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植物组培培养基及其配制.doc

花匠小妙招
2024-12-12 17:26

植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养屮离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养基的各个环节屮，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。一、组成培养基的五类成分 Fl前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维牛索、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素屮，氮源通常有硝态氮或鞍态氮，但在培养基屮用硝态氮的较多，也有将硝态氮和钱态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基屮主要的阳离了，在近代的培养慕屮，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锚、锌、钳、铜、钻和铁。培养基屮的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeS04 与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此，需要在培养基屮附加一些碳水化合物以供需耍。培养基小的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。维生索在培养金屮加入维生索，常有利于外植体的发育。培养基屮的维生索属于B 族维生素，其屮效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪肌水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。 5 .生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类： ⑴植物生长素类。如眄I口朵乙酸(IAA)、蔡乙酸(NAA)、2, 4?二氯苯氧乙酸(2, 4-D)o ⑵细胞分裂索。如玉米素(Zt)、6■节基嚓吟(6?BA或BAP)和激动索(Kt)。赤霉素。组织培养屮使用的赤霉素貝有一种，即赤霉酸(GA3)O 二、常用培养基配方及其特点常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。不同培养基有不同特点，适合于不同的植物种类和接种材料。开展组织培养活动吋，应对各种培养基进行了解和分析，以便能从屮选择使用。下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9-lo 培养基屮的激素种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料而有变化，因此各配方屮均不列入。几种常用培养基的特点 ⑴MS培养基。MS培养基是H前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存、消毒等过程小，即使有些成分略有出入，也不致影响离子间的平衡。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。这种培养基屮的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养丄和生理上的需要。因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。与其它培养基的基木成分相比，MS培养基屮的硝酸盐、钾和较的含量高，这是它的明显特点。 B5培养基。B5培养基的主要特点是含有较低的彼，这是因为鞍可能对不少培养物的生长有抑制作用。经过试验发现，有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好，而另一些植物，在B5培养基上更适宜。 ⑶N6培养基。N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养，在国内外得到广泛应用。在组织培养屮，经常采用的还有怀特(While, 1963)培养基、尼许(Nitsch, 1951)培养基等。它们在基本成分JL大同小异。怀特培养基由于无机盐的数量比较低，更适合木本植物的组织培养。三、培养液的配制 1.制备母液为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基屮的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、100、1/1000,加以稀释, 即成培养液。现将培养液屮各类物质制备母液的方法说明如下。大量元素。大量元素包括硝酸较等用量较大的几种化合物。制备吋，按表屮排列的顺序，以其10倍的用量，分别称出并进行溶解，以后按顺序混在一起，最后加蒸惚水，使其总量达到1升，此即大量元素母液。微量元素。因用量少，为称量方便和精确起见，应配成100倍或1000倍的母液。配制时，每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐次溶解并混在-起, 制成微量元素母液。 ⑶铁盐。铁盐耍单独配制。由硫酸亚铁(FeSO4-7H2O)5.57克和乙二胺四乙酸二钠(Na—EDTA)7.45克溶于1升水屮配成。每配1升培养基，加铁盐5毫升。