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月季的花药离体培养

花匠小妙招
2024-08-23 13:50

1、课题课题2 月季的花药培养月季的花药培养花的结构花的结构一、被子植物的花粉发育一、被子植物的花粉发育雄蕊雄蕊：花丝花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒花药：囊状结构，内有很多花粉粒花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的单倍体的生花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的单倍体的生殖细胞。殖细胞。减数分裂减数分裂有丝分裂有丝分裂花粉的发育要经历：四分体时期、单核花粉的发育要经历：四分体时期、单核期（单核居中期和单核靠边期）、双核期（单核居中期和单核靠边期）、双核期期注意注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）胞核和生

2、殖细胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。两个精子和一个营养核的基因型相同。两个精子和一个营养核的基因型相同。1 1花粉母细胞花粉母细胞4 4个小孢子个小孢子减分减分有分有分4 4个花粉管细胞核个花粉管细胞核4 4个生殖细胞核个生殖细胞核有分有分8 8个精子个精子花粉花粉花粉花粉胚状体胚状体愈伤组织愈伤组织从芽从芽从芽从芽生根生根移栽移栽脱分化脱分化分化分化再

3、分再分化化诱导诱导三、影响花药培养的因素三、影响花药培养的因素1、材料的选择、材料的选择不同植物的诱导成功率很不相同不同植物的诱导成功率很不相同同一亲本：同一亲本：亲本植株的生理状况对诱导成功率也有直接影响亲本植株的生理状况对诱导成功率也有直接影响（早期的花药比后期的更容易产生花粉植株）（早期的花药比后期的更容易产生花粉植株）选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素因素（在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高培养成功率最高。）。）2 2、培养基的组成、培养基的组成（MS

4、培养基+不同比例的激素）3 3、亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及、亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度接种密度等对诱导成功率都有一定影响一、材料的选择：一、材料的选择：花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即一般，月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。月季的初花期。选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在重要因素。一般来说，在单核期单核期，细胞核由中央移向细，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花

5、药培养成功率最高。胞一侧的时期，花药培养成功率最高。为了挑选到为了挑选到单核期单核期的花药，通常选择的花药，通常选择完全未开完全未开放的花蕾放的花蕾。一、材料的选取二、材料的消毒三、接种和培养选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。粉是否处于适宜的发育期。最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋红法醋酸洋红法。但是，某些植。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青焙花青- -铬矾法铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色蓝黑色。1 1、花蕾用、花蕾用V/VV/V为为70

6、%70%的酒精的酒精浸泡浸泡3030秒秒2 2、无菌水清洗、无菌水清洗3 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4 4、放入、放入质量分数为质量分数为0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中2424分钟分钟（也可（也可质量分数为质量分数为1%1%的次氯酸钙溶液或饱和漂的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液白粉溶液）5 5、无菌水冲洗、无菌水冲洗3535次次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。态，所以只要将整个花蕾

7、或幼穗消毒即可。灭菌后花蕾，要在灭菌后花蕾，要在无菌条件无菌条件下除去萼片和花瓣，下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织的愈伤组织），同时还要彻底），同时还要彻底去除花丝去除花丝，因为与花丝相因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。通常每瓶通常每瓶接种花药接种花药7-107-10个个，温度控制在，温度控制在2525左左右，右，不需要光照不需要光照。幼小植株形成后才。幼

8、小植株形成后才需要光照。需要光照。一般经过一般经过20-3020-30天培养后，会发现花药开裂，天培养后，会发现花药开裂，长出长出愈伤组织或释放出胚状体愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出如果花药开裂释放出胚状体胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。上，否则这些植株将很难分开。在花药培养

9、中，特别是通过在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。（主要原出现染色体倍性的变化。（主要原因是因是营养核和生殖核融合营养核和生殖核融合造成的。）造成的。）植物组织培养技术与花药培养技术的异同点植物组织培养技术与花药培养技术的异同点项目项目相同点相同点不同点不同点植物组织培养技植物组织培养技术术离体的植物组织离体的植物组织经脱分化形成愈经脱分化形成愈伤组织，再分化伤组织，再分化成丛芽，诱导出成丛芽，诱导出根，然后进行移根，然后进行移栽。栽。外植体为体细胞，外植体为体细胞，染色体数无需加染色体数无需加倍。倍。花药培养技术花药培养技

10、术取材为花药，培养取材为花药，培养的为单倍体幼苗，的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不植株弱小，高度不育，必须用秋水仙育，必须用秋水仙素处理，使染色体素处理，使染色体加倍，恢复正常植加倍，恢复正常植株的染色体数，而株的染色体数，而且为纯种。且为纯种。练习：小麦高杆（练习：小麦高杆（D）对矮杆（）对矮杆（d）为显性，抗锈病（）为显性，抗锈病（T）对不抗锈病（）对不抗锈病（t）为）为显性，现有高杆抗锈病和矮杆不抗病的两种纯合体，要获得矮杆抗锈病的良种，显性，现有高杆抗锈病和矮杆不抗病的两种纯合体，要获得矮杆抗锈病的良种，可用杂交育种和单倍体育种法，步骤如下：可用杂交育种和单倍体育种法，步骤如下：高杆抗锈病高杆抗锈病矮秆不抗锈病矮秆不抗锈病 P DDTT ddtt (一一)F1的基因型表现型的基因型表现型 a各种配子的种类各种配子的种类 a （二）（二）符合要求的单倍体的基因型符合要求的单倍体的基因型良种的基因型表现型良种的基因型表现型（三）（三）（1）请在上图横线上填写上基因型、表现型内容。）请在上图横线上填写上基因型、表现型内容。（2）图中（一）（二）（三）采用的处理方法分别是）图中（一）（二）（三）采用的处理方法分别是、、