一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法技术
本发明专利技术公开了一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法，包括以下步骤：诸葛菜种植，小孢子培养和植株再生、移栽；在小孢子培养阶段中，热激培养时间和活性炭浓度对胚状体产量会造成影响，其中，活性炭的添加量与小孢子NLN‑13悬液的质量体积比(mg/mL)为：1:4～3:4；热激培养条件具体为：32～35℃暗培养1～7天。本发明专利技术可以快速获得数量较多的诸葛菜小孢子胚状体和遗传稳定的再生植株，有利于加快诸葛菜新品种培育的进程。
Method for cultivating Orychragmusviolaceus embryoid and plant
The invention discloses a method for culturing the embryoid and plant, which comprises the following steps: Orychragmusviolaceus planting, microspore culture and Plantlet Regeneration and transplanting; in the microspore stage, heat shock culture time and the concentration of active carbon will impact on Embryoid yield, the addition of activated carbon quality volume ratio the amount of NLN and 13 microspore suspension (mg/mL): 1:4 ~ 3:4; culture conditions for specific heat shock: 32 ~ 35 C were cultured in darkness for 1 ~ 7 days. The invention can rapidly regenerate plants Orychragmusviolaceus Microspore Embryoid number and genetic stability, helps to speed up the process of breeding new varieties of orychophragmusviolaceus.
【技术实现步骤摘要】
一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法
本专利技术属于植株培养领域，具体地说，涉及一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法。
技术介绍
诸葛菜[Orychophragmusviolaceus(L.)O.E.Schulz]为十字花科(Cruciferae)诸葛菜属植物，主要分布在中国，在许多地区都有自然分布或人工引种栽培。诸葛菜常被用作园林、城市绿化地被植物和花坛花卉，别称“二月蓝(兰)”。除本身具有较高的观赏价值外，诸葛菜还可能是创造红花观光型油菜品种的基因供体优良材料。将油菜近缘植物芥蓝(Brassicaalboglabra)与诸葛菜杂交，杂种即开紫红或粉红花(殷家明等，1998)。另外，诸葛菜还是极具开发前景的蔬菜和饲料种质资源。诸葛菜在我国分布广，遗传变异大，多样性丰富，这为诸葛菜的选育提供了材料基础。通过花药或花粉培养可以快速获得单倍体和纯合二倍体，有利于诸葛菜新材料的选育和研究。吴沿友等(吴沿友，罗鹏.1996.诸葛菜的花药培养.园艺学报，23(4):404-406.)进行诸葛菜花药培养，得到了少量胚状体和再生植株，而且所得植株为混倍体，且植株的组织来源是花药体细胞还是小孢子并不清楚。贾勇炯等(贾勇炯，唐琳，林宏辉，陈放，王幼平.1999.诸葛菜离体花粉粒诱导形成花粉植株的研究.四川大学学报(自然科学版)，36(6):1106-1110.)从4℃低温处理4天的诸葛菜花药中再分离小孢子进行培养，获得了愈伤组织和再生植株，其植株再生途径为小孢子愈伤组织，再生植株容易发生变异。然而，关于诸葛菜游离小孢子培养获得胚状体和再生植株还未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利...
【技术保护点】
一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)9月中下旬，将诸葛菜种子于大田播种育苗，将幼苗移栽到玻璃温室内土壤中，成活后每窝施复合肥5g，根据需要浇水；温室光照为自然光，温度不做特殊控制；开花后取样进行小孢子培养；2)小孢子培养：花期上午8～9点，从生长健康植株取4～5mm长花蕾，经5％氨替福民溶液消毒10～15min后用无菌水清洗；消毒花蕾置于培养皿中，加适量B5‑13培养液，其中，B5‑13培养液的pH5.8，含13％蔗糖，用注射器内筒研磨挤压出花粉，400目不锈钢筛网过滤，将花粉悬液转移到离心管中离心，弃上清液，再加入B5‑13培养液摇匀离心；如此重复离心3次后，用pH6.0的NLN‑13培养液按1蕾花粉/mL密度悬浮；将小孢子NLN‑13悬液混匀，分装于ф6cm培养皿，在每皿中添加活性炭储存液，封口膜封口后进行热激培养，然后转移到25℃下继续暗培养，肉眼可见胚状体时转入振荡培养箱中进行培养，得到子叶胚；3)植株再生、移栽：将振荡培养后的子叶胚转移到琼脂培养基上，在光照条件下培养；出芽后将芽切下继代保存和扩繁到每个花粉植株无性系具有3～5芽；移栽前1个月，将芽...
【技术特征摘要】
1.一种诸葛菜胚状体和植株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)9月中下旬，将诸葛菜种子于大田播种育苗，将幼苗移栽到玻璃温室内土壤中，成活后每窝施复合肥5g，根据需要浇水；温室光照为自然光，温度不做特殊控制；开花后取样进行小孢子培养；2)小孢子培养：花期上午8～9点，从生长健康植株取4～5mm长花蕾，经5％氨替福民溶液消毒10～15min后用无菌水清洗；消毒花蕾置于培养皿中，加适量B5-13培养液，其中，B5-13培养液的pH5.8，含13％蔗糖，用注射器内筒研磨挤压出花粉，400目不锈钢筛网过滤，将花粉悬液转移到离心管中离心，弃上清液，再加入B5-13培养液摇匀离心；如此重复离心3次后，用pH6.0的NLN-13培养液按1蕾花粉/mL密度悬浮；将小孢子NLN-13悬液混匀，分装于ф6cm培养皿，在每皿中添加活性炭储存液，封口膜封口后进行热激培养，然后转移到25℃下继续暗培养，肉眼可见胚状体时转入振荡培养箱中进行培养，得到子叶胚；3)植株再生、移栽：将振荡培养后的子叶胚转移到琼脂培养基上，在光照条件下培养；出芽后将芽切下继代保存和扩繁到每个花粉植株无性系具有3～5芽；移栽前1个月，将芽转移到生根培养基上生根；生根后的试管苗经炼苗1周后移栽到试验地，最初1周内用白色塑料膜遮蔽。2.根据权利要求1所述的诸葛菜胚状体和植株的...
【专利技术属性】
技术研发人员：殷家明，林呐，唐章林，李加纳，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50
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