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西兰花多肽提取物及其制备方法和应用

花匠小妙招
2024-11-24 22:00

西兰花多肽提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及西兰花多肽提取物领域，具体涉及一种西兰花多肽提取物及其制备方法和在制备增强免疫力保健食品和药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 西兰花(Brassica oleracea L.var.botrytis L)又名青花菜，为十字花科芸薹属一二年生植物，被誉为"蔬菜皇冠"，内含丰富的生物活性物质，其中包括萝卜硫素、多糖等抗肿瘤活性物质和多酚、黄酮等多种抗氧化活性物质，且蛋白和氨基酸含量也较高，具有非常高的食用和药用保健价值。
[0003] 国外已有研究证明萝卜硫素具有提高免疫力的功能。美国《营养学》杂志也刊登了西兰花能有效预防前列腺癌的研究成果。Shapiro TA等人通过临床实验比较西兰花芽提取物中的葡糖异硫氰酸盐、萝卜硫苷以及莱菔硫烷异硫氰酸盐的安全性、耐受性及在体内的代谢，但人们现在对于萝卜硫素等异硫氰酸酯的报道主要是分析检测、抗癌机理研究等方面。有关西兰花抗癌作用的报道还有黄酮这一活性成分，周向军等报道从Br 〇CC〇lini(西兰花与中国芥兰的杂交品种)叶中提取的黄酮可抑制人类肿瘤细胞株SW480、HepG2、Hela和A459 等的增殖，并能诱导SW480细胞株的凋亡，因此西兰花黄酮很可能也具有体外抗肿瘤活性。
[0004] 许多多肽因为具有强化人体免疫的功能而成为疗效显著的临床药物，如胰岛素、生长激素、释放抑制素 Somatostatin、脑活素多肽疫苗等，起到了过去的药品对付现代病毒所取不到的功能。荣建华研究了大豆多肽对小鼠免疫功能的影响，其结果表明大豆多肽能显著增加小鼠免疫器官的重量，增强机体非特异性免疫功能，还有些证据表明大豆多肽可以防治肿瘤，对肿瘤的生长有一定的抑制作用。
[0005] 增强免疫力已成为当今人们日益重视的一个保健问题，但有关将西兰花多肽分离增强免疫力方面的研究还很少有文献报道。随着现代社会的发展变革、人类疾病谱的改变和老龄化社会的到来，亚健康人群约占成年人的75 %-80 %，要求医疗模式由单纯的传统疾病治疗向预防、保健、康复与治疗相结合的现代医疗模式转变，从生病治病为主向治"未病" 为主转变。利用西兰花增强免疫力的多肽开发新型免疫康复药物、保健食品、化妆品和食品添加剂类产品服务于人类健康事业具有十分巨大的发展潜力。
[0006] 为了测试和评估本发明西兰花多肽提取物的增强免疫力方面的应用潜力，已使用本专业技术人员所熟悉的方法测试西兰花多肽提取物的生物活性。这些已知的测试方法包括小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验等。结果表明本发明提取的西兰花多肽提取物活性组分具有较好的增强免疫力作用。

【发明内容】

[0007] 本发明的目的是提供一种西兰花多肽提取物及其制备方法和在制备增强免疫力保健食品和药物中的应用，通过特定制备方法得到的西兰花多肽提取物，具有较好的增强免疫力作用。
[0008] 为了实现以上目的，本发明的第一个方面涉及西兰花多肽提取物及其制备方法，它是通过以下方法制备得到：
[0009] -种西兰花多肽提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0010] (1)取西兰花茎叶，先采用复合酶酶解（即进行酶解预处理），然后采用碱提，再分离、沉淀、洗涤、干燥得到西兰花蛋白粉；
[0011] ⑵取步骤（1)制备得到的西兰花蛋白粉，加入水，在温度45~60°C、PH8.5~10条件下，再加入碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行进一步酶解，灭酶，冷却，离心，旋转蒸发，浓缩后冷冻干燥，得到西兰花多肽酶解物；
[0012] (3)取步骤(2)制备得到的西兰花多肽酶解物，用滤膜超滤后进行葡聚糖凝胶柱分离，以磷酸盐水溶液作为洗脱液洗脱，收集洗脱液，过滤，蒸干，经收集干燥，得到西兰花多肽提取物。
[0013] 以下作为本发明的优选技术方案：
[0014] 步骤(1)中，所述的复合酶由质量比0.5~1.5:1的果胶酶与纤维素酶复配而成。进一步优选，所述的复合酶由质量比1:1的果胶酶与纤维素酶复配而成。
[0015] 所述的复合酶酶解，包括:在复合酶中加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比1~5g:100mL，之后将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解。进一步优选，复合酶的质量与酶解液的体积之比2.5g: 1 OOmL。
[0016] 所述的酶解的条件为：酶解温度50°C~70°C，酶解时间2h~4h。进一步优选，酶解温度60°C，酶解时间3h。
[0017] 所述的碱提的条件为:pH 7.5-9.0，碱提时间1-21!。
[0018] 所述的分离、沉淀、洗涤包括:在4000~6000r/min下离心10~20min，调节上清液 pH于等电点pi沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀，并调节pH至6.5~7.5，进一步优选，在 5000r/min下离心15min，调节上清液pH于等电点pi沉淀蛋白，弃去上清液，水洗沉淀三次，并调节pH=7.0。
[0019] 步骤(2)中，所述的西兰花蛋白粉的质量与水的体积之比为0.5g~2g:20mL，进一步优选，所述的西兰花蛋白粉的质量与水的体积之比为lg:20mL。
[0020] 所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为0.5~2:1，进一步优选，所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的质量比为1:1。
[0021] 所述的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的总添加量为西兰花蛋白粉质量的1.0%~ 5.0%〇
[0022]所述的进一步酶解的酶解时间为2~4h。
[0023]步骤(3)中，所述的滤膜采用德国赛多利斯生产的型号为Vivaf low 50的超滤膜。 [0024]所述的磷酸盐水溶液的pH为2~6。所述的洗脱的条件为：以上样量100mg计，流速 10~20mL/h，进一步优选，以上样量100mg计，流速15mL/h。
[0025]本发明第二个方面涉及对所述西兰花多肽提取物用于制备增强免疫力作用保健品和药物的用途，可用于制备增强免疫力保健食品和药物。
[0026]为了检测本发明所得的增强免疫力作用的性能，将本发明所得的增强免疫力西兰花组分配置成100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg药液，用于小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验等。结果表明西兰花多肽提取物具有显著的增强免疫力作用，可用于制备增强免疫力功能的保健食品或抗肿瘤等疾病的辅助药物。
[0027] 本发明的第三个方面涉及提供西兰花多肽提取物与药学上可接受的辅料组成的药物组合物。
[0028] 西兰花多肽提取物可单独或几种部位组合，进一步与辅料组合，剂型包括：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂等。
[0029] 本发明所述的载体和赋形剂包括药剂学常规应用的载体和赋形剂，例如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。
[0030] 下面的实施例和药理活性实验是对本发明的进一步详细说明，以下所列举的实施例不以任何方式构成限制。
[0031] 西兰花多肽提取物经过反复多次的增强免疫力作用验证，确认西兰花多肽提取物具有明显的增强免疫力作用，如小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠左右耳肿胀度差、小鼠碳廓清实验等，表明西兰花多肽提取物具有良好的增强免疫力作用，具有开发的潜力。
[0032] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0033] 本发明采用酶解加碱法提取西兰花蛋白后，再采用酶法制备西兰花多肽粗提物，并对西兰花多肽提取物的提取工艺进行了优化，在提取前和提取后分别采用酶法和层析法对西兰花多肽及其活性组分进行了处理和精制，进一步提高西兰花多肽提取物的得率，其工艺简单、得率高;设备简单，适合工业化生产。
【附图说明】
[0034] 图1为实施例1中Sephadex G-25分离小肽效果图。
【具体实施方式】
[0035] 实施例1西兰花多肽提取物的制备
[0036] (1)取西兰花茎叶，先进行酶解预处理，用果胶酶(诺维信（中国）生物技术有限公司）与纤维素酶(诺维信（中国）生物技术有限公司）按质量比1:1复配，形成复合酶，然后加入水，形成酶解液，复合酶的质量与酶解液的体积之比2.5g: 100mL，即酶添加总量2.5% (w/ v)，将西兰花茎叶放入酶解液进行酶解，酶解温度60°C，酶解时间3h，然后调pH 8-8.