花粉和花药培养方法（19页）
13.3花粉和花药培养方法
花药培养的一般流程
低温处理
预处理γ-射线处理
高温处理
营养饥饿处理
取花蕾（镜检）
消毒
再分化脱分化接种
培养培养
再生植株愈伤组织形成
花粉培养的优点
花药培养产生的植株并不都是起源于花粉，容易受药壁、花丝、药隔
等体细胞组织的影响，再生的植株中会出现不同倍性的个体。
能更好地调节控制雄核发育的各种因子，而且能直接从单细胞开始观
察整个雄核发育的过程。
花粉是真正的单细胞单倍体，是突变体筛选及外源基因导入研究的有
用材料，对育种有很大的意义。
花粉群体大，一个花药中就有成千上万个小孢子，从花粉培养能得到
更多的花粉植株。
花粉培养
花粉的分离与纯化
自然散落法
挤压法
机械游离法
•磁搅拌法
•超速旋切法
小孢子纯化梯度离心前30%蔗糖梯度离心后
（小孢子形态、活力不一致）（获得均一的小孢子群体）
花粉培养
花粉培养方式
（1）平板培养
花粉置琼脂固化培养基上培养。
（2）液体培养
花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。
（3）双层培养
花粉置固体-液体双层培养基上培养。
花粉培养
花粉培养方式
（4）看护培养
利用花药或花药愈伤组织
释放出的活性物质促进花粉
小孢子发育。用一块活跃生
长的愈伤组织来看护单个细
胞，并使其生长和增殖。
花粉培养
花粉培养方式
（5）微室培养
利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养。
（6）条件培养基培养
利用培养过花药的液体培养基或含失活花药提取物的培
养基上培养。
花粉培养
移栽驯化
白化苗
白化苗的特性
生殖生长和雌蕊的发育均不正常，不能完成有性世代和获得白化苗的
种子，无法用这种方法证明它是否是一种可遗传性状。
在花粉白化苗的细胞中，常发现有微核存在。
白化苗叶肉细胞的细胞质中，无正常发育的成熟叶绿体，只存在前质
体到近乎正常叶绿体的各种形态的质体。
花粉白化苗和绿苗在蛋白质、RNA和DNA的组成上有明显差异。
花粉植株的白化现象是不可逆的，通过改变营养成分或其它条件都无
法使白苗转绿。
白化苗产生的原因和机理
内因：供体植株基因型、花粉发育时期。
外因：预处理、培养基成分、激素水平与种类、培养条件
和方法、愈伤组织转分化时间等。
机理：核基因起关键作用，导致质体DNA缺失，产生白化苗；
无性系变异。
控制：通过对花粉发育时期、预处理、培养基成分等因素
进行调控。
影响雄核发育和花粉花药培养的因素
基因型
供体植株生长条件和生理状态
•植株生长条件
•植株生长时期
•P-花粉的频率
花粉发育时期
花粉发育时期的确定
四分体:醋酸洋红染色单核期
双核期成熟花粉粒
花粉发育时期的确定
按照花蕾长度大小与花粉发育年龄的相关性，花蕾萼裂基部与花冠
顶部之差可以作为判断小孢子发育时期的基本指标。如马铃
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