其中，实验组2的抗抑郁
‑
tst不动时间小于对照组，效果更优。
[0070]
表2
[0071] 实验组1实验组2实验组3tst不动时间122.54
±
13.48117.5
±
20.32126.35
±
16.59
[0072]
实施例5
[0073]
本实施例采用尼氏染色检测各组小鼠神经元数量
[0074]
1、石蜡切片烤片：将恒温干燥箱的温度设置为60℃，烤片15min；
[0075]
2、二甲苯脱蜡：组织切片依次放入二甲苯i和二甲苯ii中，各20min；
[0076]
3、梯度酒精至水：按照从高到低的浓度，将切片依次放入100％乙醇i和100％乙醇ii，各10min；再放入95％乙醇、90％乙醇、80％乙醇和70％乙醇，各5min；
[0077]
4、自来水清洗1次(2min/次)；双蒸水清洗2次(2min/次)；
[0078]
5、甲苯胺蓝染液：10min；
[0079]
6、染色结束后，进行水洗终止染色：自来水清洗1次(2min/次)；双蒸水清洗2次(2min/次)；
[0080]
7、酒精脱水：依次放入70％乙醇、95％乙醇和100％乙醇，各5min；
[0081]
8、二甲苯透明：15min；
[0082]
9、显微镜镜检，图像采集分析。
[0083]
图3为本实施例各组小鼠脑组织尼氏染色神经元显微镜图；图4为本实施例各组小鼠大脑皮层中正常神经元数目统计图(与模型组相比，*p<0.05，表示显著，**p<0.01表示极显著)；图5为本实施例各组小鼠下丘脑中正常神经元数目统计图。由图3～5可知，相比于空白对照组，利血平造模后，模型组小鼠的大脑皮层和下丘脑区中的神经元数目有着较为明显的削减；相比于模型组，阳性对照组、对照组和实验组2小鼠的下丘脑区中的神经元数目均有所增加，尤其实验组2在大脑皮层尤为显著，且在大脑皮层和下丘脑区，实验组2的神经元数目均高于对照组。
[0084]
实施例6
[0085]
本实施例为石蜡切片免疫组化检测各组小鼠大脑组织中5ht
‑
1a蛋白和gr蛋白的表达情况
[0086]
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯ⅰ15min
‑
二甲苯ⅱ15min
‑
二甲苯iii 15min
‑
无水乙醇ⅰ5min
‑
无水乙醇ⅱ5min
‑
85％酒精5min
‑
75％酒精5min
‑
蒸馏水洗。
[0087]
2、抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液(ph6.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于pbs(ph 7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
[0088]
3、阻断内源性过氧化物酶：切片放入3％双氧水溶液，室温避光孵育25min，将玻片置于pbs(ph7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
[0089]
4、血清封闭:在组化圈内滴加3％bsa均匀覆盖组织，室温封闭30min。(一抗是ft羊来源的用兔血清封闭，其他来源的用bsa封闭)
[0090]
5、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加pbs按一定比例配好的一抗(5ht1areceptor antibody，af5453,稀释比ihc 1:50
‑
1:200；anti
‑
glucocorticoid receptor rabbit pab，gb11296,稀释比ihc 1:1000
‑
1:3000)，切片平放于湿盒内4℃孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
[0091]
6、加二抗：玻片置于pbs(ph 7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗(hrp标记的山羊抗兔igg，gb23303,稀释比ihc 1:200
‑
1:500)覆盖组织，室温孵育50min。
[0092]
7、dab显色：玻片置于pbs(ph7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍
甩干后在圈内滴加新鲜配制的dab显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
[0093]
8、复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。
[0094]
9、脱水封片：将切片依次放入75％酒精5min
‑
85％酒精5min
‑‑
无水乙醇15min
‑
无水乙醇ⅱ5min
‑
二甲苯ⅰ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
[0095]
10、显微镜镜检，图像采集分析。
[0096]
图6为本实施例各组小鼠大脑组织中免疫组化切片中5ht
‑
1a蛋白表达显微镜图；图7为本实施例各组小鼠大脑组织免疫组化切片中5ht
‑
1a蛋白表达柱状图(与模型组相比，*p<0.05，表示显著，**p<0.01表示极显著)。从图6和图7可知，经利血平造模后，模型组小鼠大脑组织中5ht
‑
1a表达量显著降低。相比于模型组，阳性对照组、对照组和实验组2小鼠大脑组织中5ht
‑
1a表达量均不同程度的升高。其中，实验组2在海马区和下丘脑区5ht
‑
1a的表达量均显著高于模型组，且均高于对照组。
[0097]
图8为本实施例各组小鼠大脑组织免疫组化切片中gr蛋白表达显微镜图；图9为本实施例各组小鼠大脑组织免疫组化切片中gr蛋白表达柱状图(与模型组相比，*p<0.05，表示显著，**p<0.01表示极显著)。从图8和图9可知，经利血平造模后，模型组小鼠大脑组织中gr表达量明显降低。相比于模型组，阳性对照组、对照组和实验组2小鼠大脑组织海马区和下丘脑中gr表达量均不同程度的升高，大脑皮层区最为显著。实验组2对小鼠大脑组织中gr表达量的提升最显著。在大脑皮层和下丘脑中，实验组2gr表达量均高于对照组。
[0098]
实施例7
[0099]
分别于造模前、造模后、治疗后，记录各组小鼠体质量变化情况，以反映造模前、造模后、治疗后小鼠的生理情况变化。将收集到的数据绘制成体质量变化率的折线图，折线图如图10所示。
[0100]
图10为本实施例各组小鼠体重变化折线图。从图10可以看出，相比于空白组，利血平造模后，小鼠体重显著降低；相比于模型组，采用阳性组盐酸氟西汀、对照组和实验组2精油治疗后，小鼠的体重折线出现不同程度的回升。其中实验组2能使造模小鼠体重下跌后较快恢复回来，对造模导致的体重下跌有较好的抵御效果。
[0101]
以上所述，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。