蓝莓主要真菌病害的分离鉴定与防治研究
蓝莓主要真菌病害的分离鉴定与防治研究
【摘要】： 蓝莓(Vaccinium spp.),杜鹃花科越橘属多年生灌木果树,又可称为越橘,果实内含有丰富的营养物质,具有强心、抗癌等功能,被列为五大健康水果之一。随着蓝莓市场的迅猛发展,蓝莓种植面积不断扩增,但是蓝莓病害的发生却逐步成为阻碍蓝莓产业发展的主要因素之一。虽然国内外对蓝莓病害均有研究,但是缺乏对病原尤其是真菌病原的系统分类研究。本研究将明确浙江南高丛蓝莓主要真菌病害的病原种类及防治方法,为病害的防治提供理论和技术支持。本研究包括4个方面的研究内容：首先进行蓝莓叶片、果实及枝干等主要真菌病害的采集,运用组织分离法和单孢纯化法进行病原菌分离纯化,采用柯赫氏法则验证病原真菌的致病性,进而采用常规形态学和分子生物学相结合的方法进行病原菌鉴定,明确病原菌的分类地位；其次对分离的病原菌进行生物学特性研究,设置单一变量,采用菌丝生长速率法,测定不同温度、pH值、光照、培养基处理下菌丝生长量的变化,及病原菌的致死温度的测定；然后对分离的病原菌进行化学防治研究,采用菌丝生长抑制法,测定各药剂对病原菌的抑制率,计算毒力回归方程及有效抑制中浓度；最后,通过平板抑制法寻找病原菌的拮抗菌株,进行初步生物防治研究。本研究的主要结果包括：1、分离并鉴定出6种蓝莓主要病原真菌：灰霉病病原菌灰葡萄孢菌X1-1(Botrytis cinerea),茎溃疡病病原菌拟茎点霉菌JA4 (Phomopsis sp.)、葡萄座腔菌JB2 (Botryosphaeria dothidea),枝枯病病原菌棒状拟盘多毛孢菌ZAl(Pestalotiopsis clavispora),叶斑病病原菌拟盘多毛孢菌YB-1 (Pestalotiopsissp.)、炭疽菌YB-2 (Colletotrichum gloeosporioides)。2、灰霉病病原菌Xl-1的最适生长温度为20℃,最适pH值6,在PDA及BPY培养基中菌丝生长最快,PDA培养基中产孢最快,致死温度40℃,10 min。茎溃疡病病原菌JA4菌丝最适生长温度25℃,在pH 4-8的PDA培养基上生长迅速,在MEA+蓝莓茎段培养基中产孢最快,致死温度45℃,10 min；JB2最适生长温度25～30℃,弱酸条件下菌丝生长速率最快,光照有利于菌丝的生长,在MEA+蓝莓茎段的培养基中,菌丝生长迅速且产孢快,量多,致死温度55℃,10min。枝枯病病原菌ZA1最适生长温度25℃,最适pH值4,对营养物的要求较低,PDA培养基上生长最好,致死温度55℃,10 rain。叶斑病病原菌YB-I在25～30℃范围内,pH 4-7,有光照条件下最适合生长,对培养基的适用范围较广;YB-2在25℃,pH 5,光照情况下生长良好,PDA、PMA、PSA、LB、BPY、 MEA培养基上生长较好;YB-1及YB-2的致死温度为45℃,10 min。3、通过甲基硫菌灵、代森锰锌、苯醚甲环唑、嘧菌酯、异菌脲、嘧霉胺或叶枯唑6种杀菌剂对6种病原菌的菌丝生长抑制率测定发现,甲基硫菌灵及异菌脲对X1-1抑制效果最好；甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、异菌脲对JA4、JB2、YB-1、YB-2菌丝抑制效果较好；苯醚甲环唑对ZAl的抑制效果最好；嘧菌酯对6种病原菌的抑制效果最差。4、从蓝莓健康叶片中通过初步筛选分离得到拮抗细菌BL-01,采用16SrDNA通用引物(27F/1492R)扩增序列,分析发现BL-01属于芽孢杆菌属(Bacillus);采用16S rDNA特异引物、rpoB基因的引物、gyrA基因的引物扩增序列,分析确定拮抗细菌BL-01为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。生理生化特征研究发现,拮抗细菌BL-01菌体细杆状,大小0.4-0.7x2.2-3.1μm,革兰氏阳性,芽孢中生,鞭毛侧生,具荚膜,利用葡萄糖产酸不产气。拮抗细菌对6种病原菌均有拮抗作用,对JA4拮抗作用最好,发酵液上清液抑制率为53.19%,优于菌体及发酵原液。
【学位授予单位】：浙江师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
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