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植物组织培养实验室具体组成、仪器设备及基本操作精要.ppt

花匠小妙招
2024-11-23 19:55

（2）MS培养基母液的配制： MS培养基母液根据试剂特性通常配成四种母液，即大量元素母液（10或20倍）、微量元素母液（100或1000倍）、Fe盐（100倍）、有机物（100倍）。配置前先进行根据培养基组成和配制体积计算母液试剂用量，然后称取药品，大量元素可以用百分之一或千分之一天平，微量元素，铁盐和有机物用万分之一天平称量。（3）激素母液的配制：根据各种激素的使用浓度配制适宜的母液，用万分之一天平称取激素，溶剂溶解后加水定容。生长素类、赤霉素类及脱落酸等用95％乙醇溶解；细胞分裂素类用1N HCl或1N NaOH溶解。通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细胞分裂素母液浓度为0.2~1.0 mg/ml. 四、培养基的配制：量取母液：营养元素和激素。称量蔗糖、琼脂，放入600ml左右蒸馏水的锅内，电路上加热，使琼脂溶化。加入母液，混合均匀，调整pH值。四、培养基的配制：量取母液：营养元素和激素。称量蔗糖、琼脂，放入600ml左右蒸馏水的锅内，电路上加热，使琼脂溶化。加入母液，混合均匀，调整pH值。封口：用4－6层称量纸或瓶盖封口，之后灭菌备用。分装入瓶，每瓶40－50ml。五、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）： 1、加热：灭菌前检查灭菌锅内水量是否充足，然后将培养基放于灭菌锅内，改好盖，关闭放气阀，打开电源，加热升温。 2、排气：当温度升至0.5kg/cm(100 0C)时，打开放气阀彻底排出锅内冷空气。然后关闭放气阀，促使压力继续上升。 3、温度控制：当锅内压力升至1.1kg/cm2(121oC)时，计时15－20分钟，计时结束后，关闭电源。 4、出锅：当灭菌锅自然冷却后，取出培养基，放置于接种室备用。 * * 这节课微量元素中，铁的用量较大，它对叶绿素的合成起重要作用，由于在较高pH下，FeCl3极易形成Fe（OH）3沉淀，难以被吸收，所以多用乙二胺四乙酸二钠盐与硫酸亚铁形成的螯合物，并且单独配制。（二）有机成分：主要包括各种维生素和氨基酸常用的维生素：硫胺素（VB1）、吡哆醇（VB6）、烟酸（VB3）、泛酸钙（VB5）、生物素、钴胺素（VB12）、叶酸等。常用的氨基酸：甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、丙氨酸等。有时添加水解乳蛋白或水解酪蛋白，为牛乳经酶法加工的水解产物，含有20种氨基酸的混合物，用量10－1000mg/L, 通常用于原生质体等培养。此外肌醇是另外一种重要的有机成分，在维持离子平衡，糖类的转化中起重要作用，此外还参与磷脂代谢及等生理作用。它可以促进愈伤组织的形成，不定芽、不定胚的分化。（三）植物生长调节物质：植物激素是植物代谢中产生的天然化合物，它能直接影响植物细胞的分化、分裂以及影响植物的形态建成、开花、结实、成熟、衰老脱落、休眠、萌发等生理活动。在植物组织培养中，主要通过植物激素及生长调节物质对离体的组织、器官的形态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚胎发生等。常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物激素： 1、生长素类： 2、细胞分裂类： 3、赤霉素类： 4、脱落酸： 5、多胺 6、乙烯： 1、生长素类：组织培养中的功能是：促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形成愈伤组织，促进生根。常用的有NAA、IAA、IBA、2,4－D等。 2、细胞分裂素类：功能：诱导芽的分化、促进侧芽萌发；促进细胞分裂和扩大，促进茎增粗，抑制茎伸长；延缓衰老。常用细胞分裂素有BA、KT、ZT、2ip等。此外近年来发现苯基脲衍生物具有非常高的细胞分裂素活性，在多种植物上应用。如TDZ，CPPU，4－PU等。 3、赤霉素类：主要具有诱导茎的细胞伸长，对根无效；对形成层细胞分化有影响，与生长素协同作用；可以诱导离体成花；打破休眠等功能。常用GA3、GA4等。 4、脱落酸（ABA）：促进休眠、衰老和脱落。组织培养中较少使用，主要用于种质资源的离体保存。 5、乙烯：主要促进衰老和脱落，高浓度易形态变化。（四）碳源：碳源主要为细胞提供合成新化合物的骨架，为细胞的呼吸代谢提供底物与能源，此外还能维持一定的渗透压。常用的碳源主要是蔗糖，使用浓度在10－50g/L，此外果糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物组织培养。（五）琼脂：琼脂作为固化剂用于组织培养中，起支持植物的作用，不提供营养，为海藻中提取的一种高分子化合物