小麦黄花叶病毒不依赖帽子翻译的差异化调控研究

• 花匠小妙招
• 2024-11-29 12:58

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1 前言

1.1 真核生物mRNA 依赖帽子的翻译

1.1.1 翻译的起始

1.1.2 翻译的延伸

1.1.3 翻译的终止

1.1.4 核糖体的再循环

1.2 不依赖帽子翻译

1.2.1 5’ 端核糖体内部进入位点（5’IRES）

1.2.2 3’ 端不依赖帽子翻译增强子（3’CITE）

1.3 小麦黄花叶病毒

1.4 研究目的和意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 质粒载体和菌株

2.1.2 实验所用主要试剂

2.1.3 主要实验仪器

2.1.4 引物和质粒

2.2 实验方法

2.2.1 植物总RNA提取

2.2.2 RT-PCR 体系

2.2.3 cDNA 末端快速扩增技术

2.2.4 重叠PCR

2.2.5 酶切反应

2.2.7 核酸的胶回收

2.2.8 连接反应

2.2.9 大肠杆菌感受态细胞（DH5α或Rosetta）制备

2.2.10 大肠杆菌感受态细胞（DH5α或Rosetta）转化

2.2.11 菌落 PCR

2.2.12 碱裂解法提质粒

2.2.13 常规体外转录

2.2.14 5’ 端加帽的体外转录

2.2.15 体外翻译

2.2.16 体外RNA 结构分析技术—In-line probing

2.2.17 EMSA

2.2.18 原核表达及纯化

2.2.19 体外复制

2.2.20 Northern Blot

3 结果与分析

3.1 WYMV 不同分离物 RNA1 和RNA2 的 5’UTR 调控不依赖帽子翻译

3.1.1 WYMV 不同分离物 RNA1 和RNA2 的核苷酸序列比对

3.1.2 WYMV 不同分离物 RNA1 和RNA2 的5’UTR 对翻译的调控

3.2 WYMV RNA1 的不依赖帽子翻译调控机理

3.2.1 WYMV RNA1 UTR 对翻译的调控

3.2.2 WYMV RNA1 中调控翻译的远距离RNA-RNA 互作

3.2.3 WYMV RNA1 5’UTR IRES 元件二级结构特征

3.2.4 WYMV RNA1 5’UTR IRES 元件与eIF4E 的关系

3.2.5 WYMV RNA1 5’UTR IRES 元件三级结构特征

3.2.6 WYMV RNA1 5’UTR IRES 元件动态结构模型

3.3 WYMV RNA2 不依赖帽子翻译差异化调控机理

3.3.1 WYMV 不同分离物 RNA2 UTR 对翻译的调控作用

3.3.2 WYMV 不同分离物 RNA2 5’UTR 结构及核心元件分析

3.3.3 WYMV 不同分离物 RNA2 5’UTR IRES 元件与eIF4E 的关系

3.3.4 WYMV 不同分离物 RNA2 5’UTR IRES 元件结构模型

4 讨论

4.1 WYMV RNA1 5’UTR 的 IRES 具有三级动态平衡结构

4.2 WYMV RNA1 中的IRES 平衡状态与单个宿主中 WYMV 的局部适应之间的潜在关系

4.3 WYMV RNA 中的IRES 元件之间以及WYMV 不同分离物 RNA2 IRES 元件之间差异性调控

5 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况

附录1：poly(A) 长度变化对WYMV 体外翻译和复制的影响

附录2

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