鸭疫里默氏杆菌对鸭胚成纤维细胞侵袭特性初析
鸭疫里默氏杆菌对鸭胚成纤维细胞侵袭特性初析
【摘要】： 鸭疫里默氏杆菌病(Riemerella anatipestifer, RA)又名鸭传染性浆膜炎等,是目前危害我国养鸭业最为常见细菌性疾病之一,该病呈世界流行趋势,发病率与死亡率均较高。家鸭是其主要的感染对象,1-8周龄鸭群尤为易感,亦可感染鹅、火鸡、鸡等家禽,是一种胞内寄生菌。RA对鸭体细胞侵袭特性是阐明其致病机制的重要基础数据,但目前RA对鸭体细胞侵袭特性方面的研究资料不多。为清楚RA与鸭成纤维细胞之间的直接作用,我们选择原代培养鸭成纤维细胞为细胞模型,以我国最为流行的RA血清型1型为对象,展开RA对细胞侵袭特性研究。1RA对成纤维细胞的黏附与侵袭能力分析试验黏附与侵袭分析：试验中将RA菌悬液与原代培养的DEF细胞共孵育,分别在孵育的2h、5h、8h用TritonX-100裂解细胞,裂解液涂布细菌培养平板,计数黏附菌落数。侵袭计数同黏附操作,除在分别孵育2h、5h、8h后用100μg/mL庆大霉素处理,后裂解细胞同前操作。结果表明,随着时间的推移,黏附侵袭数目显著增加,初步证明RA具有黏附与侵袭DEF细胞的能力。胞内RA数量变化分析：将RA与DEF细胞共同孵育至2h,用庆大霉素处理后继续孵育,分别在3h、7h、1Oh用TritonX-100处理后,计数结果表明,胞内的RA数量显著减少。为了分析其是否可以离开DEF细胞,我们进行了胞外细菌检测试验,结果表明在胞外可检测到一定数量的RA,表明进入的RA可以离开DEF细胞。电镜观察：为了更直接地观察RA黏附与侵入DEF的过程,我们将RA与DEF细胞分别共同孵育1h、5h、10h,经过常规电镜样品制备后,电镜观察证实了RA黏附与侵入DEF细胞的能力：在加入菌液孵育1h时,可见RA黏附在DEF细胞膜,两者在接触位点以凸起形式吸附,细胞膜高度融合；孵育5h后,可见单个RA以空泡形式存在于细胞中,并可见一些无细菌的空泡；在孵育10h后,可同时发现凋亡细胞与坏死细胞,表明RA诱导DEF细胞死亡机制较为复杂,需做进一步的研究。2RA与细胞重要组成成分对黏附与侵袭的影响分析试验细胞骨架对RA侵袭的影响：为探索细胞骨架是否参与RA侵入细胞这一过程,我们分别用不同浓度的(微管抑制剂)细胞松弛素B、秋水仙素(微丝抑制剂)处理细胞后,可显著抑制RA对DEF细胞的侵袭,表明RA对DEF的侵袭过程有赖于细胞骨架的重排。RA蛋白对侵袭的影响：为了检测RA蛋白是否参与其黏附过程,在RA与细胞孵育前,我们采用不同浓度蛋白酶K对细菌进行处理,可显著抑制RA的黏附力,表明RA的黏附力需要细菌蛋白的参与。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
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