小鼠精原干细胞转染人t
项目摘要
中文摘要
精原干细胞是成体内唯一终生增殖分化并向子代传递基因的干细胞。因此，它是研究动物细胞发育分化及基因组修饰、操作的最佳细胞模型之一。目前生殖细胞转基因研究主要是体内转染。由于支持细胞及已分化生精细胞的屏障作用，目的DNA难以整合人干细胞基因组内，因此难以持续获得大量转基因生殖细胞。本题拟构建人t-PA基因与标记基因GFP或LacZ的融合基因，利用病毒毒载体感染或脂质体转染等方法，将目的基因导入体外培养精原干细胞基因组中，建立精原干细胞体外转基因的最佳条件和方法，为下一步用于细胞移植技术获得转基因动物奠定基础。
结题摘要
为进一步优化小鼠精原干细胞（SSCs）的培养体系，进而探讨其体外转基因的方法和条件，在前期工作基础上首先探讨了睾丸提取液（TA）、表皮生长因子（EGF）、雌二醇-17β（E2）及稳定表达小鼠胶质细胞源神经营养因子（GDNF）的转基因STO饲养层细胞（STO-GDNF）对小鼠SSCs 体外培养的影响。结果显示，1)盘化法结合差速贴壁法较Percoll法更适于分离SSCs；2)添加20-40ng/ml EGF和10-100pg/ml E2的培养液能促进SSCs的体外存活和增殖；3）STO-GDNF能有效促进SSCs的体外存活和增殖，其生物学活性相当于使用正常STO饲养层并添加20-40ng/ml的hGDNF。基于此优化的培养体系，用携带人组织纤溶酶原激活剂基因（t-PA）的真核表达载体pcPA及逆转录病毒载体PLNC-tPA、PL-tPA-SN进行了SSCs体外转染。移植分析提示，将SSCs培养于STO-GDNF饲养层上，用pcPA以脂质体介导法进行转染；或用产毒PA317细胞的培养上清一次性感染；均适于将外源基因导入SSCs基因组。
相关知识
基础医学院柳华/欧阳宏伟团队Nat Biomed Eng发文：表观编辑构建通用型干细胞
间充质干细胞分类=海南博鳌中邦干细胞公司
干细胞改善易过敏体质，调节免疫失衡
干细胞样CD4 T细胞的发现为癌症免疫治疗带来了新的希望
现代生物学导论
Nature重磅：禁食后重新进食，会促进干细胞再生，但也增加癌症风险
植物干细胞(最新) 79
DNA免疫研究进展
【2016年】抵当汤化裁方对荷瘤小鼠抑瘤作用及对T淋巴细胞亚群的影响【医学论文】
医学科学研究院举办“小鼠子宫内胚胎电转技术原理及应用”讲座
网址: 小鼠精原干细胞转染人t https://m.huajiangbk.com/newsview850859.html
| 上一篇: 加拿大、巴西各批准两项转基因玉米 |
下一篇: 山茶花的花语代表意思，有什么特别 |
