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分子标记技术及其应用课件.ppt

花匠小妙招
2024-11-23 16:15

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1、分子标记技术及其应用分子标记技术及其应用遗传标记主要有四种类型:形态标记（morphological marker）细胞标记（cytological markers）生化标记（Biochemical marker）分子标记（molecular marker）分子标记的优越性：直接以DNA形式出现，生物体的各个组织、各发育时期均可检测到，不受季节、环境的限制，不存在表达与否的问题；数量极多，遍及整个基因组；多态性高，利用大量引物、探针可完成覆盖基因组的分析；表现为中性，即不影响目标性状的表达，与不良性状无必然的连锁；许多标记为共显性。1.几种常用的分子标记技术几种常用的分子标记技术基于基于S

2、outhern杂交的分子标记杂交的分子标记基于基于PCR技术的分子标记技术的分子标记 1.1 基于基于Southern杂交的分子标记杂交的分子标记限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism）小卫星小卫星DNA（Minisatellite DNA）1.1 基于基于Southern杂交的分子标记杂交的分子标记限制性片段长度多态性，简称RFLP 优点：稳定，是一种共显性标记，可区分纯合体与杂合体。缺点：分析所需DNA量较大，步骤较多，周期长，制备探针及检测中要用到放射性同位素 Restriction fragmen

3、t length polymorphism analysis RFLP Based on the mutations RFLP 1.1 基于基于Southern杂交的分子标记杂交的分子标记小卫星小卫星DNA又称数目可变串联重复序列又称数目可变串联重复序列（Variable Number of Tandem Repeat，VNTR）是一种重复）是一种重复DNA小序小序列，为列，为10-几百核苷酸，拷贝数几百核苷酸，拷贝数10-10000不等。不等。缺点：多态性分布集中，合成探针困难，应用并不广泛。Genetic fingerprinting Parents and offspring have

4、 similar genetic fingerprints 1.2 基于基于PCR技术的分子标记技术的分子标记随机扩增片段长度多态性随机扩增片段长度多态性DNADNA （Random Random Amplified Polymorphic DNAAmplified Polymorphic DNA）特异性扩增子多态性（特异性扩增子多态性（Specific Amplificon Specific Amplificon PolymorphismPolymorphism，SAPSAP）简单重复序列（简单重复序列（Simple Sequence RepeatSimple Sequence Repea

5、t，SSRSSR）扩增片段长度多态性（扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Amplified Fragment Length PolymorphismLength Polymorphism，AFLPAFLP）1.2 基于基于PCR技术的分子标记技术的分子标记随机扩增片段长度多态性DNA，简称RAPD技术是由Williams和Welsh（1990）同时发展起来的一项遗传标记技术。RAPD一般采用10个核苷酸的DNA序列为引物，扩增时退火温度降至35左右。RAPD标记 1.2 基于基于PCR技术的分子标记技术的分子标记 RAPD的优点：无种属特异性适合于自动化分析不需

6、制备探针、杂交等程序，成本较低。DNA用量少，允许快速、简单地分离基因组DNA。1.2 基于基于PCR技术的分子标记技术的分子标记 RAPD缺点：是一种显性标记稳定性较差 1.2 基于基于PCR技术的分子标记技术的分子标记特异性扩增子多态性（Specific Amplificon Polymorphism，SAP）或称序标位（Sequence Tagged Sites，STS）包括以下两种：酶切扩增多态性序列（Cleaved Amplified Polymorphic Sequence，CAP）序列特异性扩增区（Sequence-characterized Amplified Region，SCAR）和位点特异相关引物（AlleleSpecific Associated Primers，ASAP）CAP 标记 Indica (1)CGGCATATGCTATTTTCTTTGCATCTTTTAACTCTTTATGGTTCTCTCAT Japonica(1)CGGCATATGCTATTTTCTTTGCATCTTTTAACTCTTTATGGTTCTCTCAT Indica (51)TACT