侵染百合和水仙的部分线状植物病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗血清制备及检测应用
侵染百合和水仙的部分线状植物病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗血清制备及检测应用
【摘要】： 由于长期的无性繁殖,造成植物病毒在水仙和百合中大量积累,是造成水仙和百合商业价值损失的重要原因,线状植物病毒对这两种作物影响尤其严重,其中侵害水仙的线状病毒主要有水仙黄条病毒(Narcissus yellow stripe virus,NYSV)、水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus,NMV)、水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus,NLV)、水仙普通潜隐病毒(Narcissus common latent virus,NCLV)、水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus,NDV)、虎年万年青花叶病毒(Ornithogalum mosaic virus,OrMV)和水仙迟黄病毒(Narcissus late season yellows virus,NLSYV)等;侵害百合的线状病毒主要有百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)、百合X病毒(Lily virus X,LVX)和百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)等。这些病毒往往复合侵染,难于分离。研究这些病毒间的血清学关系,建立相关的检测体系,有助于对病毒病害的防治。 根据已发表的序列,设计NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV的CP特异表达引物,应用RT-PCR和PCR技术扩增了NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV的全长CP基因,并将这些DNA片段克隆至载体pGEM-T,序列分析表明成功获得相对应的全长CP基因。将各CP基因插入原核表达载体pSBET后,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中进行原核表达。SDS-PAGE分析表明,各CP基因在大肠杆菌中高效表达,表达产物分子量大小与预期相符。目的蛋白切胶后免疫小鼠制备多克隆抗体。Western-blot检测表明获得的各CP抗血清与目的蛋白起特异反应,与阴性对照无反应,表明抗血清具有很强的特异性。 进一步研究NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV外壳蛋白之间的血清学关系表明,NYSV、NCLV和OrMV之间没有交叉血清学反应,LMoV、LVX和LSV之间也没有交叉血清学反应。以上病毒CP抗血清分别与同属部分病毒CP之间的血清学研究表明,NYSV外壳蛋白抗血清与同属的ScaMV、TuMV、ZYMV和DsMV外壳蛋白有较弱的反应,OrMV、NCLV、LMoV、LSV和LVX与被测试的同属病毒的CP之间无血清学反应。 用制备的NYSV、NCLV、OrMV、LMoV、LVX和LSV的CP抗血清,对田间栽种的水仙和百合样品进行ELISA检测,表明NYSV、NCLV、OrMV、LMoV和LSV均有发生,但没有检测到LVX。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
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