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康乃馨培养.doc

花匠小妙招
2024-11-25 11:51

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1、康乃馨离体繁殖一、康乃馨简介1、康乃馨（学名：Dianthus caryophyllus），为石竹科、石竹属植物，分布于欧洲温带以及中国大陆的福建、湖北等地，原产于地中海地区，是目前世界上应用最普遍的花卉之一。康乃馨包括许多变种与杂交种，在温室里几乎可以连续不断开花。1907年起，开始以粉红色康乃馨作为母亲节的象征，故今常被作为献给母亲的花。2、其常规繁殖方法为侧枝扦插繁殖，但是长期的扦插繁殖导致病毒病害严重，造成切花质量变劣，产量降低，康乃馨茎尖组织培养能够脱毒病毒，获得无毒苗。茎尖组织培养与脱毒苗生产已成为康乃馨种苗繁殖的主要技术。二、前期准备1、实验室一般有准备实验室、无菌操作室、培养

2、室组成、准备实验室：洗涤玻璃器皿、配置培养基和高温高压消毒培养基及其他用具。、无菌操作室：这里要求洁净无尘土和微生物，一般需要配备紫外线灯和空调，其最主要设备为超净工作台。、培养室：主要设备有培养架、光照培养箱、摇床、光控控制仪、空调和除湿器等，其功能是为培养物提供生长所需的环境，其能根据植物需要调节24h的光照和温度2、培养基培养基一般包含六种成分：水、无机成分、有机成分、植物生长调节剂、凝胶剂。本实验所用的为培养基的典型代表MS培养基。3、表面消毒剂的种类及使用消毒剂使用浓度/%消毒时间/min消毒效果次氯酸钠次氯酸钙过氧化氢溴水硝酸银氯化汞抗生素20910 10121210.11450

3、mg/L5305305152105302103060很好很好好很好好最好相当好引自Yeoman和Macleod（1997）三、繁殖步骤1、外植体的选择与消毒培育脱毒苗时，以选择茎尖及带侧芽的耋段为好。一般采用茎尖培养结合热处理的方法培育脱毒苗。具体步骤如下：、在优良品种中选择生长健壮、无病害的优良植株，在3638培养3060 d。热处理期间要尽量保持植株旺盛生长。保留顶部23对未展开叶，切取顶芽。、用含洗衣粉的自来水洗净，纱布吸干水分，、在净化工作台上用70酒精消毒30 60 s、用0.1升汞消毒610 min,无菌水冲洗6 8次，在解剐镜下剥去嫩叶，、切下0.30.4 mm的茎尖，迅速接种到

4、培养基上。 2、茎尖培养本实验培养基常用MS等。具体步骤如下：、康乃馨茎尖接种在MS+1.0 mgL BA+0.2 mgL NAA培养基上，约1周后茎尖转绿，4周后即可在茎基部长出芽丛，诱导率达85以上。、对每个接种的外植体茎尖要分别编号.茎尖培养除采用固体培养外，采用液体振荡培养或液体滤纸桥培养效果更佳。、液体培养可诱导增殖出大量芽丛，增殖系数高，之后将芽丛分切，转移至固体培养基上培养。、整个培养阶段的温度控制在25C左右。、诱导芽丛阶段光周期为1214 h，光强为 20003000 lx3、试管苗增殖、在茎尖诱导培养30 d左右，将丛生芽的嫩茎切成带12个茎节的小段，接种于继代增殖培养基中

5、培养。、康乃馨试管增殖培养对激素适应范围广，可采MS+0.54.0 mgL BA+0.052.0 mgL NAA十0.050.5 mgL IBA。、我国研究者多采用MS+2 mgL BA+0.2 mgL NAA，康乃馨在培养基MS+0.5 mgL BA+0.1 mgL NAA中也能良好增殖。（采用液体培养墓优于固体培养基。）、康乃馨每34周就增殖1次。当试管苗增殖到一定数量后，分出一部分试管芽生根培养，进行病毒鉴定。四、生根与移栽1、生根、将2 3 cm长的嫩梢切下，直接转至生根培养基1/2 MS+0.11.0 mg/L NAA+0.11.0mg/L IBA。（生长素也可单独使用）、在培养基中

6、加入10 g/L活性炭可促进生根。、康乃馨亦可在试管外扦插生根。当试管苗长出根形成小植株时即可进行炼酋移栽。注意：在试管外的整个操作过程要在防病毒条件下进行2、移栽、对移栽用的营养钵及土壤基质要进行消毒，基质可以是细河沙、无菌蛭石、草炭及田间腐殖质土，把它们平铺在育苗钵或育苗盘内，定植后用双层遮阳网进行遮光，及时喷雾或喷水以保证空气湿度。、经过23周，当植株长出新叶片时可以用稀释的肥液进行追肥。、当根系长至育苗盘底部时，就可定植于露地。四、后期鉴定1、病毒鉴定为了确定试管苗是否还存在病毒，要进行病毒鉴定。一般采用指示植物进行病毒鉴定法，用这种的做法是具体步骤是：、取脱毒后的康乃馨幼叶 13

7、g，加5倍的水或0.1 molL磷酸缓冲液研磨成汁备用；、用500600 pm金刚砂磨破藜科指示植物的叶片，然后用灭菌后的棉球蘸康乃馨叶汁涂抹伤口，之后用无菌水冲洗，大约1周后；、鉴定伤口处是否产生病毒感染的特殊坏死斑。、鉴定无病毒感染后，才可以确定试管苗作为育苗母株。注意：在鉴定期间为了防止蚜虫传毒，要利用纱网进行隔离，此外，病毒鉴定还可采用直接观察法、电子显微镜检测法等。2、试管苗变异的鉴定经过鉴定确认无病毒的植株，还要鉴定植株的品种特性是否发生变异。具体做法是：、取驯化后的试管苗和外植体母株的扦插菌同时定植，培育到开花，调查其生长发育过程中分枝和开花状况。、通过调查了解，要筛选出与

8、母株形态特征完全一致或非常接近的试管苗作为采穗母株培养，对发生变异的植株应根据其性状的变异内容和程瘦决定去留，一般的淘汰，有价值的可作为新品种来培育。培养基可分为四类：1、含盐量较高，典型代表：MS培养基2、硝酸钾含量较高，典型代表：B5、N6、SH培养基3、含中等量无机盐，典型代表：NN培养基4、低盐浓度培养基，典型代表：WPM（Lloyd G , McCown B , 1980）,怀特（White ，1943）培养基MS培养基：Murashige和Skoog（1962）设计的ms培养基，这类培养基具有高浓度的硝酸盐、钾离子、微量元素种类较全。NAA：学名萘乙酸，是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。IAA：即生长素，学名吲哚乙酸，是一种植物体内普遍存在的内源属吲哚类化合物。又名茁长素、异生长素。IBA：吲哚丁酸，促进植物主根生长，提高发芽率，成活率。用于促使插条生根。Lx：照度的国际单位（SI），又称米烛光，简作lx 。石竹科：石竹科分为三个亚科：繁缕亚科、石竹亚科、大爪草亚科。主要有鹅肠草，康乃馨 ,田基黄,银柴胡,天蓬草,叉歧繁缕,千针万线草, ,长蕊石头花,剑门蝇子草,大叶石头花,三脉石竹,高山石竹,大苞石竹,玉山石竹,针叶石竹,钻叶石竹,辽东石竹等