显微镜的七种观察方式
显微镜的七种观察方式.doc显微镜的七种观察方式一•明视野观察(BrightfieldBF)明视野镜检是犬家比较熟悉的一种镜检方式,广泛应用于病理、检验,用于观察被染色的切片,所有显微镜均能完成此功能。(DarkfieldDF)暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的象。暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象,微尘在强光直射通过的情况卜,人眼不能观察,这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射,微粒似乎增人了体积,为人眼可见。m..m暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光朿由下至上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利川被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。暗视野观察的分辨率远髙于明视野观察,—(PhasecontrastPH)在光洋显微镜的发展过程屮,相差镜检术的发明成功,是近代显微镜技术屮的重要成就。我们知道,人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度),对于无色通明的生物标本,当光线通过时,波长和振幅变化不大,,也就是有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这人人便利了活体细胞的观察,因此相差镜检法广泛应用于倒宜显微镜。相茅显微镜的基本原理是,把透过标本的对见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射,偏离了原来的光路,同时被延迟了1/4九(波长),如果再增加或减少1/4儿则光程差变为1/2九,两束光合轴后干涉加强,振幅增大或减卞,提高反差。在构造上,相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特姝之处:环形光阑(annulardiaphragm)位于光源与聚光器之间,作川是使透过聚光器的光线形成空心光锥,焦聚到标本上。相位板(annularphaseplatc)在物镜屮加了涂有氟化镁的相位板,可将直射光或衍射光的相位推迟1/4入。分为两种:A+相板:将直射光推迟1/4入,两组光波合轴后光波相加,振幅加人,标本结构比周囤介质更加变亮,形成亮反差(或称负反差)。B+相板:将衍射光推迟1/4九,两组光线合轴厉光波相减,振幅变小,形成暗反差(或称正反差),结构比周围介质更加变暗相差原理微分T■涉镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图象呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真。原理;微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图象呈现出立体的三维感觉。微分干涉图片DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。DIC利川的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器(analyzer)0偏振器山接装在聚光系统的前而,使光线发生线性偏振。在聚光器屮则女装了偌吗斯斯棱镜,即DTC棱镜,此棱
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