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Nature丨组织透明化方法“wildDISCO” 实现使用标准IgG抗体进行小鼠全身细胞定位

花匠小妙招
2024-11-24 11:57

2024-03-21 17:51 点击次数：493 关键词：组织透明化细胞定位 DISCO 标记 LYVE-1

文章摘要

在探索生理系统保持健康与驱动疾病之间的相互作用方面，全身成像技术发挥着至关重要的作用。

文献截图

wildDISCO，一种用于小鼠全身免疫标记、光学透明和成像的新方法，绕过了转基因报告动物或纳米体标记的需要，从而克服了现有的技术限制。

wildDISCO开发
探讨环糊精作为常规全身IgG抗体染色剂的作用。

CD5可显著增强组织通透性

比较不同透明方法对小鼠全身抗体染色的影响。

采用wildDISCO、vDISCO、iDISCO、uDISCO和PEGASOS方法分别对小鼠全身进行synapsin 1抗体染色的光学二维光片显微镜图像。

使用wildDISCO对整个小鼠身体进行全面的神经解剖和淋巴制图小鼠的整个内脏器官

绘制小鼠后肢(f)和脊髓(g)的二维光学图像

wildDISCO用于小鼠全身的标记

使用wildDISCO对整个小鼠身体进行全面的神经解剖和淋巴制图

深度彩色编码显示（泛神经元标记PGP9.5）神经元在2.0 cm厚全鼠体内不同z级的投影。比例尺，2000 μm。

光学二维切片显示PGP9.5+神经支配多脏器 （比例尺，1200 μm）

为了显示该方法的普遍性，我们还使用淋巴管内皮透明质酸受体1 (LYVE-1)绘制了整个小鼠体内的淋巴系统。

用淋巴管标记物LYVE1染色的整只小鼠(黄色)

wildDISCO兼容双重标签。

全鼠TH (绿色)和LYVE1(黄色)染色。比例尺，3000 μm。

不同生理系统wildDISCO染色

用抗TH抗体(绿色)和免疫细胞标志物CD45(品红)染色的小鼠的最大强度投影，显示了内脏器官中神经免疫相互作用的图景。

不同生理系统wildDISCO染色

通过对比无菌小鼠和野生型对照的神经系统结构，发现4周龄无菌小鼠肠壁的PGP 9.5+神经晶格网络密度明显低于野生型小鼠。

揭示三级淋巴结构TLS和稀有细胞

为了观察肿瘤转移的全身TLS, BALB/c小鼠皮下植入4T1乳腺癌细胞。14天后使用wildDISCO进行CD23(常规B细胞和滤泡树突状细胞标记物)和CD3 (T细胞标记物)抗体对TLS染色。值得注意的是，没有合适的方法报告小鼠(如CD23+))可以标记TLS。wildDISCO成为研究TLS及其在整个小鼠中的分布的方法。

使用wildDISCO进行Ki67抗体标记来研究罕见增殖细胞在小鼠体内的分布。结论是wildDISCO可以深入了解稀有细胞的分布，包括在整个小鼠体内的增殖细胞。

利用wildDISCO和深度学习
对肿瘤转移模型中肿瘤相关TLS的可视化分析

总结

总之，wildDISCO是一种全身IgG抗体免疫标记方法，使研究人员能够获得整个小鼠身体的全面的细胞和结构图像。在虚拟现实 (VR)可视化的帮助下，把以前无法获得的3D解剖信息变为可能。通过使用现成的IgG抗体， wildDISCO扩大了全身透明化和成像技术的适用性。我们对整个小鼠身体图谱的展示，将使我们能够更深入地了解复杂的生物系统。从这项技术中获得的见解有可能增强我们在整个生物体水平上对疾病发生、进展和程度的认识，最终有助于开发更有效的诊断和治疗策略。