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经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法.pdf

花匠小妙招
2025-03-01 04:45

1、(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202211164664.2 (22)申请日 2022.09.23 (71)申请人江苏省林业科学研究院地址 211153 江苏省南京市江宁区丹阳大道109号 (72)发明人吕运舟董筱昀孙海楠蒋泽平杨勇黄利斌 (74)专利代理机构南京钟山专利代理有限公司 32252 专利代理师刘佳慧 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) A01G 2/30(2018.01) (54)发明名称一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法 (57)摘要本发明公开了一种经愈伤

2、组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，包括以下步骤：步骤一、采集榔榆休眠期枝条作为接穗，接穗无需有芽体；步骤二、嫁接前，接穗上表面浸泡在愈伤组织诱导液中；步骤三、取榔榆实生苗作为砧木，取步骤二中的接穗进行嫁接；绑扎过程，将接穗用嫁接膜完全包裹；步骤四、嫁接完成后，使用保温遮光材料对接穗进行保温、避光处理；步骤五、嫁接后 1530天，拆除保温遮光材料诱导愈伤组织分化不定芽；步骤六、不定芽分化完成后，及时划开接穗顶部嫁接膜，促进芽生长。本发明创新了嫁接过程接穗的再生方式，摆脱了现有嫁接、扦插等无性繁殖技术对穗条原有芽体的依赖。权

3、利要求书1页说明书4页附图2页 CN 115530073 A 2022.12.30 CN 115530073 A 1.一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、采集榔榆休眠期枝条作为接穗，接穗无需有芽体；步骤二、嫁接前，接穗上表面浸泡在愈伤组织诱导液中；步骤三、取榔榆实生苗作为砧木，取步骤二中的接穗进行嫁接；绑扎过程，将接穗用嫁接膜完全包裹；步骤四、嫁接完成后，使用保温遮光材料对接穗进行保温、避光处理；步骤五、嫁接后1530天，拆除保温遮光材料诱导愈伤组织分化不定芽；步骤六、不定芽分化完成后，及时划开接穗顶

4、部嫁接膜，促进芽生长。 2.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤一采集枝条的时间为每年12月。 3.根据权利要求2所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤三嫁接的时间为当年34月。 4.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤一中，所述接穗的长度为1215cm，粗度为0.5cm2.0cm。 5.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤一中，采集的枝条蜡封后于4下保存。 6.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定

5、芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤二中，所述愈伤组织诱导液为萘乙酸0.5ppm5.0ppm和6苄氨基嘌呤 0.5ppm5.0ppm混合液。 7.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤二中，浸泡时间为30min2h。 8.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤三中，所述榔榆实生苗为12年生实生苗，地径0.6cm3.0cm。 9.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤三中，所述接穗剪成为5.0cm10.0cm，优选6c

6、m。 10.根据权利要求1所述的经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，其特征在于：其中，步骤四中，所述保温、避光处理的方法为塑料袋包扎接穗，外面再用遮光材料包裹避光。权利要求书 1/1 页 2 CN 115530073 A 2 一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法技术领域 0001 本发明属于林木种苗培育领域，涉及一种嫁接繁殖方法，尤其涉及一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法。背景技术 0002 榔榆(Ulmus parvifolia Jacq)，榆科(Ulmaceae)榆属(Ulmus L.)落叶大乔木，主要分布于中国、朝鲜半岛及日本，是我国

7、南部重要的绿化树种，同时其木材也是我国的硬材之一。国内榔榆资源多用于盆景制作和绿化点缀，采用直接从野外挖掘获得，加上城市开发及农业生产活动，野外生存数量急剧下降，急需进行保护和开发利用。因此，开展榔榆资源保护、良种培育等工作尤为紧迫。国外开展榔榆良种选育工作较早，例如北美上世纪40年代开引种亚洲榆，主要是白榆(Ulmus pumila)和榔榆，用以开展榆属抗病育种，目前已成功培育出11个速生、干形通直、叶形优美或抗病性强的榔榆品种。吕运舟等(2020)经苗期测定江苏地区20个榔榆优树嫁接无性系的苗高和地径，其差异均达极显著水平，表明具有较丰富

8、的遗传变异，其中无性系JN02和JD08具有速生潜力，可为造林试验提供材料。榔榆无性繁殖主要采用嫁接、扦插等技术，如陈开森等(2015年)开展了榔榆硬枝扦插研究、周洁等 (2021)开展的榔榆嫩枝扦插研究表明扦插技术可以作为榔榆无性繁殖的技术手段。 0003 但是与嫁接繁殖相比，扦插繁殖对组织材料、设施条件要求较高，且再生植株生长量小，目前未在种苗生长中使用。传统的嫁接、扦插等无性繁殖技术均对接穗(插穗)要求较高，需要具有发育完整的饱满芽，以萌发再生植株。而在实际生产过程，特别是野外优异种质资源收集过程中，因榔榆小枝细软下垂，适用于嫁接或扦插的材料较

9、难采集，阻碍了优良种质的无性繁殖保存。因此，研发一种不要饱满腋芽，而经不定芽分化的嫁接繁殖方法，解决接穗采集难题，并保障无性繁殖再生植株快速生长，解决榔榆无性繁殖对接穗质量的依赖，对榔榆无性繁殖及其他树种具有重要意义。发明内容 0004 本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，以解决现有技术要求接穗具有饱满芽等问题。 0005 为实现上述目的，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，具有这样的特征：包括以下步骤： 0006 步骤一、采集榔榆休眠期枝条作为接穗，接穗无需有芽体； 0007 步骤二、嫁接前，接穗上表面浸泡在愈伤组

10、织诱导液中； 0008 步骤三、取榔榆实生苗作为砧木，取步骤二中的接穗进行嫁接；绑扎过程，将接穗用嫁接膜完全包裹； 0009 步骤四、嫁接完成后，使用保温遮光材料对接穗进行保温、避光处理； 0010 步骤五、嫁接后1530天，拆除保温遮光材料诱导愈伤组织分化不定芽； 0011 步骤六、不定芽分化完成后，及时划开接穗顶部嫁接膜，促进芽生长。说明书 1/4 页 3 CN 115530073 A 3 0012 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤一采集枝条的时间为每年12月。 0013 进一步，本发明提

11、供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤三嫁接的时间为当年34月。 0014 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤一中，所述接穗的长度为1215cm，粗度为0.5cm2.0cm。 0015 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤一中，采集的枝条蜡封后于4下保存。 0016 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤二中，所述愈伤组织诱导液为萘乙酸0

12、.5ppm5.0ppm和6苄氨基嘌呤0.5ppm5.0ppm混合液。 0017 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤二中，浸泡时间为30min2h。 0018 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤三中，所述榔榆实生苗为12年生实生苗，地径0.6cm3.0cm。 0019 进一步，本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤三中，所述接穗剪成为5.0cm10.0cm，优选6cm。 0020 进一步，

13、本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤四中，所述保温、避光处理的方法为塑料袋包扎接穗，外面再用遮光材料(例如报纸、黑塑料纸等)包裹避光。 0021 本发明的有益效果在于：本发明提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，通过愈伤组织诱导液的浸泡和保温避光处理实现嫁接成活。愈伤组织生成后，在自然光照下即可分化不定芽，现有嫁接技术需要完整芽体才能萌发形成植株，芽体自生发育不良、嫁接过程受损或嫁接后失活都将导致嫁接失败，本发明方法经愈伤组织分化不定芽可有效避免对接穗芽体的依赖，同时增加嫁接成苗率。与现

14、有技术相比，本发明选用的榔榆接穗市无需芽体，由接穗上段切面经愈伤组织分化不定芽再生植株，创新了嫁接过程接穗的再生方式，摆脱了现有嫁接、扦插等无性繁殖技术对穗条原有芽体的依赖。附图说明 0022 图1是无芽体接穗采用本发明方法嫁接成活的榔榆照片； 0023 图2是有芽体接穗采用传统嫁接方法嫁接成活的榔榆照片。具体实施方式 0024 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。 0025 实验材料：砧木为江苏省林业科学研究院实验林场(南京江宁)一年生榔榆

15、容器苗 (容器规格为30cm20cm)；穗条为30年生以上榔榆大树采集枝条。 0026 试验方法： 2022年1月至2月，于扬州江都、无锡扬州、南京江宁等地调查采集榔榆说明书 2/4 页 4 CN 115530073 A 4 优异野生种质资源健壮枝条作为接穗，蜡封后保存于4冷库内； 2022年3月中旬，在榔榆实生苗冬芽萌动时开始嫁接。 0027 对比例 0028 本对比例采用现有的嫁接繁殖方法进行榔榆嫁接繁殖。 0029 具体方法为： 2022年3月16日，分别选取有饱满芽、无芽体的接穗进行嫁接试验，采用枝接法，未做其他处理，每个处理30株，观察不同状态接穗对榔榆

16、嫁接成活情况。至4月15 日，解开绑扎嫁接膜，发现接穗均与砧木愈合，接穗均具有活力，萌发再生植株情况如表1。 0030 表1 有无芽体接穗嫁接情况表 0031 0032 从表1可以看出，采用现有的传统嫁接繁殖方法，无芽体的接穗无法嫁接成活，只能采用有饱满芽的接穗进行嫁接，即传统嫁接繁殖方法对接穗的要求很高。 0033 实施例 0034 本实施例提供一种经愈伤组织不定芽再生的榔榆嫁接繁殖方法，包括以下步骤：步骤一、采集榔榆休眠期枝条作为接穗，接穗无需有芽体；步骤二、嫁接前，接穗上表面浸泡在愈伤组织诱导液中；愈伤组织诱导液为萘乙酸(NAA)0.5ppm5.0p

17、pm和6苄氨基嘌呤(6 BA)0.5ppm5.0ppm混合液，浸泡时间为30min2h；步骤三、取榔榆实生苗作为砧木，取步骤二中的接穗进行嫁接；绑扎过程，将接穗用嫁接膜完全包裹；步骤四、嫁接完成后，使用保温遮光材料对接穗进行保温、避光处理；步骤五、嫁接后1317天，拆除保温遮光材料诱导愈伤组织分化不定芽；步骤六、不定芽分化完成后，及时划开接穗顶部嫁接膜，促进芽生长。 0035 具体的，本实施例通过四组实验观察不同外源激素浓度处理对无芽接穗嫁接成活的影响： 0036 设置处理1： NAA 0.5ppm+6BA 2.0ppm，处理2： NAA 0.5p

18、pm+6BA 0.5ppm，处理3： NAA 2.0ppm+6BA 0.5ppm，同时以清水处理为对照(CK)，接穗上端浸泡30min后嫁接，每处理嫁接30株，共120株。试验于2022年3月16日开展，嫁接后接穗用塑料袋套扎保温，外面再用报纸包裹遮光。至20天后解开报纸及塑料袋，观察愈伤组织生成情况， 45天后观察愈伤组织分化芽情况并在嫁接包扎嫁接膜上划开一道口子， 6月15日统计嫁接成活率，结果见表2。 0037 表2 不同外源激素浓度处理对无芽接穗嫁接成活的影响 0038 0039 根据表2结果可以看出，保温避光措施可以促进榔榆无芽接穗上表面形成愈伤组织，

19、再经不定芽分化再生植株实现嫁接成活。此外，激素配比对愈伤组织生成和植株再生的影响较大，其中处理2的有28接穗上表面形成愈伤组织，愈伤组织生成率高达93.3，愈伤说明书 3/4 页 5 CN 115530073 A 5 组织不定芽分化再生植株率为82.1，分别较对照提高了7.1倍和3.3倍。 0040 无芽体接穗采用本实施例方法嫁接成活的榔榆如图1所示，有芽体接穗采用传统嫁接方法嫁接成活的榔榆如图2所示，由图1和图2可以看出，本方法与有芽体接穗嫁接的效果一致。说明书 4/4 页 6 CN 115530073 A 6 图1 说明书附图 1/2 页 7 CN 115530073 A 7 图2 说明书附图 2/2 页 8 CN 115530073 A 8