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一种含白松露菌提取物的脂质体及其应用的制作方法

花匠小妙招
2025-01-14 18:51

1.本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种含白松露菌提取物的脂质体及其应用。

背景技术：

2.松露是一种生长在地表之下的真菌，依赖其他生物来完成自己的生命周期，松露主要产于意大利、法国的佩里戈产区、中国云南、四川等地。因意大利阿尔巴产区的白松露能产生浓烈、诱人的香气，被认为是品质最优良的松露。研究证实，白松露菌提取物能够显著提升皮肤i型胶原蛋白和抑制黑色素的含量。随着白松露菌提取物在皮肤健康方面研究的深入，这种珍稀化妆品原料引起了化妆品企业的极大兴趣。据不完全统计，截止2021年12月31日，国内含白松露菌提取物的化妆品累积备案数量从2019年的1604件到2021年扩大到4011件，年均增长率在58.13％。然而，白松露菌提取物为水溶性成分，皮肤角质层的疏水性导致亲水性的物质渗透相对较差，一方面导致白松露的作用效果不明显，另一方面导致皮肤表面护肤品营养成分过剩，造成“皮肤氧化”。

技术实现要素：

3.本发明要解决的技术问题在于改善白松露菌提取物的缓释性能，延长白松露菌提取物的作用时间，从而提供一种含有白松露菌提取物的脂质体，使用表面活性剂修饰脂质体，同时，利用脂质体稳定剂的疏水基团能够插入脂质体膜来桥连脂质体，形成脂质体-聚合物互连网络，有效提高了白松露菌脂质体的稳定性，改善了白松露菌提取物脂质体储存性不好和容易自发聚集的问题，进一步有助于白松露菌提取物的缓释和渗透。
4.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
5.第一方面，本发明提供一种含有白松露菌提取物的脂质体，所述脂质体包载白松露菌提取物。
6.所述脂质体的膜材包括磷脂和脂质体囊泡稳定剂。
7.所述磷脂包括氢化卵磷脂和卵磷脂中的任意一种或两种；所述脂质体囊泡稳定剂包括甲基硬脂酰基牛磺酸钠、硬脂酰谷氨酸钠和硬脂酰谷氨酸钾中的任意一种或多种。
8.所述脂质体还包括脂质体稳定剂，所述稳定剂包括羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚、鲸蜡基羟乙基纤维素、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物的任意一种或多种。
9.所述的脂质体，包括以下重量份数的组分：白松露菌提取物10-80份，磷脂0.05-12份，囊泡稳定剂0.0005-2份，脂质体稳定剂0.001-5份，甘油20-90份，防腐剂0.05-3份，或白松露菌提取物20-70份，磷脂0.1-10份，囊泡稳定剂0.001-1份，脂质体稳定剂0.001-3份，甘油20-70份，防腐剂0.1-2份。
10.所述的含白松露菌提取物的脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
11.s1：称取磷脂、甘油、囊泡稳定剂、脂质体稳定剂和聚丙烯酸酯交联聚合物-6混合，
加热至搅拌溶解，即得到a相；
12.s2：称取白松露菌提取物和防腐剂混合，加热至65-85℃搅拌溶解,即得到b相；
13.s3：均质a相，添加b相，进行均质，搅拌后出料，即得到含有白松露菌提取物的脂质体。
14.进一步的，所述的含白松露菌提取物的脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
15.s1：称取磷脂、甘油、囊泡稳定剂、脂质体稳定剂和聚丙烯酸酯交联聚合物-6混合，加热至65-85℃搅拌溶解0.5-2h，即得到a相；
16.s2：称取白松露菌提取物和防腐剂混合，加热至65-85℃搅拌溶解0.5-2h，即得到b相；
17.s3：均质a相，均质速度为3000rpm，添加b相，b相添加结束后，以5000rpm的速度继续均质4min。搅拌冷却至室温后出料，即得到含有白松露菌提取物的脂质体。
18.第二方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品包括如第一方面所述的含白松露菌提取物的脂质体。
19.优选地，所述含白松露菌提取物的脂质体的添加量占所述化妆品的0.1-30％。
20.优选地，所述化妆品包括但不限于水剂、乳剂、喷雾、面膜。
21.一种精华液，含白松露菌提取物的脂质体以5％的添加量添加到精华液中，还包括水、甘油聚醚-26、聚丙烯酰基二甲基牛磺酸铵、尿囊素、黄原胶、edta二钠、透明质酸钠、异壬酸异壬酯、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯、角鲨烷、精氨酸、水、丁二醇、1,2-己二醇、对羟基苯乙酮和1,2-戊二醇、甜菜碱、泛醇、肌肽、四氢甲基嘧啶羧酸、甘草酸二钾。
22.本发明的有益效果如下：
23.1、本发明制得的一种含白松露提取物的脂质体，能够改善白松露菌提取物的缓释性能，延长白松露菌提取物的作用时间，提高白松露菌提取物的生物利用度，从而提高了白松露菌提取物对皮肤老化的防治效果。
24.2、本发明制得的一种含白松露提取物的脂质体，采用甲基硬脂酰基牛磺酸钠等表面活性剂作为脂质体囊泡稳定剂，构建出带有负电荷的脂质体。相比于中性脂质体，带有电荷的脂质体能够有效防止脂质体的聚集和凝聚。相比于带正电荷的脂质体，带负电荷脂质体的快速渗透有助于增加白松露菌提取物通过皮肤的渗透。
25.3、本发明制得的一种含白松露提取物的脂质体，利用羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚等作为脂质体稳定剂，进一步增加了脂质体的稳定性，解决脂质体在实际应用中存在的稳定性差的缺陷。
26.脂质体是类似生物膜结构的由磷脂双分子层组成的微小囊泡，囊泡的内核是水相，能够包封亲水性成分，而双分子膜区域为油相，可包封亲脂性成分。脂质体能够通过水合机制、融合机制或者穿透机制，增强包裹活性成分进入角质层的能力，一定程度增强活性成分的作用效果。脂质体是目前几乎理想的活性成分载体系统，在生物学和技术上存在极大的优势，因此，选择脂质体作为白松露菌提取物的载体。同时，组织学研究表明，带负电荷的脂质体通过角质层和毛囊扩散到真皮和毛囊下部，比带正电荷的囊泡快得多。因此，将白松露菌提取物与脂质体相结合，并使用表面活性剂修饰脂质体，同时，采用羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚等脂质体稳定剂形成高分子链网络结构，将白松露菌提取物脂质体引入高分
子链网络结构中，构筑白松露菌提取物脂质体，改善了白松露菌提取物脂质体的稳定性。以期能够改善白松露菌提取物透皮性能，延长白松露菌提取物的作用时间，提高其生物利用度，从而提高白松露菌提取物对皮肤老化的防治效果。
附图说明
27.图1：对比例4-7在不同时间点的碘伏褪色状态图；
28.图2：精华液对hdfn细胞存活率的影响。
具体实施方式
29.为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
30.下列实施例中使用的试剂均可从商业渠道获得。
31.实施例1
32.称取1g氢化卵磷脂、0.25g甲基硬脂酰基牛磺酸钠、0.75g羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚、2g聚丙烯酸酯交联聚合物-6和94g甘油混合，加热至70℃搅拌溶解1h，得到a相；
33.称取100g白松露菌提取物和2g苯氧乙醇混合，加热至70℃搅拌溶解0.5h，得到b相；
34.均质a相，均质速度为3000rpm，添加b相，b相添加结束后，以5000rpm的速度继续均质4min。搅拌冷却至室温后出料，即得到含有白松露菌提取物的脂质体。
35.对比例1
36.一种含白松露菌提取物的脂质体，其与实施例1中的白松露菌脂质体区别在于，不包含羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚。
37.称取1g氢化卵磷脂、0.25g甲基硬脂酰基牛磺酸钠、2g聚丙烯酸酯交联聚合物-6和94.75g甘油混合，加热至70℃搅拌溶解1h，得到a相；
38.称取100g白松露菌提取物和2g苯氧乙醇混合，加热至70℃搅拌溶解0.5h，得到b相；
39.均质a相，均质速度为3000rpm，添加b相，b相添加结束后，以5000rpm的速度继续均质4min。搅拌冷却至室温后出料，即得到含有白松露菌提取物的脂质体。
40.对比例2
41.一种含白松露菌提取物的脂质体，其与实施例1中的白松露菌脂质体区别在于，不包含氢化卵磷脂。
42.称取0.25g甲基硬脂酰基牛磺酸钠、0.75g羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚、2g聚丙烯酸酯交联聚合物-6和95g甘油混合，加热至70℃搅拌溶解1h，得到a相；
43.称取100g白松露菌提取物和2g苯氧乙醇混合，加热至70℃搅拌溶解0.5h，得到b相；
44.均质a相，均质速度为3000rpm，添加b相，b相添加结束后，以5000rpm的速度继续均质4min。搅拌冷却至室温后出料，即得到含有白松露菌提取物的脂质体。
45.对比例3
46.一种含白松露菌提取物的脂质体，其与实施例1中的白松露菌脂质体区别在于，不包含甲基硬脂酰基牛磺酸钠。
47.称取1g氢化卵磷脂、0.75g羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚、2g聚丙烯酸酯交联聚合物-6和94.25g甘油混合，加热至70℃搅拌溶解1h，得到a相；
48.称取100g白松露菌提取物和2g苯氧乙醇混合，加热至70℃搅拌溶解0.5h，得到b相；
49.均质a相，均质速度为3000rpm，添加b相，b相添加结束后，以5000rpm的速度继续均质4min。搅拌冷却至室温后出料，即得到含有白松露菌提取物的脂质体。
50.一、性能测试
51.与实施例1相比，对比例1不含羟丙基甲基纤维素硬脂氧基醚，对比例2不含氢化卵磷脂，对比例3甲基硬脂酰基牛磺酸钠，其余原料与实施例1一致。
52.含白松露菌提取物的脂质体一般贮存稳定性依据gb/t29665-2013进行评价。
53.实施例1和对比例1-3的一般贮存稳定性检测结果见表1。
54.表1实施例1-3的一般贮存稳定性检测结果
[0055][0056]
通过表1可知，实施例1和对比例1-3制备的白松露菌提取物脂质体具有优异的一般贮存稳定性。
[0057]
二、缓释性测试
[0058]
为更好的说明本发明的含白松露提取物的脂质体能够延长白松露提取物的释放时间，起到了缓释或者长效的作用。分别按照实施例1和对比例1-3的制备方法，制备含维生素c乙基醚的白松露提取物脂质体。
[0059]
对比例4
[0060]
一种含维生素c乙基醚的白松露菌提取物脂质体，其与实施例1中的白松露菌脂质体区别在于，b相不同。对比例4的b相为98g白松露菌提取物、2g维生素c乙基醚和2g苯氧乙醇。
[0061]
对比例5
[0062]
一种含维生素c乙基醚的白松露菌提取物脂质体，其与对比例1中的白松露菌脂质体区别在于，b相不同。对比例5的b相为98g白松露菌提取物、2g维生素c乙基醚和2g苯氧乙醇。
[0063]
对比例6
[0064]
一种含维生素c乙基醚的白松露菌提取物脂质体，其与对比例2中的白松露菌脂质体区别在于，b相不同。对比例6的b相为98g白松露菌提取物、2g维生素c乙基醚和2g苯氧乙醇。
[0065]
对比例7
[0066]
一种含维生素c乙基醚的白松露菌提取物脂质体，其与对比例3中的白松露菌脂质体区别在于，b相不同。对比例7的b相为98g白松露菌提取物、2g维生素c乙基醚和2g苯氧乙醇。
[0067]
白松露菌提取物脂质体缓释性的测试方法：分别取4个分装瓶，每个瓶子分别灌装10g的对比例4-7，同时取4g碘伏溶液，分别观察随着时间变化，分装瓶中碘伏溶液的褪色情况。测试结果见图1和表2。
[0068]
维生素c乙基醚是一种维生素c衍生物，维生素c乙基醚具有强还原性，遇到碘伏溶液会发生氧化还原反应，使碘伏褪色。按照实施例1和对比例1-3的白松露菌脂质体制备方法，制备含维生素c乙基醚的白松露菌提取物脂质体，即为对比例4-7。利用维生素c乙基醚能够使碘伏褪色的性质，考察白松露菌提取物脂质体的缓释效果。由图1可知，加入碘酒摇匀后后，对比例5和对比例7就已经完全褪色了，说明缺少羟甲基纤维素硬脂氧基醚(脂质体稳定剂)和甲基硬脂酰基牛磺酸钠(囊泡稳定剂)后，白松露菌提取物脂质体的稳定性很差，活性成分很容易泄露。对比例4制备的含维生素c乙基醚的白松露菌提取物脂质体直到30min后才完全褪色，说明本发明制备的白松露均提取物脂质体对白松露菌提取物的释放具有很好的缓释效果。
[0069]
表2
[0070][0071][0072]
实施例2
[0073]
为了更好的说明本发明的适用性，将本发明实施例1制备的含白松露菌提取物的脂质体以5％的添加量添加到精华液中，并对该精华液进行了稳定性及安全性试验。
[0074]
精华液的制备方法如下：
[0075]
将100g水、20g甘油聚醚-26、5g聚丙烯酰基二甲基牛磺酸铵、1g尿囊素、1g黄原胶，0.5g edta二钠和0.2g透明质酸钠投到水相锅，搅拌升温溶解完全，抽入乳化锅中；
[0076]
将5g异壬酸异壬酯、5g甘油硬脂酸酯柠檬酸酯和10g角鲨烷投入油相锅，搅拌升温溶解完全，抽入乳化锅，均质；
[0077]
将0.5g精氨酸和100g水投入乳化锅，搅拌均匀保温；
[0078]
待乳化锅降温到55℃时，将30g丁二醇、6g 1,2-己二醇、6g对羟基苯乙酮和5g 1,2-戊二醇加入，搅拌均匀；
[0079]
待乳化锅降温到45℃以下时，将645.2g水、5g甜菜碱、2g泛醇、1.05g肌肽、1.05g四氢甲基嘧啶羧酸、0.5g甘草酸二钾和50g含白松露菌提取物的脂质体加入，搅拌均匀，出料，即得含白松露菌提取物脂质体的精华液。
[0080]
防腐效力测试，采用国际标准iso11930：2012(化妆品-微生物学-化妆品产品抗菌防护评定)方法；安全性测试依据《化妆品安全技术规范》(2015年版)的要求采用相应的技术手段，对精华霜中重金属(铅、汞、砷、镉)、风险物质(二甘醇、二恶烷)及微生物安全性实施检测。
[0081]
精华液防腐功效测试结果见表3，结果显示通过iso11930-2012附录b中表b.1中a标准。
[0082]
表3防腐功效测试结果
[0083][0084][0085]
精华液中重金属(铅、汞、砷、镉)、风险物质(二甘醇、二恶烷)及微生物安全性检测结果见表4、表5。铅、汞、砷及镉均未检出，微生物指标符合标准。
[0086]
表4精华液重金属及风险物质检测结果
[0087][0088]
表5精华液微生物检测结果
[0089][0090]
实施例3：体外抗衰老效果检测
[0091]
细胞毒性测试。收集对数生长期人皮肤成纤维细胞(hdfn，pcs-201-010,购自atcc美国模式培养物研究所)，按照细胞密度为8
×
103个/孔接种至96孔板，每孔含培养液100μl。培养24h形成单层细胞后，分别加入5，2.5，1.25，0.63，0.31，0.16和0.08％浓度梯度的精华液继续培养48h。按照cck-8试剂盒检测方法测定细胞相对活性，以不含受试物的培养基处理细胞作为阴性对照。计算细胞相对活性。当相对细胞活性≥80％，认为受试物在该浓度下无细胞毒性。
[0092]
i型胶原蛋白合成能力试验。收集对数生长期hdfn细胞，按照细胞密度为5.6
×
104个/孔接种至24孔板。在培养箱(37℃，5％co2)中培养24h后，加入含有精华液(0.31,0.62和1.25％)的培养基，以未处理细胞作为阴性对照。加药后在培养箱(37℃，5％co2)中继续培养48h，收集培养液。采用人i型胶原蛋白elisa试剂盒进行培养液中i型胶原蛋白含量的检测。
[0093]
弹性蛋白合成能力试验。收集对数生长期hdfn细胞，按照细胞密度为5.6
×
104个/孔接种至24孔板。在培养箱(37℃，5％co2)中培养24h后，加入含有精华液(0.31,0.62和1.25％)的培养基，以未处理细胞作为阴性对照。加药后在培养箱(37℃，5％co2)中继续培养48h，收集培养液。采用人弹性蛋白elisa试剂盒进行培养液中弹性蛋白含量的检测。
[0094]
结果。不同浓度的精华液对hdfn细胞毒性检测结果见图2。与阴性对照组相比，5％以下的精华液对hdfn细胞均无明显细胞毒性(p》0.05)。表明5％以下浓度的精华液无细胞毒性。
[0095]
胶原蛋白是真皮中含量最丰富的蛋白，使皮肤保持一定的强度和弹性。i型胶原占总体胶原的80％，是真皮的主要成分。当皮肤衰老时，胶原蛋白中含量最高的i型胶原占比
比重逐渐降低、胶原纤维交联异常，导致皮肤弹性降低进而产生皱纹。因此，通过测试精华液对hdfn细胞i型胶原蛋白合成量的影响来评价精华液的抗皱功效，结果见表6。由表6可知，与阴性对照组相比，精华液在0.62％和1.25％浓度下作用hdfn细胞后，分别使细胞i型胶原蛋白合成量显著提升10.02％和13.18(p《0.01)。说明，精华液具有促进hdfn细胞i型胶原蛋白合成的能力，并通过提升hdfn细胞i型胶原蛋白合成量达到抗皱功效。
[0096]
表6i型胶原蛋白合成能力试验结果分析
[0097][0098]
弹性蛋白是一种重要的细胞外基质蛋白，可与微原纤维结合形成弹性纤维，在真皮层中，弹性蛋白和胶原蛋白彼此交织，形成致密的板层结构，该结构赋予皮肤弹性以及韧性。弹性蛋白的降解会导致皮肤弹性降低进而产生皱纹。因此，通过测试精华液对hdfn细胞弹性蛋白合成量的影响来评价精华液的紧致功效，结果见表7。由表7结果可知，与阴性对照组相比，精华液在1.25％浓度下作用hdfn细胞后，能够显著提升细胞弹性蛋白合成量(p《0.05)。说明，精华液具有促进hdfn细胞弹性蛋白合成的能力，并通过提升hdfn细胞弹性蛋白合成量达到紧致功效。
[0099]
表7弹性蛋白合成能力试验结果分析
[0100][0101]
实施例4：体内抗衰老效果检测
[0102]
招募35名志愿者(无皮肤病及化妆品过敏史的18到65岁女性；自述面部皮肤敏感，且皮肤不适症状(刺痛、瘙痒、灼烧、发红、脱屑等)中至少有2种以上达到轻度及以上程度)对精华液的使用效果进行评价。基于随机、半脸对照设计，共33名符合条件的女性志愿者参加测试。测试期间，志愿者随意一侧半脸使用精华液，另一侧半脸作为对照区，全脸使用除精华液外日常的其他护肤产品，且应保持产品品牌和使用方式不变。精华液每天早、晚各使用1次，连续使用4周。在精华液使用前、使用2周后和4周后，对双侧脸颊进行皮肤水分含量测试和皮肤光泽度测试。皮肤水分含量测试和皮肤光泽度测试分别使用corneometer和glossymeter仪器进行，结果见表8。
[0103]
表8精华液使用前后皮肤水分和光泽度的统计结果
[0104][0105]
皮肤水分含水量数值越大表示皮肤角质层水分含量越高。由表8可见，与初始值相比，精华液使用2周和4周后，精华液区皮肤水分含量均显著性改善，分别显著性增加7.62和10.07(p《0.05)。与对照区相比，精华液使用2周和4周后，精华液区皮肤水分含量均显著优于对照区(p《0.05)。
[0106]
皮肤光泽度参数“gloss value”和“gloss with dsc”数值越大表示皮肤光泽度越好。与初始值相比，测试产品使用2周和4周后，精华液区皮肤光泽度参数“gloss value”和“gloss with dsc”均显著性改善(p《0.05)。与对照区相比，精华液使用2周和4周后，皮肤光泽度参数“gloss value”和“gloss with dsc”均显著优于对照区(p《0.05)。
[0107]
综上，说明使用含有白松露菌脂质体(5％)的精华液2周和4周后，皮肤水分和光泽度显著提升，表现出保湿和提亮的效果。
[0108]
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管申请人参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围的，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。