中国人兽共患病学报

• 花匠小妙招
• 2024-12-25 16:36

2019年, 第35卷, 第9期　
刊出日期：2019-09-20

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目的 利用枯草杆菌芽孢展示外源蛋白的呈递技术,研究表面展示鼠疫菌保守抗原F1蛋白的重组芽孢,分析评价重组芽孢的免疫原性。方法 将枯草杆菌CotB基因构建到pDG1664质粒,再将鼠疫菌保守序列F1蛋白编码基因连接到CotB基因的下游,构建成重组质粒。然后将外源基因CotB-F1同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中。经PCR、Western Blot方法鉴定重组芽孢中鼠疫F1蛋白的表达。用上述重组芽孢以无佐剂口服方式免疫小鼠。采用ELISA方法检测重组芽孢免疫小鼠的免疫效果。结果 本研究制备出表面表达CotB-F1融合蛋白的重组枯草杆菌芽孢。用重组芽孢和野生型芽孢口服免疫BALB/c小鼠。实验结果表明,重组芽孢免疫组产生了针对鼠疫F1抗原的特异性抗体。重组芽孢免疫小鼠能产生有效的免疫应答。结论 本研究制备出表面展示鼠疫F1蛋白的枯草杆菌芽孢,建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法,为发展口服鼠疫疫苗奠定了基础。

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朱志翠, 邓思波, 张迎春, 吴坤, 马晓琳, 吴建伟, 王涛

目的 探讨家蝇抗菌肽MAF-1A体外抗甲型流感病毒(IAV)活性及其潜在机制。方法 通过观察CPE、MTT法及qRT-PCR评价MAF-1A体外抗IAV活性,采用MTT法测定MAF-1A对MDCK细胞的毒性;利用透射电镜(TEM)技术、血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验进一步分析MAF-1A抗IAV的作用机制。结果 MAF-1A对IAV 的半数有效浓度(EC50)为(89.8±2.97)μg/mL,而对 MDCK 细胞的毒性较小;MAF-1A可直接破坏IAV形态结构的完整性;浓度为1.56 μg/mL的MAF-1A即可抑制IAV引起的红细胞凝集;对神经氨酸酶具有抑制作用,IC50为(134.7±10.31)μg/mL。结论 抗菌肽MAF-1A具有体外抗IAV活性,除能直接破坏IAV的结构外,还可能通过与血凝素 HA1 亚基结合、抑制神经氨酸酶的活性而阻止IAV的感染,提示MAF-1A具有多靶点抗IAV的作用。

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门万琪, 杨汉蕾, 张科, 杨林, 许士刚, 牟荣

目的 了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法 采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制剂干预组均以定量虫卵15万个/头灌胃感染,灌胃后将抑制剂干预组乳猪分别腹腔注射U0126、SB203580和SP600125 1 mg/kg,隔天1次,连续7次。感染后第15 d麻醉处死各组乳猪获取肝脏。采用cck-8法和流式细胞仪分别检测肝细胞生长抑制率和肝细胞凋亡率,并用RT-PCR技术检测肝细胞ERK1、p38和JNK1基因mRNA的相对表达量。结果 感染组和U0126、SB203580、SP600125干预组肝细胞生长抑制率分别为(23.1±1.26)%、(12.59±1.2)%、(16.48±0.7)%、(18.3±0.75)%,U0126组与感染组相比(t=9.223,P<0.05)、SB203580组与感染组相比为(t=11.532,P<0.05)、SP600125组与感染组相比(t=6.775,P<0.05),各干预组均较感染组的生长抑制率明显降低。与感染组相比,U0126干预组的肝细胞凋亡率与感染组相比增高 (t=-5.934,P<0.001),SB203580干预组与感染组相比则降低 (t=3.821,P<0.01),SP600125干预组与感染组相比(t=-1.545,P＞0.05)无显著性差异。与感染组相比,U0126干预组(t=3.462,P<0.05)ERK1 mRNA表达量下调;SB203580干预组(t=3.267,P<0.05) p38 mRNA表达量下调;SP600125干预组(t=3.363,P<0.001) JNK1 mRNA的表达量下调。结论 亚洲带绦虫感染乳猪后,MAPK特异性抑制剂可以通过影响乳猪肝细胞MAPK相关基因的mRNA水平减轻肝细胞的生长抑制和凋亡。

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江朝源, 李飞, 曾喻兵, 彭珂楠, 张儒博, 杜佩珊, 冯宇, 殷鑫欢, 朱玲, 徐志文

目的 对检测到的疑似盖塔病毒进行分离鉴定和全基因序列遗传进化分析。方法 从四川某猪场1例混合感染猪繁殖与呼吸综合征的仔猪血液中,进行RT-RCR检测,检测到GETV阳性。对样品进行无菌处理后,接种至BHK21细胞,连续传代培养,通过细胞病变、蚀斑纯化、RT-RCR扩增和全基因序列测定鉴定细胞培养物。结果 我们成功分离到四川首株猪盖塔病毒,并将其命名为SC201807;对该病毒全基因扩增测序并进行序列分析,发现SC201807与GenBank中上传的35株GETV序列相似性为99.0%~96.1%,E2序列高度保守仅在E310(天冬氨酸→谷氨酸)发生突变。全基因组核苷酸以及E2氨基酸序列遗传进化分析显示SC201807株与中国猪源HNJZ-S2及日本蚊源15-I-752、15-I-1105、14-I-605-C2、14-I-605-C1、12IH26亲缘关系最近,处于同一进化分支。结论 SC201807株扩充了猪源GETV的感染谱,对其致病性、感染和传播机制、环境微生物学及公共卫生等相关研究提供素材。

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李佳康, 黄雪琳, 曾杭, 杨蕾, 巫梦雨, 雪妍, 申玉玺, 黄勇, 邹立扣, 韩新锋

目的 了解并分析肉鸭屠宰环节中弯曲菌分离株的9种毒力基因分布及分子分型特征。方法 利用特异性引物对弯曲菌9种与致病力相关的毒力基因进行PCR检测;参照美国PulseNet 脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,对68株鸭源弯曲菌分离株进行PFGE分型。结果 毒力基因PCR检测结果显示空肠弯曲菌中cadF、iamA和cheY毒力基因携带率均为100%,flaA(97.1%)、cdtB(94.3%)、cdtC(94.3%)和ciaB(80%)毒力基因的携带率也较高,其余毒力基因cdtA(25.7%),virB11(2.9%)较低;结肠弯曲菌中除cadF(100%)毒力基因外,高于50%携带率的毒力基因有cheY(84.8%)、cdtB(72.7%)、iamA(66.7%)和cdtA(54.5%),另外4个毒力基因flaA(48.5%)、virB11(18.2%)、cdtC(36.4%)和ciaB(18.2%)携带率均较低。利用PFGE方法对弯曲菌分离株进行分子分型,结果显示35株空肠弯曲菌和33株结肠弯曲菌可分为15个和11个谱型,表现为较低的遗传多样性。结论 弯曲菌毒力基因分布广泛,且空肠弯曲菌携带率较高;PFGE基因谱型相似性表明该肉鸭屠宰场存在交叉感染和弯曲菌沿屠宰链传播的现象。

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闻子钰, 顾一心, 梁昊, 王佳奇, 鞠长燕, 马艳萍, 张茂俊, 段永翔

目的 建立一种快速定量检测食品中“活的”空肠弯曲菌的技术方案。方法 通过对103 CFU/m~106 CFU/mL的空肠弯曲菌进行叠氮溴化乙锭(EMA)的前处理研究,建立区分死菌与活菌的EMA前处理技术,与荧光定量PCR检测弯曲菌的方法相结合,建立EMA-qPCR组合检测技术,并进行模拟食品标本的验证。结果 空肠弯曲菌在103 CFU/mL~106 CFU/mL内,EMA的最优使用浓度为5 μg/mL,5 μg/mL的EMA-qPCR可区分出死/活空肠弯曲菌混合物中的死菌和活菌,并成功应用于模拟食品标本中“活的”空肠弯曲菌的检测。结论 EMA-qPCR可作为快速定量检测样本中“活的”空肠弯曲菌的方法。

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袁海涛, 崔建楠, 彩花, 冯丽平, 王红, 郭长山, 吴金泉, 刘伟双, 曲振红, 蔡洪涛

目的 了解内蒙古兴安盟布鲁氏菌流行株的主要种型,分析布鲁氏菌流行株的体外药物敏感性,指导临床治疗。方法 选择内蒙古兴安盟布病发病率较高的旗县和人口密集的旗县,采集临床诊断的布病患者200份血液样本,用全自动血液培养仪培养分离出28株布鲁氏菌,用全自动生化鉴定系统、BCSP31-PCR及传统经典的方法进行种型鉴定,最后用肉汤微量稀释法对其中的25株布鲁氏菌进行13种抗生素的体外药敏试验。结果 28株布鲁氏菌中羊种3型18株(64.29%)和羊种1型10株(35.71%),进行药敏试验的25株菌中,100%菌株对多西环素、庆大霉素、链霉素、四环素均敏感,16%的菌株对利福平、头孢曲松的药物敏感性可能降低,20%的菌株对复方新诺明耐药,100%的菌株对阿奇霉素耐药。结论 内蒙古兴安盟布鲁氏菌流行株主要是羊种3型和羊种1型,目前对一线方案药物较为敏感,在布病的急性期治疗上,宜规范化治疗,首选一线方案药物:多西环素、庆大霉素、链霉素、利福平。

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倪珊珊, 薛冠华, 李少丽, 闫超, 孙红妹

肺炎支原体通过黏附细胞器实现在呼吸道的定植,导致社区获得性肺炎等疾病。黏附细胞器由表面结构和内部结构两部分组成。表面结构负责肺炎支原体与宿主细胞表面的结合,包括P1黏附素、P30黏附素、P40、P90。内部结构分为半透明区和核心结构,作用包括细胞器的形成、维持以及力的产生和传递。半透明区负责将碗状/轮状复合体产生的力传递至成对板。核心结构包括终端按钮、成对板和碗状/轮状复合体。终端按钮由HMW3和P65构成,确定肺炎支原体滑动方向。成对板由薄板、厚板组成,作为附着器形成的支架。薄板具备规律的六角形晶格排列,由HMW1和CpsG组成。厚板由HMW2构成。碗状/轮状复合体由P24、P41、P200、TopJ、Lon、MPN387组成,连接黏附细胞器和肺炎支原体的其余部分,负责力的产生或传递。本文就肺炎支原体黏附细胞器及其15个成分蛋白的结构与功能做一简要综述。

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王斯倩, 符波, 赵宇龙, 廖梦佳, 李长清, 曹龙古, 曾铁兵

梅毒是一种多阶段发展的性传播疾病,临床表现复杂,实验室诊断主要依赖血清学方法。近十余年来,基于重组梅毒螺旋体(Tp)诊断抗原的血清学方法大力促进了梅毒特异性实验室诊断的快速发展。但目前所采用的重组抗原对诊断早/晚期梅毒,或区分不同感染阶段,或疗效判断仍然存在不足。本文综述重组Tp脂蛋白及新型候选抗原(包括膜表面暴露蛋白、黏附蛋白、周质间隙蛋白和鞭毛蛋白等)在梅毒诊断中的应用价值及局限性,并概括了最佳候选Tp诊断抗原组的条件,为进一步研究其他Tp诊断抗原提供参考。

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宋健, 刘丹丹, 跃华, 姜晓峰, 韩松, 张宇耕, 海岩

目的 了解2008-2017年内蒙古自治区炭疽的流行特征及发病规律,为制定切实可行的防治政策、措施提供参考依据。方法 使用描述性流行病学方法对中国疾病预防控制信息系统中2008-2017年炭疽报告的病例数据进行统计分析。结果 2008-2017年全区共报告炭疽病例206例,各年均有炭疽病例报告,发病率在0.02/10万～0.166/10万间波动,炭疽发病存在明显季节性,每年5-10月份发病数最多;其中男性170例,女性36例,男女发病比例为4.72∶1;炭疽病例最小发病年龄为14岁,最大发病年龄为76岁,报告病例数主要集中在30～50岁年龄组;全区报告病例分布在9个盟市的35个旗县,其中兴安盟报告病例数最多,其次是赤峰市、通辽市、呼伦贝尔市;主要疫区县依次为扎赉特旗、突泉县、巴林左旗、克什克腾旗。结论 加强对农牧区从事放牧、屠宰工作的青壮年男性的宣传教育,让群众做到不宰杀、不剥食、不贩卖病死牲畜。建立与畜牧部门的联防联控合作机制。建议对从事养殖、屠宰、皮毛加工等人员开展预防性接种。加强对基层医务人员炭疽的诊断能力的培训,提高实验室检测人员的炭疽病原学和血清学诊断技术。

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林代华, 韩腾伟, 王加熊, 刘菁, 肖方震, 刘维俊, 邓艳琴

目的 分析福建省人间布鲁氏菌病流行趋势,为制定有效科学的防控措施提供依据。方法 根据《全国布鲁氏菌病监测工作方案》和《福建省布鲁氏菌病防控项目实施方案》的要求,在福建省布病重点地区开展监测,对各年度上报数据进行汇总与分析。结果 2012-2017年间,在福建省8个设区市22个监测点共检测布病高危人群血清标本6 713份,检出阳性64份(SAT法),阳性率为0.95%;各类布病职业人群中,以肉类加工和饲养放牧人员阳性率最高,但差异无统计学意义(χ2=9.972, P>0.05);年龄分布看,30～50年龄组检出最多,但差异无统计学意义(χ2=11.033, P>0.05);性别分布看,男女性别比为1.66∶1,差异无统计学意义(χ2=0.642, P>0.05)。在哨点医院开展主动搜索,共检测人群血清1 815份,发现病例62例,阳性率为3.42%。结论 2012-2017年间,福建省闽南沿海地区疫情较重,并有向内陆闽北山区扩散趋势。

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郝瑞娥, 姚素霞, 张秋香, 杨红霞, 王洋, 韩吉婷

目的 了解山西省食源性疾病主动监测中沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠埃希菌(包括粘附性大肠埃希菌EAEC、致病性大肠埃希菌EPEC、侵袭性大肠埃希菌EIEC、产毒性大肠埃希菌ETEC)的病原谱、耐药情况及分子分型。方法 对2015-2016年山西省食源性疾病主动监测病例中分离到的沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠埃希菌进行血清学分型、药物敏感性试验以及PFGE分型。结果 2015-2016年共采集腹泻病人标本2 505例,检出目标菌数157例,检出率为6.27%,其中致泻性大肠埃希菌82例(3.27%)、沙门菌51例(2.04%)、志贺菌14例(0.56%)、副溶血性弧菌10例(0.40%)。致泻性大肠埃希菌中,分离率最高的是EPEC。在对15种常见抗生素药敏实验中,致泻性大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感(100%),对头孢他啶和甲氧苄啶磺胺甲恶唑敏感率大于90%。沙门菌以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌2个血清型为主,沙门菌对亚胺培南全部敏感(100%),对头孢西丁和头孢他啶敏感率大于90%。副溶血性弧菌毒力基因全部为tdh阳性。结论 山西省2015-2016年食源性疾病主动监测中,检出率最高的是致泻性大肠埃希菌,其次为沙门菌,志贺菌,副溶血性弧菌。

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汤丽, 邵宗体, 段兴德, 江佳富, 贾娜, 张云, 何志海, 李玉琼, 刘正祥, 浦恩念, 陈星, 刘洪波, 蒋宝贵, 高子厚, 杜春红

目的 了解云南省小型兽类感染无形体的种类及其分布,以掌握该地区小型兽类携带无形体对人、畜健康的危害,为无形体病的防控提供科学依据。方法 在云南省22个县(市)的130个采样点,捕获分属4目9科26属52种的小型兽类2 251只,取其脾脏组织提取DNA后,运用无形体通用引物,巢式PCR检测无形体16S rRNA 660 bp部分片段。阳性产物测序后,通过序列比对及系统进化分析确定感染无形体种类,结合样本信息分析流行病学意义。结果 共检出阳性样本27份, 产物序列经比对为23份A.phagocytophilum,4份未分类无形体。总阳性率1.20%;阳性小兽分属3目6科7属12种,分别是:针尾鼹50.00%(1/2)、纹背鼩鼱12.50%(2/16)、珀氏长吻松鼠8.33%(1/12)、藏鼠兔5.66%(3/53)、白尾松田鼠5.41%(2/37)、西南绒鼠4.00%(2/50)、社鼠3.74%(4/107)、大足鼠3.57%(1/28)、斯氏家鼠2.20%(2/91)、大耳姬鼠1.85%(2/108)、中华姬鼠1.30%(4/308)和黄胸鼠0.69%(3/433),分布于5个县(市)。统计学分析表明,无形体的感染率雄性高于雌性,海拔>2 500 m捕获小兽感染率最高。不同生境和年龄的小兽感染率无差异。结论 云南省部分县(市)的多种小型兽类携带A.phagocytophilum,给当地人群的健康和畜牧业的发展造成一定的威胁,人群和媒介蜱、其它宿主的感染和分布等情况值得进一步关注。

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赵冰, 黄红, 王闻卿, 李彩云, 崔琪奇, 朱林英

目的 应用多位点序列分型技术从分子水平分析不同来源的空肠弯曲菌的流行状况与特征,研究菌株间的亲缘关系和进化特征。方法 本研究以2014-2015年分离自上海市浦东新区11个腹泻监测点的腹泻粪便、本辖区5个禽流感监测点的禽类养殖环境样本以及生禽肉食品中分离到的209株空肠弯曲菌为研究对象,选取7个管家基因进行测序分析,获得序列型(STs型),应用Bionumerics软件绘制进行溯源和遗传进化分析。结果 209株分离株共分成了110种序列型,归属25种同源复合体,在144株人源株中,归属ST-353同源复合体菌株最多,占比16.7%,禽类养殖环境分离到的56株菌株归属ST-21同源复合体菌株最多,占比30.4%。遗传进化分析显示,209株菌株分为主要的5个彼此独立的聚类簇。结论 上海市浦东新区的腹泻病人分离株与禽类株有着较为密切的关系,禽类是人感染空肠弯曲菌的重要传染源。

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游洋伟

目的 探讨隐球菌性脑膜炎患儿的临床特征,以提高该病的诊治水平及预后。方法 回顾性分析成都市双流区第一人民医院收治的22例诊断为隐球菌性脑膜炎儿童的临床资料。结果 81.8%(18例)隐球菌性脑膜炎患者有头痛症状,22例(100.0%)患儿有发热症状;脑脊液糖(2.70±0.93 mmol/L)降低尤为显著;所有患者均有不同程度的颅内压增高,病原学脑脊液墨汁染色阳性患者15例(占68.2%),隐球菌培养阳性患者22例(占100.00%),两性霉素B(AmpB)联合5-氟胞嘧啶(5-FC)治愈好转率100%(22/22),两性霉素B(AmpB)+5-氟胞嘧啶(5-FC)+氟康唑治疗的2例患者后期均调整为两性霉素B(AmpB)联合5-氟胞嘧啶(5-FC)。结论 隐球菌性脑膜炎早期误诊率较高,脑脊液墨汁染色、脑脊液培养试验有助于确诊;两性霉素B联合5-氟胞嘧啶仍是目前经典的抗真菌治疗方案,早期控制真菌及颅高压是改善预后关键。

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次仁央金, 次白, 占堆, 杨晓风, 刘治娟

目的 研究患者血液中分离出的病原菌生物学性状及布鲁氏菌病在西藏地区的病原学诊断。方法 按布鲁氏菌标准鉴定方法进行细菌学实验,包括形态学、培养特性、生化特征及血清学试验,并对患者的流行病学、临床资料、实验室资料进行分析。结果 患者血液中分离的病原微生物的形态学、培养特性、生化特征及血清学诊断结果均符合布鲁氏菌。结论 西藏地区首次从患者血液中分离到布鲁氏菌,说明临床机构已有病原诊断能力,同时要加强实验室生物安全。

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陈雪琴, 罗乐, 毛云霞, 王翠玲, 冯志锋, 吴衍恒, 师舞阳, 林金思

目的 调查分析禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后2017-2019年流行季广东省高致病性H7N9病例流行病学特征,探索可能的感染来源,为制定防控措施提供依据。方法 对H7N9确诊病例基本情况、密切接触者和感染来源进行流行病学调查,采集相关标本进行实验室检测,并应用描述性流行病学方法进行分析。结果 2017-2019年流行季广东省报告1例人感染高致病性H7N9禽流感病例,患者发病前有明确的活禽暴露史,病家自养活禽和禽舍环境标本均检出H7亚型禽流感病毒核酸阳性标本,未发现人与人之间传播病例。报告的唯一确诊病例通过自养活禽暴露的可能性大。结论 禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后2017-2019年流行季广东省高致病性H7N9病例较往年同期大幅下降。饲养者个人防护不足是导致该病例发病的主要原因。继续做好禽只的免疫接种,持续推进活禽的规范化养殖,是减少禽间疫情和人类感染的重要措施。

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贺仁忠, 张建勇, 刘梅, 宋永祥, 陈玲

目的 观察孤立性肺结核球患者胸腔镜术后化疗不同疗程的治疗效果,以选择合理疗程。方法 收集2007年5月至2017年5月经电视胸腔镜行肺楔形切除术后,组织病理学确诊的孤立性肺结核球,在遵义医科大学附属医院结核病门诊继续接受抗结核化疗的患者,疗程2～12个月,连续观察24个月。分析不同化疗疗程患者的治愈率、复发率、药物不良反应发生率及服药依从率。结果 共收集到术后接受抗结核化疗的孤立性肺结核球患者125例。不同化疗疗程的125例患者的治愈率均为100%,复发率均为0%。药物不良反应发生率为44.80%(25.00%～60.00%),2个月、3个月及4个月疗程患者的不良反应发生率分别为60.00%、25.00%及25.00%,3个月及4个月疗程患者的发生率最低(25.00%),发生率随疗程的延长呈上升趋势。不同疗程患者的服药依从率为62.40%(38.46%～83.33%),2个月、3个月及4个月疗程患者的服药依从率分别为80.00%、83.33%及62.50%,依从率随疗程的延长呈下降趋势,3个月疗程的依从率最高(83.33%)。三个疗程间的发生率及依从率差异均无统计学意义(P>0.05)。常见的主要药物不良反应为胃肠道反应(26.40%)、肝损伤(20.80%)及泌尿系统异常(15.63%)。61～70岁患者的发生率(59.46%)较18～40岁患者(33.33%)的高,差异有统计学意义(P<0.05)。男性患者的发生率为50.00%,较女性患者的37.25%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 孤立性肺结核球患者胸腔镜术后3个月疗程化疗效果与其他疗程的相当,且药物不良反应发生率低,服药依从性高,3个月可作为最佳疗程;常见的主要不良反应为胃肠道反应、肝损伤及泌尿系统异常,应高度重视老年患者不良反应的发生。

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王惠榕, 黄丰

中国人兽共患病学报. 2019, 35(9): 887-889.

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