基于烟草花叶病毒解旋酶结构的抗病毒化合物的筛选及相互作用研究

• 花匠小妙招
• 2024-11-26 09:47

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目录

前言

第一章 研究综述

1.1烟草花叶病毒属病毒

1.1.1烟草花叶病毒属病毒基因组结构与功能

1.2烟草花叶病毒

1.3烟草花叶病毒RNA解旋酶的结构和功能

1.3.1解旋酶的结构和功能

1.3.2烟草花叶病毒属SF1解旋酶晶体结构及各基序功能

1.3.3烟草花叶病毒解旋酶蛋白与宿主蛋白之间的相互作用

1.4烟草花叶病毒的小分子抑制剂研究现状

1.5蛋白原核表达

1.6蛋白纯化方法

1.6.1亲和层析

1.6.2凝胶过滤层析

1.7蛋白免疫印迹法

1.8微量热泳动技术

1.9实时荧光定量PCR

1.10 农杆菌介导的瞬时表达技术

1.11 分子对接

第二章 论文设计及研究路线

2.1研究的目的意义

2.2拟解决的主要问题

2.3研究内容

2.4技术路线

第三章 材料与方法

3.1实验材料

3.1.1实验材料

3.1.2实验主要使用试剂

3.1.3实验常用缓冲液配制

3.1.4实验主要仪器设备

3.2 实验方法与步骤

3.2.1烟草花叶病毒属病毒解旋酶重组质粒的构建

3.2.2感受态细胞的制备

3.2.3重组质粒的转化

3.2.4挑取阳性单克隆并进行蛋白诱导表达小试

3.2.5蛋白表达纯化和鉴定

3.2.6烟草花叶病毒属病毒解旋酶蛋白与小分子化合物的相互作用

3.2.7 TMV-Hel蛋白与被筛选小分子化合物的体内互作研究

3.2.8烟草花叶病毒属病毒解旋酶同小分子化合物分子对接

第四章 结果与讨论

4.1双酶切验证TMV-Hel重组质粒

4.2 TMV-Hel原核表达纯化

4.3 TMV-Hel活性小分子化合物的筛选

4.4 TMV-Hel与被筛选小分子化合物MST结合试验

4.5 TMV-Hel与高活性小分子化合物的体内互作研究

4.5.1农杆菌瞬时侵染本氏烟

4.5.2 qPCR验证D440-0167对本氏烟中TMV-Hel致病基因调控的影响

4.5.2 WB验证D440-0167对本氏烟中TMV-Hel蛋白表达调控的影响

4.6双酶切验证各病毒解旋酶重组质粒

4.7 Tobamoviruses-Hel蛋白原核表达纯化

4.7.1烟草花叶病毒属病毒解旋酶蛋白纯化表达

4.7.2通过蛋白免疫印迹验证烟草花叶病毒属病毒解旋酶蛋白

4.8对烟草花叶病毒属病毒解旋酶进行氨基酸序列一致性比较

4.8.1烟草花叶病毒属病毒解旋酶与D440-0167分子对接结果

4.9烟草花叶病毒属病毒解旋酶的MST结合试验

4.10 蛋白对照结合实验

4.11 讨论

第五章 结论

5.1结论

5.1.1烟草花叶病毒属病毒解旋酶蛋白理化性质分析及原核表达

5.2本论文的创新之处

5.3本论文的不足与展望

致谢

参考文献

附录

声明

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