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翠菊'花束绯红'叶片的植株再生体系建立

花匠小妙招
2025-01-15 21:26

翠菊'花束绯红'叶片的植株再生体系建立

1668 园艺学报 37卷

翠菊（Callistephus chinensis）原产我国，自1728年由我国传至欧洲然后遍栽世界各地（陈俊愉，2001）。关于翠菊的研究，国外注重于花色、花型（Guzewski，1992），荷兰、英国、以色列、美国等都选育出不少新的品种；国内主要集中在栽培技术方面，孔红（2000）对翠菊进行了核型研究分析；张淑梅等（2001）研究了多效唑喷施对高杆翠菊的矮化效应；牛富和郝俊梅（2002）、高轶华和张永灵（2003）对翠菊的播种、分苗、定植、田间管理、采种、采收等农业技术作了简要介绍；陈兴兰等（2007）采用盆栽试验方法，研究了翠菊在垃圾堆肥混合基质上的生长状况及渗透水对水环境的潜在影响；侯建伟等（2009）通过对混色翠菊群体中的自然杂交单株进行连续6个世代的系谱法选择并选育出翠菊新品种‘吉农大蓝翠菊’。翠菊组织培养方面，仅有一些简要报道，滕年军和陈发棣（2003）用幼嫩茎段培养获得试管苗，但只涉及翠菊快速繁殖和器官再生途径的研究。本实验室前期对翠菊‘花束绯红’下胚轴胚性愈伤组织以及体胚进行诱导，建立了体胚发生途径的植株再生体系（杜丽等，2009），但再生率偏低（多数只有30%左右），用于遗传转化有很大局限性。

本试验中选用切花翠菊‘花束绯红’（C. chinensis‘Bouquet Scarlet’）无菌苗为材料，建立了离体叶片再生植株体系，以期为翠菊的离体快繁和遗传转化等工作奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

以切花翠菊‘花束绯红’（美国Bodger Seeds公司）的无菌苗叶片及其诱导的愈伤组织为试验材料。

1.2 叶片不定芽的诱导

，设计IBA和以MS为基本培养基，附加3%蔗糖，7.5 g · L-1琼脂粉（如无特殊说明，下同）

。取叶片6-BA浓度梯度均分别为0.1、1.0、3.0、5.0 mg · L-1的完全随机组合，共16个处理（表1）（叶片可从垂直于主脉的地方横切2刀）分别接种在上述培养基中，于（25 ± 2）℃条件下培养。设光照培养（光照强度1 000 ~ 1 200 lx，光周期14 h · d-1）和黑暗培养两种处理，确定不同植物生长调节剂组合和配比以及光照条件对叶片不定芽诱导的影响。 1.3 叶片愈伤组织不定芽的诱导

将叶片暗培养下获得的色泽鲜亮的黄色颗粒状愈伤接种在附加0.5 mg · L-1 6-BA和0.5 mg · L-1 IBA的MS培养基上，30 d继代1次。

取黄色颗粒状愈伤组织接种到IBA（质量浓度梯度为0.05、0.1、0.5 mg · L-1）和6-BA（质量浓度梯度为0.5、1.0、1.5 mg · L-1）的MS培养基上进行完全随机组合，共9个处理，暗培养3周后转移到光培养下。

取黄色颗粒状愈伤接种到配方为1.0 mg · L-1 6-BA + 0.1 mg · L-1 IBA的MS培养基上，分别添加，共9个处理，暗培养3脯氨酸、NH4NO3和水解酪蛋白（浓度均分别为100、300、500 mg · L-1）周后转移到光培养下。

以上各处理重复3次。定期观察，6周后统计不定芽诱导率（形成不定芽外植体个数/接种外植体总数）及平均不定芽数（不定芽总数/形成不定芽外植体个数），将所得数据用DPS软件进行差异显著性分析。