万寿菊雄性不育两用系苗期分子标记及应用
万寿菊雄性不育两用系苗期分子标记及应用
【摘要】： 本文以青海大学高原花卉研究中心提供的万寿菊雄性不育两用系为材料,利用RAPD、ISSR、SRAP三种分子标记筛选与万寿菊雄性不育基因相关的分子标记,然后转化成稳定的SCAR标记,将SCAR标记用于两用系苗期鉴定。主要研究结果如下:(1)以万寿菊雄性不育两用系2-2的不育单株DNA为试验材料,结合单因素优化和L16(45)正交设计,建立并优化了万寿菊雄性不育两用系的RAPD-PCR扩增体系。用200条RAPD引物对两用系2-2的可育和不育基因池进行了PCR扩增,没有筛选出在可育和不育中具有差异性条带的引物。(2)用20条ISSR引物对两用系2-2的可育和不育基因池进行了PCR扩增,从中筛选出3条在可育和不育之间扩增出差异条带的引物,即I1、I7、I15。(3)以万寿菊雄性不育两用系2-2的不育单株DNA为试验材料,采用单因素和L16(45)正交设计对影响SRAP-PCR反应体系的五个参数进行筛选,在此基础上对退火温度进行优化,得到了最佳的SRAP-PCR反应体系和扩增程序。利用209对SRAP引物组合对两用系2-2可育和不育花器官DNA进行SRAP-PCR扩增,筛选出4对在两用系可育和不育之间扩增出差异条带的引物组合,即me1+em5、me2+em18、me5+em1、me5+em11。(4)将筛选出的差异引物的特异片段进行回收、转化和测序,其中包括6条ISSR特异片段,4条SRAP特异片段。通过测序,获得5个ISSR特异片段的序列,4个SRAP特异片段的序列。根据获得的序列,设计得到17对SCAR引物,仅1对引物(F13R13)在可育和不育之间扩增出差异条带,表现为可育有,不育无;用F13R13对2-2两用系进行育性验证,以花器官为材料,该差异性条带在4个不育株均缺失,以叶片为材料,可育和不育株各24株,该差异性条带在1个不育株缺失,在不育株中的准确率达到了95.8%,因此F13R13可以作为检测标记。
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
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