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翠叶芦荟提取物、制备翠叶芦荟提取物的方法和高血糖改善剂的制作方法

花匠小妙招
2024-12-20 08:19

专利名称：：翠叶芦荟提取物、制备翠叶芦荟提取物的方法和高血糖改善剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物(cyclolanostane)和洛飞烯醇(口7工/一少)化合物组成的混合物的翠叶，荟(aloevera)提取物、通过超临界流体提取法制备该翠叶,荟提取物的方法、以及高血糖改善剂，所述高血糖改善剂包含作为有效成分的包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的翠叶声荟提取物。技术背景已知高血糖恶化的状态会导致很多疾病，这种状态也称作糖尿病。在日本，据说有超过1600万人处于前驱糖尿病状态(所谓的处于边缘的患者)，从当前的生活方式考虑，预计患者的数量在未来会继续增长。为了预防由高血糖状态导致的糖尿病发病，必须长期控制血糖水平。高血糖状态是一种血糖水平超过正常范围的状态，正常范围下，空腹血糖水平110mg/dl或更低，75g糖负荷后1小时血糖水平160mg/dl，75g糖负荷后2小时血糖水平120mg/dl(非专利文献1)。血红蛋白Alc,—种葡萄糖和血红蛋白的结合物，相应于高血糖的程度而增加。因为血红蛋白Alc—旦产生就不会消除，直至红细胞寿命(120天)完结，其在过去很长时间里作为血糖控制状态的指标(非专利文献1)。同时，现在使用a-葡糖苷酶抑制剂、用作胰岛素分泌促进剂的磺酰脲(sulfourea)药物、用作胰岛素耐受改善剂的噻唑烷衍生物等作为糖尿病的治疗剂。但是，其药效并不令人满意，它们有很多问题，例如由于血糖水平急剧降低导致昏迷等副作用。同时，作为包含具有抑制血糖水平提高效果的天然来源的成分的药物，现有技术参考文献披露了包含来自大花紫薇(banaba)的成分的高血糖抑制剂(专利文献1),包含小麦或大麦发酵物浓缩提取物作为有效成分的高血糖抑制剂(专利文献2)等。植物甾醇大致分为三类4-去曱基甾醇；4-单曱基甾醇；和4,4-二曱基甾醇。4-去甲基甾醇的例子包括一般广泛所知的胆固醇、菜油甾醇、菜子甾醇、谷甾醇、豆甾醇和岩藻甾醇，4-单曱基甾醇的例子包括洛飞烯醇和foliol,4,4-二甲基甾醇的例子包括环木菠萝烷醇和羽扇醇。作为制备这些植物甾醇的方法，已经公开了用甲醇从菜籽油和大豆油中收集植物甾醇的方法，和包括将粗植物甾醇浸渍在有机溶剂中，分离有机溶剂以分离P-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜子甾醇的方法(专利文献3)。已经公开了制备4，4-二曱基甾醇的方法，包括制备环阿屯醇和24-亚曱基环木菠萝烷醇(其常用名是24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇)的方法(专利文献4);和由"谷维醇制备环阿屯醇阿魏酸盐的方法，和用其水解产物作为起始物质合成化合物的方法(专利文献5)。但是，制备4-单曱基甾醇，特别是具有洛飞烯醇骨架化合物的方法还是未知的。作为通过超临界流体提取法分离植物甾醇的技术，已经公开了胡萝卜素、维生素E、和其他微量成分浓缩物的一和二-阶段超临界流体提取法。例如，已经公开了提取天然脂肪和油中的植物甾醇(菜油甾醇、豆甾醇、P-谷甾醇)的方法(专利文献6)、通过超临界流体提取法制备魔芋中的植物甾醇的方法和含有其的降胆固醇剂、前列腺肥大改善剂、和食物或饮料(专利文献7)等。百合科的声荟属是一种包括翠叶芦荟(AloebarbadenisisMiller)和木立声荟(AloearborescenMillervar.NatalensisBerger)等的植物，才艮据经验已知它们具有各种功效。关于芦荟属植物功效中的改善血糖水平的现有技术包括在美国进行的临床研究(非专利文献2);在动物中观察到的降血糖作用(非专利文献3或4);和f荟属植物中的多糖类的降血糖作用(专利文献8)。同时，也公开了芦荟压榨液和包含该压榨液作为有效成分的降血糖剂(专利文献9)。同时，作为提取芦荟中的具有血糖水平改善作用的有效成分的技术，已经公开了下列技术。例如，所述技术包括一种制备翠叶,荟凝胶母液的方法，包括用氯灭菌，在90。C下过热化，并过滤(专利文献10);一种制备翠叶芦荟凝胶压榨液的方法，特征在于所有步骤都是在75匸以下进行的(专利文献11);一种通过压榨和过滤步骤并通过活性炭、硅藻土和无菌过滤器处理得到的翠叶芦荟压榨液，所有生产工序的加热都要控制在60。C、30分钟(专利文献12);—种制备声荟产品的方法，包括由声荟植物的叶子制备芦荟汁；调节汁的pH至33.5;通过加入水溶液低级脂肪族极性溶剂析出活化物，形成不均勻溶液；和除去水溶性低级脂肪族极性溶剂和可溶物质，分离出析出的活化物(专利文献13)。另外公开了一种制备具有免疫抑制改善效果的提取物的技术，包括超离心翠叶芦荟；收集所得上清液的乙醇溶解部分；用丁醇对该部分进行分配提取(专利文献14)、和一种制备肥胖的预防和改善剂的技术，包括用乙酸乙酯或丁醇对芦荟压榨液或溶剂提取物的水溶液进行分配提取(专利文献15)。专利文献l:JP2003-95941A专利文献2:JP2002-371003A专利文献3:JP2002-542161A专利文献4:JP57-018617A专利文献5:JP2003-277269A专利文献6:JP2005-87998A专利文献7:JP2003-113394A专利文献8:JP60-214741A专利文献9:JP2003-286185A专利文献10:JP2002-68997A专利文献11:JP2002-284661A专利文献12:JP2002-205955A专利文献13:JP2832551B专利文献14:JP08-208495A专利文献15:JP2000-319190A非专利文献1:日本临床，No.808,Vol.2，pp.405-409,2002非专利文献2:Phytomedicine,vol.3,pp.245-248,1996非专利文献3:PhytotherapyResearch,Vol.15，pp.157-161,2001非专利文献4:PhytotherapyResearch,Vol.7，pp.37-42,199
发明内容在用植物例如,荟开发功能性食品时，在使用植物时必须考虑其水分量。例如，在翠叶声荟凝胶(翠叶声荟的叶肉部分)中，水分量是约98%或更多，固体部分的大部分是由多糖类构成的。因此，由于物理的如上面专利文献810所述，已经研究了制备包含除去了翠叶声荟凝胶中的蒽醌类(蒽醌类化合物)的翠叶声荟凝胶的食品的技术，但是其重点是除去不想要的成分。因此，仅有这些技术并不能解决提供有效地提取目标有效成分，且不包含不想要的成分的制备方法的问题。另外，上述专利文献6或7公开了通过超临界流体提取法提取植物甾醇的方法，但是并没有描述和暗示有效地回收具有高血糖改善效果的植物甾醇、且得到不包含蒽醌类的提取物的方法，以及这种提取物。也就是说，不使用有机溶剂制备以用于食品为目的的翠叶声荟提取物的技术还是未知的，其中，该技术可以简便和有效地分离翠叶,荟中的植物甾醇和蒽醌类。基于上述目的，本发明人努力研究，目的在于得到作为功能性食品的材料发挥足够的活性，且适合加入到食品中的翠叶芦荟形态(组合物)。此外本发明人已经使用翠叶芦荟压榨液(或其千燥粉末)作为通过超临界流体提取法进行纯化的原料，结果，他们得到一种包含环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的提取物，该提取物的组成基本反映天然翠叶芦荟中的植物甾醇混合比，且该提取物几乎不包含蒽醌类，而且具有显著的高血糖改善效果，从而完成了本发明。本发明的目的在于提供翠叶芦荟提取物，其可以安全摄取，可以用作生活习惯病预防食品的材料，该提取物包含非常低水平的蒽醌，可以加入到食品中，包含植物甾醇(包括环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物)；和制备该翠叶芦荟提取物的方法。本发明的另一个目的是提供高血糖改善剂，其包含上述翠叶芦荟提取物作为有效成分。解决上述问题的本申请的第一方面发明涉及翠叶芦荟提取物，其包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物，该提取物具有下列性质(l)和/或(2):(1)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.75.1:4.9;和/或(2)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。在下文中，上述翠叶,荟提取物也称作"本发明的翠叶声荟提取物"。本申请第一方面发明的优选方面是下列的(3)和/或(4):(3)环羊毛甾烷化合物是9,19-环羊毛甾-3-醇和/或24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇；和/或(4)洛飞烯醇化合物是选自4-甲基胆甾-7-烯-3-醇、4-曱基麦角甾-7-烯_3-醇和4-曱基豆甾-7-烯-3-醇中的一种或多种化合物。解决上述问题的本申请第二方面的发明涉及包含本申请第一方面发明的翠叶，荟提取物的食品或饮料。本发明的食品或饮料中的翠叶,荟提取物的优选方面与本申请的第一方面发明相同。另外，食品或饮料中的翠叶,荟提取物的优选含量是0.01质量％或更多。解决上述问题的本申请的第三方面发明涉及制备翠叶,荟提取物的方法，包括通过冷冻干燥或热风千燥从翠叶,荟的不包括叶皮的叶肉部分除去水，制备粉末状翠叶芦荟叶肉；通过超临界流体提取法从得到的粉末状翠叶芦荟叶肉中提取翠叶f荟提取物，其中超临界流体提取法是基于下列条件(a)(e):(a)提取溶剂是二氧化碳；(b)提取温度是5069。C;(c)压力是15-60Mpa;(d)不使用夹带剂；和(e)提取时间是5070分钟。解决上述问题的本申请的第四方面发明涉及高血糖改善剂，其包括翠叶芦荟提取物作为有效成分，所述翠叶芦荟提取物包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物，其中所述翠叶芦荟提取物具有下列性质(5)和/或(6):(5)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.7~5.1:4.9;和/或(6)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。本申请的第四方面发明的优选方面是下列的(7)和/或(8):(7)环羊毛甾烷化合物是9,19-环羊毛甾-3_醇和/或24-亚曱基-9,19-环羊毛甾-3-醇；和/或(8)洛飞烯醇化合物是选自4-曱基胆甾-7-烯-3-醇、4-甲基麦角甾-7-烯_3-醇和4-曱基豆甾-7-烯-3-醇中的一种或多种化合物。解决上述问题的本申请的第五方面发明涉及包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的翠叶芦荟提取物在制备高血糖改善剂中的用途，其中该翠叶，荟提取物具有下列性质(9)和/或(10):(9)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.7~5.1:4.9;和/或(10)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。需要注意的是，本申请第五方面发明的优选的方面是下列的(11)和/或(12):(11)环羊毛甾烷化合物是9,19-环羊毛甾-3-醇和/或24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇；和/或(12)洛飞烯醇化合物是选自4-甲基胆甾-7-烯-3-醇、4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇和4-甲基豆甾-7-烯-3-醇中的一种或多种化合物。解决上述问题的本申请的第六方面发明涉及一种方法，该方法的特征在于给要改善高血糖的对象施用包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的翠叶,荟提取物，其中该翠叶声荟提取物具有下列性质(13)和/或(14):(13)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.7~5.1:4.9;和/或(14)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。本发明的翠叶芦荟提取物是安全的，具有显著的高血糖改善效果，可以用作功能性食品，特别是特定保健用食品的材料。同时，蒽醌类(蒽醌类化合物)的含量低，因此该提取物可以作为食品摄取。同时，本发明的翠叶芦荟提取物不包含不适合作为食品添加剂的物质例如有机溶剂，因此可以用于所有食品。同时，本发明的制备方法可以提供适合开发利用翠叶,荟的功能性食品的材料，促进了翠叶芦荟在食品中的使用。具体实施方式下文将详细描述本发明的优选实施方案。但是本发明并不仅限于下列的优选实施方案，而是可以在本发明的范围内自由改变。应当注意，在本说明书中，除非另有说明，百分比是以质量计。在本发明的翠叶,荟提取物中，由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的含量是1.0质量％或更多，优选1.2质量％或更多，进一步优选2.0%或更多。环羊毛甾烷化合物是下列通式(l)表示的化合物(具有环羊毛甾烷骨架的化合物)。[化l]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>在通式(I)中，Rl表示直链或支链的具有6到8个碳原子的烷基或包括一个或两个双键的烯基，或通过将上述烷基和烯基的一个或两个氢原子用羟基和/或羰基取代而得到的取代烷基或取代烯基；R2和R3分别独立地表示氢原子或甲基；R4与构成环的碳原子形成C=0或表示下式中的任一个。[化2]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>在上面的通式(I)中，Rl优选是下式表示的基团中的任一个。[化3]_CH2-CH2_CH2-CH(CH3)2-CH2_CH2-CHRa-C(CH3)2Rb(其中Ra是氢原子、羟基或曱基；Rb是氢原子或羟基)-CH2-CH2-CH(CH2CH3)-CH(CH3>2-CH2-CH2-CHRc-C(CH3)=CH2(其中Rc是氢原子、羟基或甲基)_CH2-CH2-C(=0)-C(CH3)=CH2-CH2-CH2_C(=CH2)_CH(CH3)2_CH2_CH2-CH=C(CH3)2-CH2_CH=C(CH3)-CH(CH3)2-CH2-CH2-C(=CHCH3)_CH(CH3)2另外，洛飞烯醇化合物是以下通式(2)表示的化合物(具有洛飞烯醇骨架的化合物)[化4]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>在通式(2)中，Rl表示直链或支链的具有516个碳原子的烷基或包括一个或两个双键的烯基。所述烷基或烯基可以是通过将至少一个氢原子用羟基和/或羰基取代而得到的取代烷基或取代烯基。R2和R3分别独立地表示氢原子、具有1~3个碳原子的烷基或取代烷基；R4与构成环的碳原子形成C=0,或者表示-OH或-OCOCH3。上述具有1~3个碳原子的烷基优选是曱基、乙基等，特别优选是曱基。在上述通式(2)中，Rl优选是下列式代表的任一基团。[化5]-CH2_CH2-CH(_CH2-CH3)-CH(CH3)2-CH2-CH2-CH=C(CH3)2-CH2-CH=C(CH3)-CH(CH3)2_CH2_CH2_C(=CH_CH3)_CH(CH3)2-CH2_CH2-CH(Ra)=C(CH3)Rb(其中Ra和Rb是-H、-011或-(:113中的任意一个)-CH2_CH2-CH(Rc)-CH(CH3)Rd(其中Rc和Rd是-H、-OH或-CH3中的任意一个)本发明的翠叶芦荟提取物的植物甾醇中的环羊毛甾烷化合物与洛飞烯醇化合物的质量混合比优选环羊毛甾烷化合物洛飞烯醇化合物=6.3:2.7-5.1:4.9的范围；更优选环羊毛甾烷化合物洛飞烯醇化合物=6.3:3.75.5:4.5的范围。进一步，环羊毛甾烷化合物优选是9,l屮环羊毛甾各醇(用下式(3)表示)和/或24-亚曱基-9,19-环羊毛甾-3-醇(用下式(4)表示)，洛飞烯醇化合物优选为选自4-曱基胆甾-7-烯-3-醇(用下式(5)表示)、4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇(用下式(6)表示)和4-曱基豆甾-7-烯-3-醇(用下式(7)表示)中的一种或多种化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>[化10]<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>(7)同时，本发明的翠叶声荟提取物可以包含不会导致实用问题的量的蒽醌类化合物，例如,荟宁、f荟苷或芦荟大黄素(在本发明中，有时称作"蒽醌类")，但是这些化合物的含量优选小，因为它们具有緩泻作用。特别地，本发明的翠叶声荟提取物优选包含0.001质量％或更少，进一步优选0.0003质量％或更少的芦荟宁或,荟苷，或特别优选地，该提取物不包含,荟宁或,荟苷。同时，本发明的翠叶,荟提取物优选包含0.001质量％或更少，进一步优选0.0003质量％或更少，最优选0.00028质量％或更少的声荟大黄素。本发明的翠叶声荟提取物可以由起始原料，属于百合科芦荟属的翠叶，荟(AloebarbadenisisMiller)通过下述方法制备。可以如下制备与本发明的翠叶，荟提取物相同的提取物以与本发明相同的方法，用多汁植物，例如木立芦荟(AloearborescenMillervar.natalensisBerger)作为起始物质，制备木立芦荟提取物等。例如，如果翠叶,荟的叶子是横切的，就会现出厚角质层覆盖的表皮外壁。在表皮下方有分化成绿组织细胞(緑色,細胞,)和作为薄壁组织已知的细胞壁薄的细胞的叶肉。薄壁组织细胞包含透明粘液样胶状物(jelly)。具有内部维管束鞘细胞的维管束包含具有緩泻性质的黄色液汁，位于两个大细胞之间。翠叶芦荟具有两种主要液体来源黄色胶乳(渗出物)和透明凝胶(粘液)。特别地，来自植物薄壁组织细胞的透明凝胶(粘液)称作翠叶,荟凝胶。如上所述，翠叶声荟的叶子包括三个不同的部分(l)黄色液汁，主要是蒽醌类(蒽醌类化合物)；(2)内部凝胶基质或"叶肉"；和(3)"皮(叶皮)"，包括外皮、顶部、基部和刺。本发明的翠叶声荟提取物优选用超临界流体提取法制备。具体地，该提取物如下制备通过冷冻干燥或热风干燥从翠叶芦荟的不包括叶皮的叶肉部分除去水,制备粉末状翠叶,荟叶肉；将得到的粉末状翠叶芦荟叶肉进行基于下列条件(a)(e)的超临界流体提取法(a)提取溶剂是二氧化碳；(b)提取温度是5069。C;(c)压力是15-60Mpa;(d)不使用夹带剂；和(e)提取时间是5070分钟。从改善环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的提取效率的观点出发，可以使用超临界丙烷、超临界乙烯、超临界1,1,1,2-四氟乙烷等作为提取溶剂，而从改善食品或饮料的安全性的观点出发，优选使用二氧化碳。提取温度可以从28。C120。C范围适当选择，但是为了改善环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的提取效率和减少蒽醌类化合物(例如,荟大黄素)的含量，温度优选为50~69°C，进一步优选为50~59'C。另外，压力可以从5.560Mpa范围适当选择，但是为了改善环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的提取效率和减少蒽醌类化合物的含量，压力优选的范围是1560Mpa,进一步优选的范围是1524Mpa。此外，在本发明中，从改善环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的提取效率的角度考虑，可以使用夹带剂例如乙醇，但从减少蒽醌类化合物的含量的角度考虑，优选不使用夹带剂。本发明的翠叶，荟提取物具有降低血红蛋白Alc水平的作用，因此，它可以在较长时间控制血糖水平。因此，本发明的翠叶芦荟提取物可以用作高血糖改善剂的有效成分。本发明的高血糖改善剂中的环羊毛甾烷化合物、洛飞烯醇化合物和蒽醌类化合物的含量与本发明的翠叶芦荟提取物中的相同。同时，本发明的翠叶,荟提取物可以用作改善高血糖的药物或食品或饮料的有效成分。因此，含有本发明的翠叶声荟提取物的改善高血糖的药物(下文也称作"本发明的药物，，)可以是本发明的翠叶芦荟提取物本身等，或可以用翠叶芦荟提取物等与药学可接受的药物载体组合来制备，并可以通过口服或胃肠外施用于哺乳动物，包括人。在本发明的药物中，翠叶，荟提取物中的环羊毛甾烷化合物和/或洛飞烯醇化合物可以是药学可接受的盐。药学可接受的盐包括金属盐(无机盐)和有机盐，盐的列表如"Remington'sPharmaceuticalScience,第17版,第1418页，1985"所示。具体地，其例子包括但不限于无机盐例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、二磷酸盐和氢溴酸盐；有机盐例如苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐(pamoates)、水杨酸盐和^5更脂酸盐。另外，药学可4矣受的盐可以是金属例如钠、钾、钩、镁或铵的盐，或氨基酸例如赖氨酸的盐。此外，含有翠叶,荟提取物中的环羊毛甾烷化合物和/或洛飞烯醇化合物或其药学可接受的盐的水合物等溶剂化物的药物也包括在本发明中。对本发明的药物的剂型并没有特别的限制，可以根据治疗目的适当地选择。其具体例子包括片剂、丸剂、散剂、溶液、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶嚢剂、糖浆、栓剂、注射剂、软膏、贴剂、滴眼剂、滴鼻剂等。在进行制剂时，可以使用在血糖改善剂中通常用作药物载体的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味剂、稀释剂、表面活性剂和注射用溶剂等添加剂。此外，只要不损害本发明的效果，本发明的翠叶芦荟提取物可以与其他具有高血糖改善效果的药物联合使用。尽管对本发明的药物中包含的本发明的翠叶芦荟提取物的量并没有特别的限制，可以适当的选择，但以由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的量计，在药物制剂中其量可以是例如0.001-10质量％,优选0.01~1质量％。本发明的药物可以用于治疗性或预防性地治疗由高血糖状态导致的疾病例如糖尿病及其相关症状和状况(可能发展成糖尿病或相关状况)。特别地，也可以用于预防由高血糖状态导致的糖尿病发病。此外，本发明的药物可以治愈或预防各种由高血糖状态导致的疾病、并发症等，并降低这些疾病、并发症等的危险。各种由高血糖状态导致的疾病和并发症的例子包括糖尿病性;現网膜病、糖尿病性肾病、糖尿病性神经病变、糖尿病性坏疽、糖尿病引起的脑中风、糖尿病引起的心肌梗塞等。"高血糖状态，，是指血糖水平超过正常范围的状态，正常范围一般定义为空腹时血糖水平为110mg/dl或更低，在75g糖负荷后1小时血糖水平为160mg/dl或更低，在相同糖负荷后2小时血糖水平为mg/dl或更低(日本临床，No.806，Vol.1,第28-35页，2002)。此外，本发明的药物优选用于治疗血红蛋白Alc水平高于正常水平的患者，例如，血红蛋白Alc水平为5.8%或更高。本发明的药物的施用时间并没有特别的限制，可以根据目标疾病的治疗方法选择。此外，施用途径优选是根据剂型、患者的年龄、性别和其他情况、患者症状的严重度等来确定。本发明的药物的有效成分的剂量可根据用法、患者的年龄、性别、疾病的严重度、其它状况等适当选择。由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的量通常选自0.00150mg/kg/日，更优选0.011mg/kg/日，作为试验剂量。以本发明的翠叶芦荟提取物的千燥质量计，优选为0.11000mg/kg/天，更优选为l-100mg/kg/天，作为试验剂量。本发明的药物可以一天一次或分成数次施用。此外，本发明的翠叶,荟提取物等可以包含在食品或饮料中。只要不会减小上述有效成分的效果，对食品或饮料并没有特别的限制。此外，只要可以获得上述有效成分的效果，对本发明的食品或饮料中的翠叶芦荟提取物的含量并没有特别的限制，但优选是0.0150质量％，特别优选0.01~20质量％。此外，本发明的食品或饮料除了要向其中加入上述有效成分之外，可以通过常规方法，使用通常食品或饮料所使用的原料进行制备。本发明的食品或饮料可以用于各种利用高血糖改善效果的用途。例如，可以用于下列的用途适合那些开始担心其血糖水平的人的食品々欠料，用于降低或消除与生活方式有关的疾病例如糖尿病等的危险因素的食品或饮料。对于本发明的食品或饮料，短语"改善高血糖，，是指改善或预防由高血糖导致的各种健康损害，作为本发明的食品或饮料的其他作用和效果，在本发明中可以列举"预防高血糖，，，"抑制血糖水平升高"，"改善血糖水平升高，，，"预防血糖水平升高，，等，它们与上述"改善高血糖"的含义相同。此外，本发明的食品或饮料可以用于治疗或预防由高血糖状态引起的疾病，例如糖尿病及其相关症状和状况(可能发展成糖尿病或相关状况)。特别地，它也可以用于预防高血糖状态引起的糖尿病发病。此外，本发明的食品或饮料可用于预防或治疗各种由高血糖状态引起的疾病、并发症等，并降低这些疾病、并发症等的风险。各种由高血糖状态导致的疾病和并发症的例子包括糖尿病性视网膜病、糖尿病性肾病、糖尿病性神经病变、糖尿病性坏疽、糖尿病引起的脑中风、糖尿病引起的心肌梗塞等。本发明的食品或饮料优选作为带有食品或饮料用于改善高血糖的标示的食品或饮料出售，例如，"标示为'用于改善高血糖，的包含具有高血糖改善效果的化合物的食品或饮料，，、"标示为'用于改善高血糖，的包含植物提取物的食品或饮料，，等。由于本发明的翠叶声荟提取物具有高血糖改善效果，应当认为"改善高血糖，，的标示也有"抑制血糖水平升高"的意思。因此，本发明的食品或饮料可以标示为"用于抑制血糖水平升高，，。也就是说，上迷"用于改善高血糖"的标示可以是"用于抑制血糖水平升高"的标示。将如上的标示中使用的词语限制为"用于改善高血糖，，或"用于抑制血糖水平升高，，并不必要，其他任意的表示改善高血糖和抑制血糖水平升高的效果的词语当然都落入本发明的范围内。作为这种词语，例如能使消费者意识到改善高血糖或抑制血糖水平升高效果的基于各种用途的标示也是可能的。例子包括，例如，"适合担心血糖水平的患者"，"用于降低或消除与生活方式有关的疾病例如糖尿病的危险因素(危险)"等的标示。上述术语"标示"包括告知消费者上述用途的所有行为，只要是使想起或类推出上述用途的任意标示都落在本发明的"标示"的范围内，而不管其标示的目的、内容、对象、媒介等。但是，优选通过使消费者直接认识到上述用途的表达进行标示。具体例子包括在本发明的食品或饮料相关的商品或商品包装上标示上述用途的行为，为分配、或传递或进口标示有上述用途的商品或商品包装的目的而进^f于的分配或传递或展示的行为，展示或分发广告，说明上述用途的商品的价格表或商业文件，或者通过电磁法(国际互联网等)提供包括说明上述用途的信息等。该标示优选是通过行政部门等认可的标示(例如，经过行政部门的各种法律制度批准，以被批准的形式标示)，特别优选是在包装、容器、目录、小册子和POPs、其他文件等销售现场的广告材料上的标示。标示的例子进一步包括，例如作为健康食品、功能性食品、经肠营养食品、特定用途食品，营养功能要求的食品、医药用部外品等的标示以及经过厚生劳动省批准的标示，例如，特定保健食品、与其类似的制度批准的标示。后者的例子包括作为特定保健食品的标示，作为附带条件的特定保健食品的标示，影响身体结构或功能的标示，降低疾病危险的标示等，更详细地，典型的例子包括在健康增进法施行细则(2003年4月30日日本厚生劳动省第86号)规定的特定保健食品的标示(特别是保健用途标示)及类似的标示。下文中，通过试验例详细地说明本发明。[试验例1]进行本试验是研究通过不同方法提取的翠叶^荟提取物的组成。(l)样品的制备(a)通过超临界流体提取法制备翠叶芦荟提取物对于60kg的翠叶,荟，将叶皮除去，收集叶肉部分。冷冻干燥收集的叶肉部分，这样制备出300g翠叶芦荟叶肉粉末。随后通过超临界流体提取法提取20g所得到的翠叶声荟叶肉粉末。用JASCOCorporation制造的C02输送泵(deliverypump)(SCF-GET)、PU-2080泵(PU-2080plus)和背压调节器(BackPressurRegulator)(SCF-BPG)和东洋高压社制造的搅拌器进行超临界流体提取，用二氧化碳作为提取溶剂，在表l所述的超临界提取条件18下进行，将在超临界提取条件下得到的翠叶芦荟提取物命名为提取物18。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>(b)通过有机溶剂提取法制备翠叶芦荟提取物向100g翠叶芦荟凝胶加入2L包含等量氯仿和甲醇的混合溶液，在室温下搅拌2小时来提取混合物。用滤纸进行过滤除去不溶性部分，这样得到了提取液，然后通过蒸发器除去溶剂(氯仿和甲醇)，制得翠叶，荟提取物(提取物9)。(2)试验方法对于提取物19,用茱子甾醇(由和光纯药工业社制)作为内标物，通过LC-MS(由岛津制作所制造)测定下述化合物的含量环羊毛甾烷化合物9,19-环羊毛甾-3-醇和24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇；洛飞烯醇化合物4-甲基胆甾-7-烯-3-醇、4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇和4-甲基豆甾-7-烯-3-醇；和作为蒽醌类(蒽醌类化合物)的f荟大黄素。(3)试验结果本试验结果如表2所示。在表2中，各符号表示下列化合物。S:翠叶,荟提取物的总提取量(mg)，A:环羊毛甾烷化合物(两种化合物的混合物)，A-l:9,19-环羊毛甾-3-醇，A-2:24-亚甲基-9,l9-环羊毛甾-3-醇，B:洛飞烯醇化合物(两种化合物的混合物)，B-l:4-曱基胆甾-7-烯-3-醇，B-2:4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇，B-3:4-甲基豆甾-7-烯-3-醇，E:芦荟大黄素。通过有机溶剂提取法制备提取物的情况中，发现翠叶芦荟提取物的总提取量大于通过超临界流体提取法制备提取物的情况中的量。另一方面，通过超临界流体提取法制备的翠叶,荟提取物中的环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的混合物的含量一般高于(10倍或更高)通过有机溶剂提取法制备的翠叶,荟提取物中的量。同时，测定了被认为不适合作为食品添加剂的蒽醌的量。结果表明，在各个提取物中没有检测到,荟宁和,荟苷，仅检测到微量,荟大黄素，残留在翠叶芦荟提取物中的芦荟大黄素的量因提取方法或提取条件不同而不同。特别地，清楚地表明，超临界流体提取法中的提取条件l(不使用夹带剂进行的提取，条件为提取温度50。C，提取压力15Mpa,提取时间60分钟)可以最有效地除去,荟大黄素。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>进行本试验研究本发明的翠叶,荟提取物的高血糖改善效果。(1)样品的制备用DMSO水溶液将在与上述试验例1的超临界流体提取法的超临界流体提取条件1相同的条件下制备的翠叶,荟提取物的浓度调节为77吗/m1(以由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的浓度计，1fig/ml),制备成试验样品。在该步骤中，用生理食盐水将最终DMSO浓度调节为0.2%。另外，将翠叶,荟的叶皮除去，收集叶肉部分，用榨汁混合器破碎收集的叶肉部分，除去纤维状沉淀物得到翠叶声荟压榨液，将该压榨液作为对照样品。需要说明的是，用0.2。/。DMSO水溶液作为阴性样品。(2)试验方法作为II型糖尿病的小鼠模型，使用6周大的雄性db/db小鼠(购自CleaJapan,Inc.)并分组，每组7只小鼠。每天1次用探头给每组口服试验样品、对照样品和阴性样品(每个1ml)，共34天。在开始给予起后35天，用DCA2000(由Bayer-SankyoCo.,Ltd.)测定血红蛋白Alc。(3)试验结果该试验的结果如表3所示。结果表明，在施用试验样品的小鼠中血红蛋白Alc水平相对于施用阴性样品组降低了30%或更大，发现试验样品具有改善高血糖的活性。这样，在具有与试验样品相同的固体成分含量的翠叶芦荟压榨液中，完全没有观察到血红蛋白Alc水平的降低。因此，在以降血糖效果(高血糖改善效果)为指标的情况下，由有效量计算，本发明的翠叶芦荟提取物(超临界流体提取物)具有比翠叶芦荟压榨液高13,000倍的效果。此外，在施用试验样品的小鼠中，完全没有观察到病理学副作用。[表3]样品血液血红蛋白Alc相对值00P值试验样品69.4±6.20.0001*对照样品82.1±0.1o.or阴性样品100*:该符号表示该值在统计学上是有显著性的。在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明，但是并不仅限于下面的实施例。实施例1(翠叶声荟提取物的制备)对于60kg的翠叶声荟，将叶皮除去，收集叶肉(透明凝胶)部分。冷冻干燥收集的叶肉部分，这样制备出300g的翠叶,荟叶肉粉末。通过超临界流体提取法提取20g所得到的翠叶,荟叶肉粉末。用JASCOCorporation制造的C02输送泵(SCF-GET)、PU-2080泵(PU-2080plus)和背压调节器(BackPressurRegulator)(SCF-BPG)和东洋高压社制造的搅拌器进行超临界流体提取，用二氧化碳作为提取溶剂，条件为提取温度5(TC，提取压力15MPa，提取时间，60分钟，不使用夹带剂。结果，制得33mg翠叶芦荟提取物。通过LC-MS分析所得到的翠叶芦荟提取物的组成。结果表明提取物包含环羊毛甾烷化合物9,19-环羊毛甾-3-醇和24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇；和洛飞烯醇化合物4-甲基胆甾-7-烯-3-醇、4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇和4-甲基豆甾-7-烯-3-醇；并且9,19-环羊毛甾-3-醇、24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇、4-甲基胆甾-7-烯-3-醇、4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇和4-甲基豆甾-7-烯-3-醇的比例分别是0.437质量％、0.326质量％、0.182质量％、0.158质量％和0.161质量％。以与试验例2相同的方法测定了上述翠叶声荟提取物的高血糖改善效果，结果证实了降低血红蛋白Alc水平的效果。实施例2通过下列方法制备具有下列组成和高血糖改善效果的片剂药物。实施例1中制备的翠叶,荟提取物(千燥物)40(%)乳糖(由森永乳业社制造)18.5玉米淀粉(由日清制粉社制造)30.7硬脂酸镁(由太平化学产业制造)1.4羧甲基纤维素钙(五德药品社制造)9.4一边向翠叶,荟提取物(干燥物)、乳糖、玉米淀粉和羧甲基纤维素钩的混合物中适当地加入无菌纯净水一边进行均勻混炼，将混合物在50。C千燥3小时。向所得干燥物中加入硬脂酸镁，混合，然后根据常规方法压片，得到片剂，其包含约0.5质量％的环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的混合物。实施例3将10.8kg的乳清蛋白的酶降解产物(由森永乳业社制造)，36kg的糊精(由昭和产业社制造)、少量的水溶性维生素和矿物质溶解于200kg的水中，在槽(tank)中制备成水相。另一方面，混合3kg大豆烹饪油(由太阳油脂社制造)、8.5kg棕榈油(由太阳油脂社制造)、2.5kg红花油(由太阳油脂社制造)、0.2kg卵磷脂(由味0素社制造)、0.2kg脂肪酸甘油一酯(由花王社制造)和少量的脂溶性维生素并溶解，制备成油相。将油相加入到槽中的水相中，搅拌混合，将混合物加热到7CTC，然后在14.7MPa的压力下用均化器匀化。然后将匀浆物在9(TC灭菌10分钟，然后浓缩，接着喷雾干燥，制得约59kg的中间产品粉末。向50kg的中间产品粉末中加入6.8kg的蔗糖(由Hokuren制造)、167g的氨基酸混合粉末(由味0素社制造)和600g实施例1制备的翠叶芦荟提取物(干燥物)，将该混合物混合均匀，制成约57kg的肠用食品粉末，其包含约0.01质量％的翠叶,荟提取物(干燥物)，并具有高血糖改善效果。实施例4制备包含约0.05质量％的翠叶芦荟提取物的RyotoPolyglyEster(由三菱化学7—X株式会社制造)水溶液(120kg)(浓度1000ppm)，将160g的无水柠檬酸(由和光纯药工业社制造)、6g三氯蔗糖(sucralose))(由三荣源F.F.I.林式会社制造)和作为人造甜味剂的lgSunett(注册商标由Nutrinova制造)混合，并溶解于上述溶液中。此外，加入79.821kg水，最后加入12g香料(由长谷川香料株式会社制造)，制得调合液。用20目过滤器过滤所得到的调合液，将滤液在96。C土rC下灭菌30秒，并填入到125ml的纸罐(力一h缶)容器中，制成约950个包含约0.03质量％翠叶芦荟提取物、并具有高血糖改善效果的翠叶芦荟凝胶饮料。产业实用性本发明的翠叶芦荟提取物是安全的，具有显著的高血糖改善效果，可以用作功能性食品，特别是特定保健食品的材料，同时，蒽醌类(蒽醌类化合物)含量低，可以作为食品摄取，可以用于所有食品。此外，本发明的制备方法可以提供适合开发利用翠叶芦荟的功能性食品的材料，促进翠叶芦荟在食品中的应用。权利要求1.翠叶芦荟提取物，其包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物，其中该提取物具有下列性质(1)和/或(2)(1)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物∶洛飞烯醇化合物＝6.3∶2.7～5.1∶4.9；和/或(2)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。2.权利要求1所述的翠叶f荟提取物，其中，环羊毛甾烷化合物是9,19-环羊毛甾-3-醇和/或24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇。3.权利要求1或2所述的翠叶芦荟提取物，其中，洛飞烯醇化合物是选自4-曱基胆甾-7-烯-3-醇、4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇和4-曱基豆甾-7-烯-3-醇中的一种或多种化合物。4.食品或饮料，其包含权利要求l-3中任一项所述的翠叶,荟提取物。5.权利要求4所述的食品或饮料，其中翠叶芦荟提取物的含量是0.01质量％或更多。6.制备翠叶,荟提取物的方法，其包括通过冷冻干燥或热风干燥从翠叶^荟的不包括叶皮的叶肉部分除去水，制备粉末状翠叶芦荟叶肉；通过超临界流体提取法从所得粉末状翠叶声荟叶肉提取翠叶芦荟提取物，其中超临界流体提取法是基于下列条件(a)(e):(a)提取溶剂是二氧化碳；(b)提取温度是5069。C;(c)压力是15-60MPa;(d)不使用夹带剂；和(e)提取时间是50~70分钟。7.高血糖改善剂，其含有翠叶芦荟提取物作为有效成分，所述翠叶,荟提取物包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物，其中所述翠叶，荟提取物具有下列性质(1)和/或(2):(1)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.7~5.1:4.9;和/或(2)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。8.权利要求7所述的高血糖改善剂，其中环羊毛甾烷化合物是9,19-环羊毛甾-3-醇和/或24-亚甲基-9,19-环羊毛甾-3-醇。9.权利要求7或8所述的高血糖改善剂，其中洛飞烯醇化合物是选自4-曱基胆甾-7-烯-3-醇、4-曱基麦角甾-7-烯-3-醇和4-甲基豆甾-7-烯-3-醇中的一种或多种化合物。10.包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的翠叶芦荟提取物在制备高血糖改善剂中的用途，其中所述翠叶芦荟提取物具有下列性质(1)和/或(2):(1)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.7~5.1:4.9;和/或(2)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。11.权利要求10所述的用途，其中环羊毛甾烷化合物是9,19-环羊毛甾-3-醇和/或24-亚曱基-9,19-环羊毛甾-3-醇。12.权利要求10或11所述的用途，其中洛飞烯醇化合物是选自4-曱基胆甾-7-烯-3-醇、4-甲基麦角甾-7-烯-3-醇和4-曱基豆甾-7-烯-3-醇中的一种或多种化合物。13.为了改善高血糖给要改善高血糖的对象施用包含1.0质量％或更多的由环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物组成的混合物的翠叶声荟提取物的方法，其中所述翠叶,荟提取物具有下列性质(1)和/或(2):(1)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物:洛飞烯醇化合物=6.3:2.7~5.1:4.9;和/或(2)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。全文摘要本发明提供翠叶芦荟提取物，其可以安全摄取、可以用作食物的材料用于预防与生活方式有关的疾病，包含非常低水平的蒽醌类(蒽醌类化合物)，并可以加入到食物中；和制备该翠叶芦荟提取物的方法。通过超临界流体提取法可以制备包含1.0质量％或更多的环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇的混合物的翠叶芦荟提取物，并具有下列性质(1)和/或(2)(1)环羊毛甾烷化合物和洛飞烯醇化合物的质量混合比如下环羊毛甾烷化合物∶洛飞烯醇化合物＝6.3∶2.7～5.1∶4.9；和/或(2)蒽醌类化合物的含量是0.001质量％或更少。文档编号A61P3/10GK101128211SQ20068000612公开日2008年2月20日申请日期2006年11月20日优先权日2005年11月25日发明者山田宗夫,田中美顺申请人:森永乳业株式会社