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大花蕙兰的组织培养和快速繁殖.pdf

花匠小妙招
2025-03-10 01:11

收稿日期:2008-01-23大花蕙兰的组织培养和快速繁殖

许晓静,姜玉英,董树春,李爱杰

(鸡西市农业生物工程研究所,黑龙江鸡西158100)

摘　要:对大花蕙兰的组织培养和快速繁殖技术进行试验。采用幼叶、茎基和茎段作初代诱导,发现带侧芽的茎段诱导效果最好;在MS培养基中添加62BA3.0mg/L最适宜原球茎的增殖。

关键词:大花蕙兰;组织培养

Tissue Culture and F ast B reeding of Cymbidium gra ndi f lorum

X u Xiaojing;Jiang Yuying;Dong Shuchun;Li Aijie

(Jixi city agriculture biological engineering research institute158100)

Abstract:This article reported the results of the callus induction and plantlet regeneration of Cy mbi di um g randi f lorum.Compared with the results of leaf,stem and petiole as explants respetively,stem was the best;The medium with highest coefficient of multiplication was MS+BA3.0mg/L.

K ey w ord:Cy mbi di um g randi f lorum;tissue culture

　　大花蕙兰是风靡世界的珍贵观赏花卉,属兰科蕙兰属,原生种产于喜马拉雅山、印度、缅甸、泰国等地,后经人工杂交选择培育而成。植株及花均大,特别是四倍体植株,花朵大而优美,花瓣雄厚,花色丰富多样,花期长,而且有较强的抗寒性[1]。大花蕙兰以其独特的花形,绚丽的色彩,淡雅的芳香,优美的叶形,深受各国人民喜爱,享有“花中美女”的圣誉。但大花蕙兰作为兰科植物,由于种子发育不完全,几乎无胚乳,在自然条件下,种子萌发需要与真菌共生,因此种子萌发率极低,传统的分株繁殖极慢,为了快速大量繁殖大花蕙兰,实现兰花产业化道路,生产上应用了植物组织培养快繁的技术。

1　材料与方法

选择生长健壮无病虫侵染的植株,取其假鳞茎上新生侧芽,假鳞茎较粗短,随着茎的生长成熟,生长点及附近的分生组织活性会减弱,所以嫩芽上才容易诱导原球茎,其外植体切口很少有褐变物质渗出,因此较易成功。

将取下的芽用洗涤剂刷洗表面,并用流水冲洗2～3h,拿至无菌工作间的超净台上进一步消毒,用70%酒精擦洗3～4s,然后放入0.1%升汞溶液中灭菌5～7min,再用无菌水冲洗干净,再放入5%漂白粉溶液中灭菌10min,再用无菌水冲洗3次,将消毒后的茎尖切成2mm×1.5mm×1.5mm方块,接种进行培养,由于大花蕙兰芽不易引起褐变,可以将芽采下放在培养皿内,至一定数量再接种。

2　结果与分析

2.1　原球茎诱导

原球茎的诱导采用对比试验,对带侧芽的茎段、茎基、和幼叶接种于不同培养基的表现作了比较,详见表1。接种后将培养物置于摇床上,进行液体振荡培养,培养温度24±2℃,光照每天12h,光照强度2000lx。两周左右可见部分外植体膨大,6周左右膨大的外植体形成绿色原球茎。结果显示,幼叶和茎基在两种培养基上诱导效果均较差,仅有极少量原球茎形成。带侧芽的茎段在含BA0.4mg/L的VW培养基中较易诱导出原球茎,BA浓度升高则不利于原球茎的诱导。说明大花蕙兰的原球茎诱导以茎段在较低浓度BA 情况下最为合适,这与郑迎冬等的试验结果相一致[2]。

表1　不同培养基对不同外植体诱导原球茎的影响

外植体

VW+BA0.4mg/L VW+BA1.0mg/L 接种数原球茎数诱导率/%接种数原球茎数诱导率/%幼　叶3500b*3000b

茎　段302893.3a36514.0a

茎　基402 5.0b3100b

　　注:利用新复极差法[3]对数据进行差异显著性分析。同一列不同小写字母表示在P<0.05水平差异显著,下同。

2.2　原球茎的增殖

原球茎为球状体,外观象瘤状愈伤组织,初期表面球状物不明显,继续培养,可见表面突起一个个圆球,部分表面细胞分化出根毛状物,为达到大量繁殖的目的,在原球茎阶段做增殖最为理想。增殖阶段在兰花工业化生产上尤为重要,适合的培养基可以提高原球茎的增殖率,快速得到优质再生苗。在原球茎分化出茎叶之前,将原球茎取出切成小块,转移到增殖培养基上,诱导培养基并非最佳增殖培养基,增殖阶段使用MS培养基较理想,我们对引进大花蕙兰21个品种进行增殖培养,采用MS附加5个不同激素组合进行对比试验,筛选出MS附加BA3.0、蔗糖30g、琼脂8g,p H5.5效果最好,详见表Ⅱ。经过1年增殖培养,由初始21瓶试管苗增殖为6000瓶试管苗,增殖效果显著,其中代号为7898、7818、7863大花蕙兰品种增殖最好,培养8周每圆球茎增殖在6～8倍,代号为C28、8000两个品种表现最差但增殖倍数也在2～5倍,其他品种表现中庸,增殖倍数在6倍左右。

第4期(总第95)中国林副特产No14(GSNO195) 2008年8月Forest By2Product and Speciality in China Aug1

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