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松材线虫、松墨天牛和松树间的共生关系研究研究生课程论文

花匠小妙招
2024-12-27 14:54

得分:_______ 南京林业大学研究生课程论文 2015 ~ 20016 学年第二学期二○一六年六月课程号: 课程名称: 论文题目: 学科专业: 森林保护学号: 3150462 姓名: 王立超任课教师: 黄麟内容本文研究松材线虫、松墨天牛和真菌在松树中的共生关系实验材料和方法: ( 1 )真菌小长喙霉在 PDA 平板上、 25℃条件下培养一周,使用前在 5℃条件下保存。灰葡萄孢在 10 mL 的大麦籽粒上培养。(2 )线虫强毒虫株松材线虫 T-4 在25℃条件下在灰葡萄孢上培养,使用前在 5℃条件下保存。松材线虫悬浊液包括成虫和幼虫, 悬浊液浓度为 50000 条/mL 。(3 )昆虫松墨天牛在恒定条件下培养( 25℃, 16h 光照、 8h 黑暗) ,让其繁殖 10 代,第七代到第十代成虫用来在赤松小苗上产卵,收集天牛所产的卵并将其放置在湿纸巾上,在一天之内孵化的幼虫用于实验。(4 )松枝 2014 年六月采伐两颗 12 年生(胸径分别为和 )的赤松和两颗 12 年生的黑松(胸径分别为和 ) ,分别在实验 1 和实验 3 中使用。 2015 年二月采伐 3颗 12 年生的赤松用于实验 2, 胸径分别为、和 , 2014 年十月采伐一颗 12 年生的赤松用于实验 4, 其胸径为。树枝截为 15cm 一段, 在树枝的两端用石蜡密封起来, 每个实验组树枝的树木特定的每组树枝之间不存在显著差异(5) 接种使用凿子和镊子在离树端处从木质部分离树皮(面积 × ) ,用刻刀在漏出的木质部中间挖一个直径 6-7mm 圆形刻槽用以放置松墨天牛幼虫, 一份带有灰葡萄孢或则没有灰葡萄孢的面积为 5× 5mm 的 PDA 培养基放置在远离树端、接近圆形刻槽的位置。用到划长、最大宽度为的三角形裂口, 在漏出的韧皮部接种 20uL 的线虫悬浊液( 1000 条线虫)或者是无菌纯净水。两个树皮伤口最小距离平均为 ,两个伤口接种后覆盖原来的树皮, 用封口膜包起来, 即使不接种松墨天牛幼虫, 也挖一个小刻槽, 实验 4 中松树枝条不用接种松材线虫悬液或水, 不会在树皮上形成倾斜伤口。实验一、为了确定松墨天牛幼虫和小长喙霉对松材线虫种群生长的影响, 一组赤松枝条接种松材线虫、松墨天牛和小喙长霉。第二组枝条接种松材线虫、松墨天牛和 PDA ,第三组枝条接种松材线虫和小喙长霉, 第四组枝条接种松材线虫和 PDA 。他们被垂直放置使线虫远离容器底部。 25℃, 16h 光照、 8h 黑暗,相对湿度 100% 条件下常温培养,用纯净水保持湿度。接种 18 天后, 从松枝上剥离树皮, 从枝条上取幼虫和幼虫粪便, 记录韧皮部和木质部上蓝变面积确定小喙长霉的繁殖情况, 从纵向韧皮部上剥离四份之一到二分之一的树皮, 将树皮外层剥离, 收集里面树皮以获得韧皮部样品, 再将里层树皮的韧皮部剪切为 1-2mm 大小的树皮块,使用一把 15mm 宽的刀片,从接种松墨天牛幼苗和松材线虫的地方包括髓取木质部样品,记录木质部样品真菌繁殖情况,粪便、韧皮部和木质部分别在 25℃下使用贝尔曼漏斗法分离 48-72h ,计算分离线虫浓度, 材料在 60℃下烘 5-12d , 称重, 线虫密度表示每克材料干重中松材线虫的数量。分别使用电子天平和游标卡尺测量幼虫体重和头壳宽度, 分别精确到和 ,根据头壳宽度确定幼虫龄期: – , – , – 和 – mm 分别为一龄、二龄、三龄和四龄虫。实验二、确定赤松中韧皮部、木质部和天牛幼虫蛀屑线虫密度的不同,在 2015 年2月 26 日将刚孵化的幼虫、 1000 条松材线虫和一份接有小长喙霉的 PDA 接种在 10 条直径相似的上述赤松枝条上, 2015 年3月26 日分别将韧皮部、木质部和幼虫蛀屑用以分离线虫,确定线虫密度, 实验三、确定松材线虫种群和小喙长霉对松墨天牛生长发育的影响, 四组黑松枝条接种松材线虫、松墨天牛和小喙长霉三个物种组成的四种组合。方法和实验一方法相同,培养条件相同。每天观察松枝,记录松墨天牛羽化情况,分性别记录成虫数量, 体重和鞘翅长分别精确到和。没有松墨天牛出现的松枝在接种 153-164d 后分离,称量幼虫的鲜重和记录头宽、颜色、肠内排泄物的有无以及幼虫所在的位置。实验四、为确定松墨天牛幼虫对小喙长霉繁殖的影响,6 个赤松枝条接种小喙长霉和松墨天牛幼虫, 接种 22d 后, 剥离松枝树皮, 幼虫蛀屑和幼虫

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