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一种金毛狗脊孢子的繁育方法与流程

花匠小妙招
2024-12-28 20:02

本发明涉及植物栽培技术领域，具体涉及一种金毛狗脊孢子的繁育方法。

背景技术：

金毛狗脊(cibotiumbarometz(l.)j.sm.)为蕨类蚌壳蕨科植物，《中药大辞典》中记载：金毛狗脊生于山脚沟边，或林下阴处酸性土壤。分布我国西南、南部、东南及河南、湖北等地，主产四川、福建、浙江。此外，广西、广东、贵州、江西、湖北等地亦产。

金毛狗脊干燥去毛的根茎为中药狗脊，始载于《神农本草经》，历版《中国药典》均有收载，具有补肝肾、强筋骨、舒经络、除湿痛及利尿的功能,用于治疗腰腿酸痛、手足麻木、半身不遂、白带遗精、血崩等症；经动物实验证实，狗脊的毛茸对疤痕组织、肝脏、脾脏的损害性及拔牙等外伤性出血有较好的止血作用，其效果较明胶海绵等迅速，同时，狗脊毛茸似能被组织逐渐吸收消化，还具有升高血小板的作用；现代研究发现：金毛狗脊提取物具有抑制多种癌细胞，抗炎、抑菌等功效。

由于国内制药企业多种含狗脊的的中成药，加大了对狗脊的需求量，导致民间疯狂采挖，野生资源日见稀少，加之人工种植狗脊的种苗繁育复杂，使用根状茎切段繁殖育苗成本高，周期长，不适宜推广。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种金毛狗脊孢子的繁育方法，能够实现金毛狗脊的快速繁育，实现规模化种植。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：一种金毛狗脊孢子的繁育方法，包括如下步骤：

(1)孢子的采集：采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，置清洁袋中自然阴干，待孢子囊自然脱落后去除杂质，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液作用4-6分钟后，再用无菌水冲洗3-5次，晾干后收集于无菌袋中；

(2)培养前处理：将步骤(1)获得的含有孢子囊的无菌袋置于2-6℃保藏340-380天，用70％-75％的酒精对低温保藏的孢子囊进行消毒20-40秒；对孢子萌发培养基和常规培养基质进行高压湿热灭菌；

(3)萌发和培养：将步骤(2)消毒好的孢子囊接种至装有孢子萌发培养基的组培罐中，于光照培养箱中进行萌发培养，温度22-28℃、每天2000-2500lx光照10-12小时；当原叶体长出后，将原叶体接种至含有常规培养基质的培养罐中，于光照培养箱中进行配子体转化培养，温度22-28℃、每天2000-2500lx光照10-12小时；

(4)炼苗和移栽：当配子体长出第3片叶后，转移培养罐至室内，打开培养罐盖进行炼苗培养，每天喷雾1-2次保持湿度，炼苗7-10天后增加营养土进行田间移栽适应，每天喷雾1-2次保持湿度，移栽适应7-10天后进行田间移栽；

进一步的技术方案，所述孢子萌发培养基包括1/4改良ms培养基、蔗糖1-3％、琼脂0.5-0.8％；

进一步的技术方案，所述常规培养基质包括蛭石、碳纳米管和培养液，所述蛭石为经柠檬酸浸泡处理的蛭石，所述蛭石和碳纳米管的质量份数比为4:1,所述培养液包括1/2改良ms培养基、蔗糖1-3％；

进一步的技术方案，所述孢子萌发培养基还包括无菌6-ba0.02-0.1mg/l和无菌iaa0.02-0.1mg/l，所述培养液还包括无菌ga30.02-0.1mg/l和无菌6-ba0.02-0.1mg/l；

更进一步的技术方案，所述改良ms培养基中改良的成分为：kno3调整为600-700mg/l，(nh)4no3调整为500-600mg/l；

进一步的技术方案，所述萌发培养为60-90天，所述配子转化培养为45-90天。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的金毛狗脊孢子培养方法，操作过程简单，通过两步法培育金毛狗脊种苗，减少了多次接种对金毛狗脊苗的伤害，以蛭石等为基质，减少了金毛狗脊苗移栽前的炼苗换盆，实现从配子体转化到移栽的基质合理利用，大量节省了成本；本方法不伤害野生植物的母体，不影响植株的生长，且可获得大量生理年龄一致、生长整齐的种苗，适合规模化育苗和栽培；且本方法以有性生殖为基础，获得的种苗无病毒或其他疾病感染，植株生命力强，生长健壮，成活率高；同时避免了大量野生金毛狗脊资源的采挖，保护了国家珍惜蕨类资源，利于野生金毛狗脊的保护。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行详细描述，所述实施例是本发明的优选实施例，仅用于说明本发明而限制本发明的范围，对本领域技术人员来说，基于本发明的技术方案，在没有创造性的前提下获得的其他技术方案都落入本发明的保护范围。实施例中所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

一种金毛狗脊孢子的繁育方法，包括如下步骤：

(1)孢子的采集：采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，置清洁袋中自然阴干，待孢子囊自然脱落后去除杂质，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液作用4分钟后，再用无菌水冲洗3次，晾干后收集于无菌袋中；

(2)培养前处理：将步骤(1)获得的含有孢子囊的无菌袋置于2℃保藏340天，用75％的酒精对低温保藏的孢子囊进行消毒40秒；对孢子萌发培养基和常规培养基质进行高压湿热灭菌；

(3)萌发和培养：将步骤(2)消毒好的孢子囊接种至装有孢子萌发培养基的组培罐中，于光照培养箱中进行萌发培养，温度22℃、每天2000-2500lx光照12小时；当原叶体长出后，将原叶体接种至含有常规培养基质的培养罐中，于光照培养箱中进行配子体转化培养，温度22℃、每天2000-2500lx光照12小时；

(4)炼苗和移栽：当配子体长出第3片叶后，转移培养罐至室内，打开培养罐盖进行炼苗培养，每天喷雾1-2次保持湿度，炼苗7-10天后增加营养土进行田间移栽适应，每天喷雾1-2次保持湿度，移栽适应7-10天后进行田间移栽。

实施例2

一种金毛狗脊孢子的繁育方法，包括如下步骤：

(1)孢子的采集：采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，置清洁袋中自然阴干，待孢子囊自然脱落后去除杂质，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液作用6分钟后，再用无菌水冲洗5次，晾干后收集于无菌袋中；

(2)培养前处理：将步骤(1)获得的含有孢子囊的无菌袋置于6℃保藏380天，用70％的酒精对低温保藏的孢子囊进行消毒40秒；对孢子萌发培养基和常规培养基质进行高压湿热灭菌；

(3)萌发和培养：将步骤(2)消毒好的孢子囊接种至装有孢子萌发培养基的组培罐中，于光照培养箱中进行萌发培养，温度28℃、每天2000-2500lx光照12小时；当原叶体长出后，将原叶体接种至含有常规培养基质的培养罐中，于光照培养箱中进行配子体转化培养，温度28℃、每天2000-2500lx光照12小时；

实施例3

一种金毛狗脊孢子的繁育方法，包括如下步骤：

(1)孢子的采集：采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，置清洁袋中自然阴干，待孢子囊自然脱落后去除杂质，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液作用5分钟后，再用无菌水冲洗5次，晾干后收集于无菌袋中；

(2)培养前处理：将步骤(1)获得的含有孢子囊的无菌袋置于4℃保藏360天，用75％的酒精对低温保藏的孢子囊进行消毒30秒；对孢子萌发培养基和常规培养基质进行高压湿热灭菌；

(3)萌发和培养：将步骤(2)消毒好的孢子囊接种至装有孢子萌发培养基的组培罐中，于光照培养箱中进行萌发培养，温度25℃、每天2000-2500lx光照11小时；当原叶体长出后，将原叶体接种至含有常规培养基质的培养罐中，于光照培养箱中进行配子体转化培养，温度25℃、每天2000-2500lx光照11小时；

(4)炼苗和移栽：当配子体长出第3片叶后，转移培养罐至室内，打开培养罐盖进行炼苗培养，每天喷雾2次保持湿度，炼苗7-10天后增加营养土进行田间移栽适应，每天喷雾2次保持湿度，移栽适应7-10天后进行田间移栽。

所述孢子萌发培养基包括1/4改良ms培养基、蔗糖3％、琼脂0.7％；

所述常规培养基质包括蛭石、碳纳米管和培养液，所述蛭石为经柠檬酸浸泡处理的蛭石，所述蛭石和碳纳米管的质量份数比为4:1,所述培养液包括1/2改良ms培养基、蔗糖3％；

所述孢子萌发培养基还包括无菌6-ba0.04mg/l和无菌iaa0.02mg/l，所述培养液还包括无菌ga30.04mg/l和无菌6-ba0.02mg/l；

所述改良ms培养基中改良的成分为：kno3调整为650mg/l，(nh)4no3调整为550mg/l；

所述萌发培养为60-90天，所述配子转化培养为45-90天。