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花卉组培快繁技术.doc

花匠小妙招
2024-09-23 03:24

花卉组培快繁技术.doc

花卉组培快繁技术　　一、组培快繁的意义　　组培快繁是指在无菌条件下，采用人工培养基及人工培养条件，对植物的营养器官或细胞诱导分化，达到高速繁殖而形成，小植株的技术。该技术有以下优点。　　1.繁殖速度快这对加速新品种的推广更为有利，使新品种能在短期内推广到生产中去。也能使种苗生产企业获得显著的经济效益。　　2.繁殖脱毒苗组织培养都是在灭菌的条件下进行的，培养的苗为脱毒苗。脱毒苗长势强健，抗逆性强，产花量高，品质优，经济效益也会显著提高。　　3.不受季节限制采用组织培养繁殖苗木可以不受季节限制，一年四季均可进行，在人工控制的条件下实现育苗工厂化，可根据市场需要随时提供幼苗。　　二、组培快繁的基本原理　　组培快繁是根据植物细胞全能性的理论发展起来的一项技术。细胞全能性是指植物体中每个具有完整细胞核的细胞，都具有该植物的全部遗传信息和产生新的完整植株的能力。在一个完整植株上的某部分体细胞只是表现一定的形态，具有一定的功能，体细胞一旦脱离原来所在的器官或组织，在一定的营养、激素和环境条件的作用下，就表现出全能性，而生长发育成完整的植株。　　三、组培快繁生产的场地及其设备　　（一）实验室　　实验室根据生产要求分为准备室、洗刷室、灭菌室、无菌操作室和试管苗培养室。准备室主要用于化学药品的称量和溶液的配制，洗刷室主要用于培养容器的洗刷工作，灭菌室主要用于培养基的消毒灭菌工作，无菌操作室主要用于植物材料的消毒接种，试管苗继代转苗，整个技术操作是在无菌环境中进行的。试管苗培养室主要用于植物材料接种后的培养、试管苗继代培养与生根培养。　　（二）采用的仪器和设备　　1.制备培养基的设备与器材主要包括：天平、酸度计、蒸馏水器、冰箱、烘箱、高压灭菌锅、晾瓶架、水槽、实验台、药品柜、玻璃器皿（烧杯、量筒、三角瓶、容量瓶、培养皿、广口瓶、吸管）等。　　2.无菌接种的设备与器材主要包括超净工作台和各种接种工具（如镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯及双目实体解剖镜等）。　　3.培养设备主要包括空调机、除湿机、定时器、培养架、光照培养箱等。　　四、培养基的制备　　（―）培养基的组成　　用于植物组织培养基种类已有几十种，但基本组成都包括无机营养元素、有机附加成分、碳素、琼脂、生长调节剂、水等。无机营养元素主要包括大（常）量元素与微量元素。有机附加成分主要包括维生素、肌醇、氨基酸等。　　（二）培养基的制备　　1.配制前的准备必须将所用的玻璃器皿洗净，烘干备用。　　2.溶解琼脂和蔗糖。　　3.加入母液培养基的成分按一定顺序排列。制备培养基时，将各种成分的药剂先溶解成水溶液，配成各种母液，再按照母液的顺序依次加入到烧杯中，待用。　　4.调节pH值。　　5.分装培养基培养基冷却前应灌装完毕，且避免培养基粘在瓶壁上。　　6.培养瓶封口用塑料封口膜、塑料瓶盖等材料将瓶口封严。　　7.培养基灭菌将包扎密封好的培养瓶放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌，取出后在干净柜中存放，待用。　　五、组培快繁生产程序　　（一）外植体的启动培养选择　　1.外植体的选择植物的任何器官包括细胞或组织都能作外植体，如根尖根段、茎尖茎段、叶片叶柄、花瓣花萼、皮层维管束、髓细胞、表皮细胞、薄壁细胞、子叶、胚珠、子房等。不同种类植物、不同组织和器官对诱导条件的反应不一致，有的部位诱导成功率高，有的很难诱导分化、再分化，或者有的只分化芽不分化根，有的分化根不分化芽，所以外植体选择合适，组织培养就容易诱导，选择不合适就不易成功。外植体的选择除注意植物种类和部位之外，还要注意取材的部位与季节。凡是落叶休眠的植物，在春季萌发季节选取幼嫩的茎尖和茎段比较合适。生长末期或休眠期取外植体，大多数对诱导反应迟钝或不反应。　　2.外植体的灭菌与接种即茎尖、茎段及叶片的灭菌接种。植物的茎、叶部位有较多的茸毛、油脂、蜡质和枝刺，消毒前要经自来水较长时间的冲洗，在冲洗过程中，用软毛刷刷洗或用刀刮，用剪刀剪去茸毛。对多年生的木本植物材料冲洗时要用肥皂、洗衣粉等进行洗涤。洗涤后带入无菌操作室进行接种。　　整个接种过程都是在无菌条件下进行。先将接种工具、消毒的玻璃器皿、无菌水放入超净工作台，紫外灯消毒20分钟。进入无菌操作室，关闭紫外线灯，打开风机送风。将接种材料用无菌水反复冲洗3～5次放入无菌吸水纸上吸干水分，用剪刀将接种材料剪裁成几段，打开已准备好的培养基瓶盖或封口膜，在酒精灯无菌圈内接入外植体。接种过程中要注意防止环境菌类污染，一旦接种污染，既浪费了外植体材料，又浪费了培养基材料，还耽误时间。接种防污染是组织培养成功的关键技术。　　（二）增殖与继代培养　　外植体达到无菌培养后，在人为条件下经诱导产生茎段、丛生芽、原球