首页 > 分享 > 转基因的方法和原理.pptx

转基因的方法和原理.pptx

花匠小妙招
2024-12-04 02:13

转基因的方法和原理;简介;基本步骤;分离基因;目的基因制备和载体系统;PCR反应;PCR反应过程;利用cDNA法;cDNA链的合成;分离基因;质粒载体;质粒载体pBR322;pUC19质粒;λ噬菌体;λ噬菌体载体;柯氏质粒 Cosmid;分离基因;几种有效的转基因方法;基因转移的方法;DNA-磷酸钙沉淀法;脂质体（liposome）介导的基因转移;显微注射DNA;显微操作仪;显微操作仪的使用;显微注射法的优点;基因枪介导的DNA转移;基因枪转化的原理;(2)基因枪轰击法（微弹轰击技术micro-projectile bombardment) 将外源DNA包裹在微小的钨粉或金粉颗粒的表面，借助高压动力射入受体细胞或组织，最后整合到植物基因组并得以表达。步骤简单易行：适合于大多数细胞或组织，克服了受体材料的限制，不必制备原生质体，具有相当广泛的应用范围，已经成为植物细胞转化最有效方法之一。到目前为止，利用基因枪法已经在烟草、豆类和多数禾本科农作物、果树花卉和林木等植物上获得转基因植株。 ;决定基因枪使用成功的因素;农杆菌与植物细胞相互作用的机制 ;土壤农杆菌转化法;农杆菌: used extensively for genetic engineering of plants. 包含Ti质粒 Tumor inducing plasmid (bacterial plasmid) T-DNA (Transferred-DNA), 可以转移进入植物基因组.;Ti Plasmid;报告基因: Gus基因（β-葡糖苷酸酶基因）在植物细胞中所产生的葡糖苷酸酶在检测上具有以下特点： ①在一定条件下与X-G1ucuionic acid （5-bromo-4-chioro-3-indoyl-β-D-glucuronic acid）底物发生作用，产生蓝色沉淀，既可以用分光光度计法测定，又可以直接观察到植物组织中形成的蓝色斑点。 ②当加入4-甲基伞形酮基和葡萄糖苷酸时生成4-甲基伞形酮，发荧光（λ=465nm）。因而可以用荧光光谱法测定。由于荧光强度高，本底低，故荧光检测极为灵敏。 ③检测容易、迅速并能定量，只需少量植物组织抽提液即可在短时间内测定完毕。 ④价格便宜。 ;GFP（绿色荧光蛋白基因）;LUC (萤火虫荧光素酶基因);;表达荧光的转基因鱼; 转基因技术动物Transgenic Animal;一、概述 1976年Jaenisch等获得含有SV40 DNA的嵌合体小鼠。 1980年，Gordon应用显微注射法首次成功地将重组的外源DNA直接注入小鼠受精卵雄原核中，获得了携???外源基因小鼠。 1982，Palmiter将大鼠的生长激素基因用微注射方法导入小鼠的受精卵中获得巨型小鼠（supermouse），从而在理论上和实践意义上都将转基因技术提高一步，引起生物学界极大的关注，为基因工程育种提供诱人的前景。早期以提高生长为主以生产药用蛋白和可移植的器官 ;谈家桢院士（左）、著名老中医徐蔚霖教授（右），曾溢滔院士（中），转基因试管牛“滔滔” ;转基因熊猫狗;哺乳动物转基因技术的研究意义 1、在基础生物学中 2、在基础医学研究中 3、在畜牧业中 ; 外源基因的导入方法 1）显微注射法（microinjection） ; 2）逆转录病毒介导法;3）胚胎干细胞法;4）精子载体法意大利Lavitrano等1989年首次报道利用精子作为载体获得了转基因小鼠。;5）细胞核移植法;6）生殖细胞转染法