一种新型冠状病毒核酸检测方法及试剂盒
摘要： 本发明涉及一种新型冠状病毒核酸检测方法及试剂盒，属于病原体检测技术领域。基于重组酶等温扩增技术的进一步优化，本发明提供了RAPID(Recombinase AmPlification Isothermal Detection)技术，可在同一反应体系中同时检测新冠病毒N基因及ORF1a基因双靶标及人源内参RNase P基因，三组基因检测结果同时体现于同一试纸条上，可以实现更加灵敏、稳定高效的检测新冠病毒核酸。
主分类号：
C12Q1/70(2006.01)(包含酶或微生物的测定或检验方法)
权利要求：
1.一种新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，其中包含有对新型冠状病毒N基因和ORF基因进行RAPID恒温扩增的引物对，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.49-50和SEQ IDNO.5-6所示。 2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的引物对中的反向引物的3’端经过Biotin修饰。 3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的引物组中还包括有对人源RNase P基因进行RAPID恒温扩增的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.61-62所示。 4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包含有分别和N基因和ORF基因RAPID恒温扩增产物进行结合的探针，所述的探针的5’端被荧光基团修饰，3’端被阻断基团修饰，且探针中还插入有四氢呋喃位点。 5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的和N基因RAPID恒温扩增产物进行结合的探针的核苷酸序列如N1-THF-N2所示，所述的和ORF基因RAPID恒温扩增产物进行结合的探针的核苷酸序列如ORF1-THF-ORF2所示；其中N1、N2、ORF1、ORF2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.51-52所示。 6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包含有和人源人源RNase P基因RAPID恒温扩增产物进行结合的探针，所述的探针的5’端被荧光基团修饰，3’端被阻断基团修饰，且探针中还插入有四氢呋喃位点。 7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的和人源人源RNase P基因RAPID恒温扩增产物进行结合的探针的核苷酸序列如P1-THF-P2所示，所述的P1、P2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.63-64所示。 8.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测用试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中，还包括有微球，用于装载探针和引物；还包括有用于对扩增产物进行显色的胶体金试纸条。 9.一种新型冠状病毒核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤1，将样本采用试剂盒进行RAPID恒温扩增； 步骤2，将RAPID恒温扩增产物加入至胶体金试纸条中进行显色反应，判定样本中是否存在新冠病毒。 10.根据权利要求9所述的新型冠状病毒核酸检测方法，其特征在于，所述的步骤1中的RAPID恒温扩增的反应程序是35-45℃下5-20min。
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