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一种体内外具有抗氧化活性作用的泡桐花提取物的制作方法

花匠小妙招
2025-02-24 12:53

本发明涉及动物药物技术领域，具体为一种具有抗氧化活性作用的泡桐花提取物。

背景技术：

动物机体内具有有效的自由基清除系统，维持体内自由基的正常水平，但随年龄的增长，机体内氧化和抗氧化系统失衡，抗氧化系统不足以清除自由基，导致自由基蓄积。过量的自由基会攻击细胞膜、线粒体膜，与膜中的不饱和脂肪酸反应，造成脂质过氧化增强。脂质过氧化产物又可分解为更多的自由基，引起自由基的连锁反应。膜结构的完整性受到破坏，引起肌肉、肝细胞、线粒体、dna、rna等广泛损伤从而引起各种疾病。自由基主要包括超氧阴离子自由基、羟基自由基和烷氧基自由基等。超氧阴离子是生物体内氧代谢首先形成的自由基，dpph是体内一种稳定的自由基，会攻击生物大分子使其交联或断裂，进而破坏细胞的结构和功能。羟基自由基·oh是一种活性氧，可直接使细胞膜上的不饱和脂肪酸发生过氧化反应并生成丙二醛，与活细胞中的任何分子产生反应，从而使细胞产生损害。h2o2具有很强的氧化性，它单独与红细胞作用能使细胞发生溶血及膜脂质发生过氧化。目前已经证实，清除多余自由基的能力是机体内本身就具备的，主要依靠内源性自由基清除系统，包括过氧化氢酶、超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)等一些酶类抗氧化剂。

因此，抗氧化剂研究的目的是应用其增强动物体内内源性自由基清除系统能力，从而保护动物体因膜结构损伤造成的各种疾病。外源性抗氧化剂是指存在于机体外，可以为体内自由基提供多余的电子，中和并清除自由基来维护机体健康的物质，其中包括维生素抗氧化剂(维生素c、维生素e、β-胡萝卜素等)，微量元素类抗氧化剂(se、zn、ge等)，抗氧化因子(谷胱甘肽、半胱氨酸、硫辛酸等)等。在动物饲料或饮水中添加以上复方维生素、微量元素及抗氧化因子，可以发挥较好的体内抗氧化功能。

泡桐花在我国大量种植，分布广泛。本研究发现，泡桐花提取物在体外能对超氧阴离子自由基及羟自由基产生较强的清除作用，并具有较强的抗h2o2氧化溶血能力；在体内，泡桐花提取物(0.2g/kg体重)能增强小鼠心脏、肝脏、回肠组织中的sod活性，提高心脏、肝脏、回肠组织、血清中的t-aoc活性，增强心脏、肝脏、回肠组织中gsh-px活性，降低心脏、肝脏、回肠组织、血清中的mda的含量，抗氧化活性显著优于vc对照组。结果显示，泡桐花提取物在体内外均具有明显的抗氧化作用，作用显著优于vc。且泡桐花价格低廉，加工工艺简单，所需加工成本较低，可开发为动物用新型抗氧化剂。

技术实现要素：

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种具有抗氧化活性作用的泡桐花提取物，不仅在体外具有较好的抗氧化作用，在动物体内也具有较强的抗氧化活性。解决了现有抗氧剂提取制造不便或者是使用配合复杂的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种具有抗氧化活性作用的泡桐花提取物的提取工艺，包括：

sp1：将泡桐花与水为1：20(质量体积比)的量加入器具中煎煮2h，使用50目的筛网过滤，同时在滤渣中再次加入15倍的水量，再次煎煮，煎煮时间为1h，使用50目的筛网再次过滤，将第一次滤液和第二次滤液混合；

sp2：将混合的液体置于3000r/min的离心机中，离心机工作时间为10min，分离出上层清液和底层的沉淀物；

sp3：分离上层清液使用低温蒸发的方式，即将过滤的液体装入蒸发容器中，将蒸发容器置于水中，以水为热量的传导介质加热蒸发容器，使得过滤的液体中的泡桐花物质析出成为固体。

sp4：将泡桐花提取物从蒸发容器倒出，并置于密封烘干装置中低压烘干，且烘干的温度控制在60℃，烘干后细化破碎处理。

(三)有益效果

本发明提供了一种具有抗氧化活性作用的泡桐花提取物。具备以下有益效果：

1、本发明泡桐花价格低廉，加工工艺简单，所需加工成本较低，可开发为动物用新型抗氧化剂。

2、本发明，泡桐花提取物在体外能对超氧阴离子自由基及羟自由基产生较强的清除作用，并具有较强的抗h2o2氧化溶血能力；在体内，泡桐花提取物(0.2g/kg体重)能增强小鼠心脏、肝脏、回肠组织中的sod活性，提高心脏、肝脏、回肠组织、血清中的t-aoc活性，增强心脏、肝脏、回肠组织中gsh-px活性，降低心脏、肝脏、回肠组织、血清中的mda的含量，抗氧化活性显著优于vc对照组，结果显示，泡桐花水提物在体内外均具有明显的抗氧化作用，作用显著优于vc。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一：

本发明实施例提供一种具有抗氧化活性作用的泡桐花提取物的提取工艺，包括：

sp2：将混合的液体置于3000r/min的离心机中，离心机工作时间为10min，分离出上层清液和底层的沉淀物；

sp4：将泡桐花提取物从蒸发容器倒出，并置于密封烘干装置中低压烘干，且烘干的温度控制在60℃，烘干后细化破碎处理。

实施例二：

1、试验材料

icr小鼠(重量18～22g)、泡桐花提取物(多糖含量为41％)、vc(含量99％)、总抗氧化试剂盒、超氧化物歧化酶试剂盒、丙二醛测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒。

1.1体外试药配制

0.5mg/ml、1mg/ml和2mg/ml泡桐花提取液(以多糖含量计)：称取0.1g、0.2g、0.4g泡桐花提取物粉末，分别加蒸馏水至82ml，混匀。1mg/mlvc溶液，临用前配制。

1.2体外试药配制

泡桐花提取溶液：称取适量泡桐花提取物粉末，用蒸馏水配制成20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml溶液(以多糖含量计)。10mg/mlvc溶液，临用前配制。

2、试验方法

2.1体外抗氧化试验

2.1.1超氧阴离子自由基清除试验

用邻苯三酚自氧化法。取试管48支，分为泡桐花提取物组(0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml泡桐花提取液)，1mg/mlvc对照组、空白对照组和本底对照组，每组4个重复。药物组、空白组每管加入ph值为8.2的tris-hcl缓冲液7.2ml；药物组分别加入各相应药液3.0ml，混匀；药物组和空白组各管加入7mmol/l的邻苯三酚0.9ml开始反应，第4min时加入10mol/l的浓盐酸3滴终止反应。本底组取各中药提取液3.0ml,加蒸馏水补充至与其他组相同体积。各组用754型紫外分光光度计测定325nm处的吸光度(a325)，按下式计算超氧阴离子自由基清除率。

2.1.2羟自由基清除试验

取试管48支，分为泡桐花提取物组、损伤组和未损伤组并进行编号，每组4个重复。每管加入5mmol/l的邻二氮菲1.0ml、ph7.4的磷酸缓冲液4.0ml，充分摇匀，再加7.5mmol/l的feso42.0ml，立即摇匀；泡桐花提取物组分别加入提取液2.0ml和0.2％的h2o2溶液2.0ml，损伤组加入0.2％h2o2溶液2.0ml，未损伤组不加泡桐花提取液和h2o2溶液；各管加蒸馏水至20ml，37℃水浴中反应1h，用754型紫外分光光度计测定536nm处的吸光度a536，按下式计算羟自由基清除率。

2.1.3抗h2o2氧化溶血试验

icr小鼠眼球采血，肝素抗凝，4℃3000r/min离心得红细胞，生理盐水洗3次，制成0.5％红细胞悬液。取试管48支，分为泡桐花提取物组、vc对照组、空白组和本底对照组，每组重复4支。每管加入0.5％红细胞悬液4.0ml，泡桐花提取物组分别加入泡桐花提取液4.0ml，对照组加入等量生理盐水。本底组取各泡桐花提取液4.0ml,再加蒸馏水4.0ml。最后每管加入50mmol/l的h2o22.0ml混匀，37℃温浴1h，加生理盐水16ml，3000rpm离心5min，取上清液用754型紫外分光光度计测定415nm处的吸光度值，按下式计算氧化溶血抑制率。

2.2体内抗氧化试验

将50只icr小鼠预饲养7d后随机分成5组，即泡桐花提取物高、中、低剂量组、vc对照组、空白对照组，每组10只，雌雄分开饲养。泡桐花提取物组小鼠分别每天灌胃20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml泡桐花提取液0.2ml，vc照组小鼠每天灌胃0.2ml，空白对照组小鼠每天灌胃等体积的生理盐水。实验期间，小鼠自由摄食和饮水，每天上午8点进行灌胃。灌胃30d后，小鼠禁食12h，眼球采血，血样于37℃静置2h，4℃过夜后，于4℃，3000r/min离心10min，分离血清，待测。将采血后的小鼠处死解剖，取出心、肝、肾、回肠，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干表面水分，各组织与生理盐水按1:9的比例低温匀浆，制备匀浆液，3000r/min离心10min，留上清液，待测。

2.2.1指标测定

a体重变化

分别于给药后的0、7、14、21和28d称重，称重前禁食12h。比较各组体重的变化。

b抗氧化活性测定

以各组小鼠心脏、肝脏、肾脏、回肠和血清为试验样品，选择超氧化物歧化酶(sod)、总抗氧化能力(t-aoc)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)和丙二醛(mda)为测定指标，严格按照试剂盒说明书进行含量测定。

3结果

3.1体外抗氧化试验

3.1.1超氧阴离子自由基清除率

泡桐花提取物对超氧阴离子自由基清除率结果见表1。vc溶液组对超氧阴离子自由基清除率最大，清除能力显著高于其他各组(p<0.05)；泡桐花提取物浓度增大时，对超氧阴离子自由基清除率随之增强。

表1泡桐花提取物对超氧阴离子自由基清除率(％)

3.1.2羟自由基清除率

各泡桐花提取物对羟自由基清除率结果见表2。泡桐花提取物高浓度组对羟自由基清除率最大，清除能力显著高于vc对照组和泡桐花低浓度组(p<0.05)；泡桐花提取组浓度增大时，对羟自由基清除率随之增加，泡桐花提取物在低浓度(0.5mg/ml)时羟自由基清除率亦高于vc组，但差异不显著(p>0.05)。表2泡桐花提取物对羟自由基的清除率(％)

3.1.3抗h2o2氧化溶血率

各泡桐花提取物抗h2o2氧化溶血率结果见表3。泡桐花提取物高浓度组抗h2o2氧化溶血率能力最强，显著高于vc对照组和泡桐花低浓度组(p<0.05)；泡桐花提取组浓度增大时，抗h2o2氧化溶血率能力随之增加。

表3中药提取物抗h2o2氧化溶血率(％)

.2体内抗氧化试验

3.2.1泡桐花提取物对小鼠体重的影响

因雌雄小鼠体重和生长速度有差异，因此雌雄小鼠分开进行统计。泡桐花提取物对小鼠体重的影响结果见表4、5。雌雄小鼠给药前及给药后的4个时间点，各给药组之间小鼠体重均无显著性差异(p﹥0.05)。

表4泡桐花提取物对雌性小鼠体重的影响(n＝5)

表5泡桐花提取物对雄性小鼠体重的影响(n＝5)

3.2.2泡桐花提取物对小鼠血清和组织中sod的影响

泡桐花提取物对小鼠血清和组织中sod的影响结果见表6。泡桐花提取物高剂量组能增强心脏sod活性，显著优于中、低剂量组和vc、空白对照组(p<0.05)。泡桐花提取物高剂量组能增强肝脏sod活性，效果优于其余各组，且显著高于vc对照组(p<0.05)。各给药组肾脏组织中sod的活性稍优于对照组，但无显著性差异(p>0.05)。泡桐花高、中剂量能增强回肠组织中sod的活性，显著强于其他各组(p<0.05)。血清中sod含量结果显示，vc、泡桐花提取物高、中剂量能显著增强血清sod活性，显著优于低剂量和空白对照(p<0.05)，但vc、泡桐花高、中剂量间无显著性差异(p>0.05)。

表6泡桐花提取物对小鼠血清和组织中sod的影响(n＝4)

3.2.3泡桐花提取物对小鼠血清和组织中t-aoc的影响

泡桐花提取物对小鼠血清和组织中t-aoc的影响结果见表7。泡桐花提取物高剂量组能增强心脏中t-aoc活性，显著优于其余各组(p<0.05)。泡桐花提取物高、中剂量组能增强肝脏t-aoc活性，效果优于其余各组，且显著高于bc对照组(p<0.05)。泡桐花中剂量组肾脏组织中t-aoc的活性优于其他各组，显著强于vc和bc对照组(p<0.05)。泡桐花高、中剂量能增强回肠组织中t-aoc的活性，显著强于vc和bc对照组(p<0.05)。血清中t-aoc含量结果显示，泡桐花高剂量组和vc组中t-aoc活性，显著优于低剂量和空白对照(p<0.05)。

表7泡桐花提取物对小鼠血清和组织t-aoc的影响(n＝4)

3.2.4泡桐花提取物对小鼠血清和组织gsh-px的影响

泡桐花提取物对小鼠血清和组织gsh-px的影响结果见表8。泡桐花提取物高剂量组能增强心脏、肝脏gsh-px活性，显著优于其余各组(p<0.05)。各组肾脏组织中gsh-px的活性无显著性差异(p>0.05)。泡桐花各给药组和vc组均能增强回肠中gsh-px的活性，泡桐花高剂量组显著强于空白对照组(p<0.05)。血清中gsh-px含量结果显示，vc组中gsh-px活性最强，其次为泡桐花高剂量组，均显著高于低剂量组和空白对照组(p<0.05)。

表8泡桐花提取物对小鼠血清和组织gsh-px的影响(n＝4)

3.2.5泡桐花提取物对小鼠血清和组织mda的影响

泡桐花提取物对小鼠血清和组织mda的影响结果见表9。泡桐花提取物各组和vc对照组均能显著降低心脏中mda的含量，与bc组成显著性差异(p<0.05)，各给药组间差异不显著(p>0.05)。泡桐花提取物中剂量组可有效降低肝脏中mda含量，与bc组成显著性差异(p<0.05)。泡桐花高、中剂量组和vc对照组均能降低肾脏中mda的含量，与bc组成显著性差异(p<0.05)。泡桐花各组和vc组中均能显著降低回肠和血清中mda，与bc组成显著性差异(p<0.05)。

表9泡桐花提取物对小鼠血清和组织mda的影响(n＝4)

4结论

由泡桐花提取物体外抗氧化试验研究结果可知，在一定浓度内泡桐花提取物对超氧阴离子自由基及羟自由基有较强的清除作用，抗h2o2氧化溶血率能力也很强。由泡桐花提取物体内抗氧化活性研究结果可知，泡桐花提取物能够显著提高血清中sod和gsh-px的活力，增强t-aoc性能，同时降低mda含量，表明泡桐花提取物具有很好的清除体内自由基的作用，能够有效降低自由基氧化对机体的损伤，起到抗氧化的功能，且随着泡桐花提取物剂量的增加，抗氧化能力逐渐增强。

因此证明泡桐花提取物在体内外具有良好的抗氧化作用，为泡桐花提取物在饲料、食品、医药领域进一步开发为抗氧化剂提供理论依据。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。