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小花清风藤化学成分的研究

花匠小妙招
2024-11-30 03:59

摘要：目的研究小花清风藤Sabia parviflora茎叶的化学成分.方法利用硅胶、Sephadex LH-20、反相硅胶、MCI等柱色谱以及半制备高效液相色谱等多种色谱技术进行分离纯化,运用NMR、MS等波谱学方法以及结合文献数据鉴定化合物结构.结果从小花清风藤茎叶的石油醚萃取部位分离得到14个化合物,包括7个五环三萜类化合物,4个生物碱类化合物,3个其他类化合物;分别鉴定为β-谷甾醇(1)、木栓酮(2)、(20S)-3-oxo-20-hydroxytaraxastane(3)、9-芴酮(4)、N-formyldehydroanonain(5)、桦木酸(6)、dehydroformouregine(7)、棕榈酸(8)、20-hydroxy-lupan-3-one(9)、3-氧代齐墩果酸(10)、古柯三萜二醇(11)、桦木酸甲酯(12)、N-formyl-annonain (Z)(13)、N-formyl-O-methylisopiline(14).结论化合物3～10、12～14为首次从该植物以及该属植物中得到,首次报道了化合物5、7、14的13C-NMR谱归属.

CHEN Yan1,2 ,HUANG Tao2,YUAN Chun-mao2,GU Wei2,HAO Xiao-jiang2,HUANG Lie-jun2,MU Shu-zhen2,ZHANG Jian-xin2

Abstract: Objective To investigate the chemical constituents from the stems and leaves of Sabia parviflora. Methods Column chromatographies over silica gel, Sephadex LH-20, reverse phase C18, MCI, and semi-preparative HPLC were used repeatedly for separation and purification of chemical constituents, and their structures were identified by NMR and MS spectra data with those reported in literature. Results Fourteen compounds were obtained from the petroleum ether extract of S. parviflora, and identified as β-sitosterol (1), mominine (2), (20S)-3-oxo-20-hydroxytaraxastane (3), fluoren-9-one (4), N-formyldehydroanonain (5), betulinic acid (6), dehydroformouregine (7), palmitic acid (8), 20-hydroxy-lupan-3-one (9), 3-oxooleanolic acid (10), erythrodiol (11), methyl betulinate (12), N-formyl-annonain (Z) (13), and N-formyl-O-methylisopiline (14). Conclusion Among the 14 compounds, there are seven pentacyclic triterpenes, four alkaloids, and three other compounds; compounds 3-10 and 12-14 are isolated from this plant and the plants of Sabia Colebr. for the first time, and the 13C-NMR spectral assignments of compounds 5, 7, and 14 are reported for the first time.

Key words:Sabia parviflora Wall. ex Roxb. pentacyclic triterpenes alkaloids mominine 3-oxooleanolic acid methyl betulinate

小花清风藤Sabia parviflora Wall. ex Roxb. 为清风藤科清风藤属藤本植物，主要分布于云南、广西、贵州等地[1]。贵州产小花清风藤为布依族、苗族的民间药，主要分布在贵州的兴义市、安龙县、册亨县、望谟县等地[2]，其根茎、叶均可入药，有祛风除湿、消炎止痛的作用，治疗甲型和乙型病毒性肝炎疗效显著，且副作用小[3]，民间俗称为“小黄药”“黄肿药”“黄眼药”等[4]。刘易蓉等[5]发现小花清风藤提取物能降低四氯化碳、扑热息痛诱导的肝损伤模型小鼠血清中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的活性，具有保肝作用。小花清风藤在临床上主要用于抗炎、止血，治疗风湿骨痛、跌打损伤、病毒性肝炎等[3, 6]。根据文献报道，小花清风藤的主要化学成分为生物碱类、五环三萜类和其他类[7, 8, 9, 10, 11, 12]。为了进一步探讨小花清风藤的有效成分，本实验对其茎叶部分进行了化学成分研究，从中分离鉴定了14个化合物，包括7个五环三萜类化合物：木栓酮（mominine，2）、(20S)-3-oxo-20-hydroxyl- taraxastane（3）、桦木酸（betulinic acid，6）、20-hydroxy- lupan-3-one（9）、3-氧化齐墩果酸（3-oxooleanolic acid，10）、古柯三萜二醇（erythrodiol，11）、桦木酸甲酯（methyl betulinate，12）；4个生物碱类化合物：N-formyl-dehydroanonain（5）、dehydroformouregine（7）、N-formyl-annonain (Z)（13）、N-formyl-O- methylisopiline（14）；3个其他类化合物：β-谷甾醇（β-sitosterol，1）、9-芴酮（fluoren-9-one，4）、棕榈酸（palmitic acid，8）。其中，化合物3～10、12～14为首次从该植物以及该属植物中得到，首次报道了化合物5、7、14的13C-NMR谱归属。

1 仪器与材料

INOVA-400 MHz及500 MHz核磁共振谱仪；安捷伦5973型EI-MS质谱仪；惠普LC-MSD型ESI-MS高效液相色谱-质谱联用仪；Waters 600型半制备型高效液相色谱仪和Waters 2489型检测器，SunFireTM-C18（150 mm×10 mm，10 μm）色谱柱和Kromasil-C18（250 mm×10 mm，5 μm）柱；柱色谱硅胶、薄层色谱预制板用硅胶GF254（0.20～0.25 mm）均为青岛海洋化工有限公司产品；柱色谱用反相硅胶RP18（40～60 μm）为Merck公司产品；MCI（75～150 μm）柱色谱材料为Mitsubishi Chemical公司（日本东京）产品；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶（40～70 μm）为Amersham Biosciences AB公司产品（Uppsala，瑞典）；所用试剂均为分析纯或色谱纯。

样本采自贵州省兴义市心意药业公司，由贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室顾玮博士鉴定为小花清风藤Sabia parviflora Wall. ex Roxb. 茎叶部分。标本（No.SP-1）保存在贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室。

2 提取与分离

小花清风藤茎叶（18 kg）粉碎后用90%工业甲醇加热回流提取（4、4、3 h），提取液合并后减压浓缩至无醇味，加少量水稀释，依次用等体积石油醚、醋酸乙酯萃取5次，回收溶剂，得石油醚萃取部分150 g、醋酸乙酯萃取部分322 g。石油醚部分用硅胶柱色谱分离，石油醚-醋酸乙酯（1∶0→0∶1）梯度洗脱，TLC检查合并得10个部分Fr. 1～10。Fr. 3经过正相硅胶色谱柱石油醚-醋酸乙酯（100∶1→1∶0）梯度洗脱得4个部分，Fr.3-4先后经Sephadex LH-20凝胶柱、硅胶色谱柱得到7个部分，Fr.3-4-4和Fr.3-4-5析出白色针状晶体，得化合物2（15 mg）；Fr. 3-4-6用HPLC（C18，150 mm×10 mm，10 μm）分离纯化得化合物4（11 mg）；Fr. 5析出白色针状晶体，经重结晶得化合物1（1.19 g），再经MCI（甲醇-水）梯度洗脱得6个部分，Fr. 5-3析出无色针状晶体得化合物8（100 mg），Fr. 5-4先后经Sephadex LH-20凝胶柱、硅胶色谱柱分离得到化合物12（61 mg）；Fr. 6经硅胶柱色谱石油醚-醋酸乙酯（20∶1）得3个部分，Fr. 6-2析出无色块晶，得化合物3（45 mg），Fr. 6-3反复经凝胶柱，硅胶色谱柱，薄层制备色谱得化合物5（38 mg）、7（18 mg）、9（10 mg）；Fr. 7经MCI（甲醇-水）梯度洗脱得2个部分，Fr. 7-1、Fr. 7-2反复经硅胶柱色谱得化合物6（9 mg）、10（6 mg）、11（10 mg）；Fr. 8经凝胶柱，硅胶色谱柱，HPLC分离得到化合物13（20 mg）、14（60 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色针晶（石油醚-醋酸乙酯），分子式C29H50O，mp 138～140 ℃， 3 445 (OH), 2 933, 1 651, 1 459, 1 380, 1 058。EI-MS m/z: 414 ([M]+, 55), 396 (30), 381 (35), 329 (30), 303 (40), 233 (65), 259 (50), 43 (100)。其与对照品对照，Rf值相同，且混合熔点不下降，故鉴定化合物1为β-谷甾醇。

化合物2：无色针晶（氯仿-甲醇），分子式为C30H50O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.72 (3H, s, CH3), 0.87 (3H, d, J = 6.7 Hz, H-23), 0.95 (3H, s, CH3), 1.00 (3H, s, CH3), 1.05 (3H, s, CH3), 1.18 (3H, s, CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 213.5 (C-3), 59.6 (C-10), 58.4 (C-4), 53.2 (C-8), 42.9 (C-18), 42.3 (C-5), 41.7 (C-2), 41.4 (C-6), 39.8 (C-13), 39.4 (C-22), 38.4 (C-14), 37.6 (C-9), 36.1 (C-16), 35.7 (C-11), 35.5 (C-19), 35.2 (C-29), 32.9 (C-21), 32.5 (C-15), 32.2 (C-28), 31.9 (C-30), 30.6 (C-12), 30.1 (C-17), 28.3 (C-20), 22.4 (C-1), 20.4 (C-26), 18.8 (C-27), 18.4 (C-7), 18.1 (C-25), 14.8 (C-24), 7.0 (C-23)。以上数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物2为木栓酮。

化合物3：无色块晶（氯仿-甲醇），分子式C30H50O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.83 (3H, s, 28-CH3), 0.93 (3H, s, 25-CH3), 0.95 (3H, s, 27-CH3), 1.02 (3H, s, 24-CH3), 1.06 (3H, d, J = 6.2 Hz, 29-CH3), 1.07 (3H, s, 23-CH3), 1.08 (3H, s, 26-CH3), 1.18 (3H, s, 30-CH3), 2.44 (2H, m, H-2)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 218.5 (C-3), 73.7 (C-20), 54.8 (C-5), 49.1 (C-9), 47.5 (C-18), 47.4 (C-4), 43.3 (C-14), 41.4 (C-8), 39.6 (C-1), 39.2 (C-13), 38.9 (C-19), 38.2 (C-16), 37.8 (C-22), 36.8 (C-10), 35.6 (C-21), 35.3 (C-17), 34.3 (C-2), 33.9 (C-7), 30.4 (C-30), 29.5 (C-15), 26.9 (C-23), 26.7 (C-12), 22.2 (C-11), 21.2 (C-24), 19.8 (C-6), 18.1 (C-29), 17.9 (C-28), 16.3 (C-26), 16.2 (C-25), 14.8 (C-27)。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物3为 (20S)-3-oxo-20-hydroxytaraxastane。

化合物4：黄色晶体（丙酮），分子式C13H8O。EI-MS m/z: 180, 152, 126, 98, 87, 76, 63, 50, 39。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 7.28 (2H, td, J = 7.4, 1.2 Hz, H-2), 7.47 (2H, td, J = 7.4, 1.2 Hz, H-3), 7.51 (2H, J = 7.4 Hz, H-1), 7.64 (2H, J = 7.4 Hz, H-4)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 194.1 (C-9), 144.5 (C-10), 134.8 (C-3), 134.2 (C-11), 129.2 (C-2), 124.4 (C-4), 120.4 (C-1)。以上数据与文献报道基本一致[15]，结合HSQC、HMBC谱鉴定化合物4为9-芴酮。

化合物5：无色晶体（氯仿-甲醇），分子式C18H13NO3。ESI-MS m/z: 292 [M＋H]+, 314 [M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 9.00 (1H, m, H-11), 8.91 (1H, s, NCHO), 7.78 (1H, m, H-8), 7.57 (2H, m, H-9, 10), 7.23 (1H, s, H-7), 7.05 (1H, s, H-3), 6.27 (2H, s, OCH2O), 4.14 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-5), 3.20 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-4)。其13C-NMR和HMBC谱图数据见表 1，以上数据与文献对照基本一致[16]，鉴定化合物5为N-formyldehydroanonain。

表 1 4 个生物碱的13C-NMR 数据 Table 1 13C-NMR data of four alkaoids

化合物6：无色细针状结晶（氯仿），分子式C30H48O3。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 0.75, 0.82, 0.94, 0.95, 0.97, 1.69 (各3H, s, 6×CH3), 4.60 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-29a), 4.73 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-29b)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 179.2 (C-28), 150.7 (C-20), 109.4 (C-29), 78.8 (C-3), 56.2 (C-17), 55.3 (C-5), 50.5 (C-9), 49.2 (C-19), 47.0 (C-18), 42.4 (C-14), 40.6 (C-8), 38.8 (C-4), 38.7 (C-1), 38.2(C-13), 37.1 (C-10), 34.3 (C-7), 32.2 (C-16), 30.8 (C-30), 30.5 (C-15), 29.6 (C-21), 27.8 (C-23), 27.0 (C-2), 25.5 (C-12), 20.8 (C-11), 19.2 (C-22), 18.2 (C-6), 16.0 (C-26), 15.8 (C-25), 15.3 (C-24), 14.6 (C-27)。以上数据与文献报道基本一致[17]，故鉴定化合物6为桦木酸。

化合物7：白色针晶（氯仿-甲醇），分子式C20H19NO4。ESI-MS m/z: 338.1 [M＋H]+, 675.2 [2M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3) δ: 9.52 (1H, m, H-11), 8.90 (1H, s, NCHO), 7.90 (1H, m, H-8), 7.62 (1H, s, H-7), 7.59 (2H, m, H-9, 10), 4.06 (3H, s, 2-OCH3), 4.05 (2H, t, J = 6.1 Hz, H-5), 3.99 (3H, s, 1-OCH3), 3.99 (3H, s, 3-OCH3), 3.16 (2H, t, J = 6.1 Hz, H-4)。以上数据与文献报道基本一致[18]，其13C-NMR谱数据见表 1，鉴定化合物7为dehydro- formouregine。

化合物8：白色颗粒状结晶（氯仿-甲醇），分子式C16H32O2。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 2.34 (2H, t, J = 7.6 Hz, H-2), 1.63 (2H, m, H-3), 1.26 (24H, brs, H-4～15), 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz, H-16)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 180.4 (C-1), 34.2 (C-2), 32.1 (C-14), 29.7 (C-7～12), 29.6 (C-6), 29.5 (C-13), 29.4 (C-5), 29.2 (C-4), 24.8 (C-3), 22.8 (C-15), 14.2 (C-16)。以上数据与文献报道基本一致[19]，故鉴定化合物8为棕榈酸。

化合物9：白色针状晶体（氯仿-甲醇），分子式为C30H50O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.82, 0.94, 0.97, 1.03, 1.08, 1.10, 1.13, 1.23 (各3H, s, 8×CH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 218.3 (C-3), 73.5 (C-20), 54.7 (C-5), 49.9 (C-9), 49.6 (C-19), 48.2 (C-18), 47.3 (C-4), 44.6 (C-17), 43.5 (C-14), 41.2 (C-8), 40.1 (C-22), 39.5 (C-1), 37.5 (C-13), 36.7 (C-10), 35.5 (C-16), 34.1 (C-2), 33.8 (C-7), 31.6 (C-29), 29 (C-21), 28.7 (C-12), 27.5 (C-15), 26.7 (C-23), 24.7 (C-30), 21.9 (C-11), 21 (C-24), 19.7 (C-6), 19.2 (C-28), 16 (C-26), 16 (C-25), 14.8 (C-27)。以上数据与文献对照基本一致[19, 20]，故鉴定化合物9为20-hydroxy-lupan-3-one。

化合物10：白色针状晶体（甲醇），分子式C30H46O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.81, 0.91, 0.93, 1.03, 1.05, 1.08, 1.15 (各3H, s, 7×CH3)；2.37 (1H, m, H-2)；2.55 (1H, m, H-2)；2.84 (1H, dd, J = 13.8, 4.2 Hz, H-18)；5.30 (1H, t, J = 3.5 Hz, H-12)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 217.8 (C-3), 183.5 (C-28), 143.6 (C-13), 122.3 (C-12), 55.2 (C-5), 47.4 (C-4), 46.8 (C-9), 46.5 (C-17), 45.8 (C-22), 41.7 (C-14), 41.0 (C-18), 39.2 (C-8), 39.1 (C-1), 36.7 (C-10), 34.1 (C-2), 33.8 (C-21), 33.0 (C-29), 32.4 (C-16), 32.1 (C-11), 30.6 (C-20), 27.6 (C-15), 26.4 (C-24), 25.8 (C-27), 23.5 (C-30), 23.4 (C-7), 22.9 (C-19), 21.4 (C-23), 19.5 (C-6), 16.9 (C-26), 15.0 (C-25)。以上数据与文献对照基本一致[21]，结合HSQC、HMBC谱鉴定化合物10为3-氧化齐墩果酸。

化合物11：白色针状结晶（石油醚-醋酸乙酯），分子式C30H50O2。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 0.79, 0.87, 0.89, 0.93, 0.94, 0.99, 1.16 (各3H, s, 7×CH3), 3.55 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-28a), 3.22 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-28b), 5.19 (1H, t, J = 3.5 Hz, H-12)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ: 144.2 (C-13), 122.4 (C-12), 79.0 (C-3), 69.7 (C-28), 55.1 (C-5), 47.6 (C-9), 46.5 (C-19), 42.3 (C-18), 41.1 (C-14), 39.8 (C-8), 38.8 (C-4), 38.6 (C-1), 36.9 (C-10, 17), 34.1 (C-21), 33.2 (C-29), 32.6 (C-7), 31.0 (C-20), 31 (C-22), 28.1 (C-23), 27.2 (C-2), 25.9 (C-27), 25.5 (C-15), 23.6 (C-11), 23.5 (C-30), 22 (C-16), 18.3 (C-6), 16.7 (C-26), 15.6 (C-25), 15.5 (C-24)。以上数据与文献对照基本一致[22]，故鉴定化合物11为古柯三萜二醇。

化合物12：无色细针状结晶（氯仿），分子式C31H50O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0.75 (3H, s, CH3), 0.82 (3H, s, CH3), 0.91 (3H, s, CH3), 0.96 (6H, s, 2×CH3), 1.68 (3H, s, CH3), 3.67 (3H, s, COOCH3), 4.60 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-29a), 4.73 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-29b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 176.8 (C-28), 150.7 (C-20), 109.7 (C-29), 79.1 (C-3), 56.7 (C-17), 55.5 (C-5), 51.4 (-OCH3), 50.7 (C-9), 49.6 (C-19), 47.1 (C-18), 42.5 (C-14), 40.8 (C-8), 39.0 (C-4), 38.9 (C-1), 38.4 (C-13), 37.3 (C-10), 37.1 (C-22), 34.5 (C-7), 32.3 (C-16), 30.8 (C-15), 29.8 (C-21), 28.1 (C-23), 27.6 (C-2), 25.7 (C-12), 21.3 (C-11), 19.5 (C-30), 18.4 (C-6), 16.3 (C-26), 16.1 (C-25), 15.5 (C-24), 14.9 (C-27)。以上数据与文献报道基本一致[23]，故鉴定化合物12为桦木酸甲酯。

化合物13：黄色针状结晶（氯仿-丙酮），分子式C18H15NO3。ESI-MS m/z: 587.2 [2M＋H]+, 609.2 [2M＋Na]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.26 (1H, d, J = 0.45 Hz, NCHO), 8.10 (1H, m, H-11), 7.26～7.34 (3H, m, H-8, 9, 10), 6.58 (1H, s, H-3), 6.10 (1H, d, J = 1.4 Hz, OCH2O), 5.98 (1H, d, J = 1.5 Hz, OCH2O), 5.04 (1H, dd, J = 14.0, 4.4 Hz, H-6a), 3.82 (2H, ddd, J = 12.8, 4.6, 1.9 Hz, H-5a), 3.40 (1H, ddd, J = 12.6, 9.7, 2.9 Hz, H-5b), 3.23 (2H, dd, J = 14.1, 4.5 Hz, H-7), 2.69～2.84 (2H, m, H-4)。以上数据与文献报道基本一致[24]，故鉴定化合物13为N-formyl- annonain (Z)。

化合物14：黄色针状晶体（氯仿-丙酮），分子式为C20H21NO4。ESI-MS m/z: 679.3 [2M＋H]+, 701.2 [2M＋Na]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ: 8.31 (1H, m, H-11), 8.26 (1H, s, NCHO), 7.32 (2H, m, H-9, 10), 7.24 (1H, m, H-8), 4.78 (1H, dd, J = 14.0, 4.1 Hz, H-6a), 4.00 (1H, m, H-5a), 3.92 (3H, s, 2-OCH3), 3.89 (3H, s, 3-OCH3), 3.72 (3H, s, 1-OCH3), 2.99 (1H, dd, J = 13.7, 4.2 Hz, H-7a), 2.79 (1H, t, J = 13.9 Hz, H-7b), 3.32 (1H, m, H-5b), 3.08 (1H, m, H-4a), 2.59 (1H, m, H-4b)。以上数据与文献报道基本一致[18]，其13C-NMR谱数据见表 1，故鉴定化合物14为N-formyl-O-methylisopiline。