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七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用的制作方法

花匠小妙招
2025-04-17 04:05

七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用的制作方法
本发明属于医药领域，具体涉及七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用及七叶莲提取物的制备方法。
背景技术：
七叶莲为五加科鹅掌柴属植物密脉鹅掌柴scheffleravenulosa(wightetarn.)harms的干燥全株，又名七叶藤、七加皮等，主要产于中国东南、西南各省。味甘、淡，性温，有舒筋活络、消肿止痛的功效，民间主要用于风湿骨痛、跌打肿痛、腰肌劳损、大便燥结等症的治疗。由于该植物含有皂苷类、有机酸类和甾醇类等多种化合物，其生理及药理活性一直被国内外研究机构关注。文献报道该植物具有镇痛抗炎、抗病毒、抗肿瘤等作用，此外对平滑肌及中枢神经系统亦有作用。心脑血管疾病已成为人类死亡病因最高的头号杀手，也是人们健康的“无声凶煞”，常见的心脑血管疾病有动脉粥样硬化、冠心病、高血压、心肌梗塞、心绞痛、心律衰竭等。动脉粥样硬化是心脑血管发病和死亡的主要病因，该病是指动脉内膜有脂质沉积，伴有平滑肌细胞和纤维成分增生，逐渐在动脉壁局部形成斑块，斑块内组织坏死崩解，与沉积的脂质结合，形成粥样物质。引起动脉粥样硬化的病因有，高脂血症、高血压、吸烟、糖尿病等病因。本发明将七叶莲的全株经化学提取、分离所得的有效部位制为七叶莲提取物，主要药效学实验表明七叶莲提取物具有能明显降低心肌耗氧量，能抑制血小板聚集，能延长动脉血栓形成时间，并能降低全血粘度，延长血栓形成的时间，能显著降低脑缺血再灌注脑梗死范围，升高sod活性、降低mda水平，并能缩小心肌缺血时心肌梗死范围，能明显抑制mda的升高、升高sod活性，增加冠脉血流量、降低血管阻力。以上药效学结果表明七叶莲提取物具有明显抗心、脑缺血作用。技术实现要素：本发明的目的是提供一种七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用，为预防和治疗心脑血管疾病提供一种新产品。七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用。所述的七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用，其特征在于，所述药物具有降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、降低全血粘度、延长血栓形成时间、改善脑缺血及缺血再灌注损伤及改善心肌缺血损伤的作用，对预防及治疗动脉粥样硬化、高血脂、心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞、脑中风具有显著的疗效。所述的七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用，其特征在于所述的药物为七叶莲提取物为主要组分制备的具有预防和治疗心脑血管疾病作用的药品或保健品。所述的七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用，其特征在于所述的七叶莲提取物由以下方法制备而成：取七叶莲药材粗粉，回流提取三次，第一次加入10倍量70％乙醇回流提取3小时，第二次加入8倍量70％乙醇回流提取1.5小时，第三次加入8倍量70％乙醇回流1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇后上hpd-100大孔吸附树脂柱层析，依次用2倍柱体积水和4倍柱体积85％乙醇洗脱，取85％乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩、喷雾干燥，得到七叶莲总提取物(收率2.78％)，经hplc检测，绿原酸、异绿原酸a、异绿原酸c、紫云英苷、槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷和山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷6成分总含量为3.8％。所述的七叶莲提取物在制备预防和治疗心脑血管的药物中的应用，其特征在于所述的药物由以下方法制备而成：将得到的七叶莲提取物添加防腐剂、香味剂、着色剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、粘合剂、调味剂、抑菌剂中的一种或多种辅料制备成注射液、肠溶片剂、颗粒剂、丸剂、合剂、散剂、注射用冻干粉针剂、糖浆剂或胶囊剂的药品。附图说明附图1对线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤脑梗死率的影响：从上至下，从左至右，依次为假手术组、模型对照组、血塞通100mg/kg.bw剂量组、七叶莲提取物低剂量组(1g/kg.bw)、七叶莲提取物中剂量组(1.5g/kg.bw)和七叶莲提取物高剂量组(2g/kg.bw)；具体实施方式下面通过各种具体实施例来进一步证实七叶莲提取物具有预防和治疗心脑血管疾病的作用。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。实施例1取七叶莲药材粗粉，加入15倍量70％乙醇回流提取5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇后上hpd-100大孔吸附树脂柱层析，依次用3倍柱体积水和5倍柱体积85％乙醇洗脱，取85％乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩、喷雾干燥，得到七叶莲总提取物，经hplc检测，绿原酸、异绿原酸a、异绿原酸c、紫云英苷、槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷和山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷6成分总含量为3％，加入药用辅料制成肠溶片剂。实施例2取七叶莲药材粗粉，，加入5倍量70％乙醇回流提取1小时，重复回流提取5次，滤过，合并滤液，回收乙醇后上hpd-100大孔吸附树脂柱层析，依次用1倍柱体积水和2倍柱体积85％乙醇洗脱，取85％乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩、喷雾干燥，得到七叶莲总提取物，经hplc检测，绿原酸、异绿原酸a、异绿原酸c、紫云英苷、槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷和山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷6成分总含量为3.5％，加入药用辅料制成胶囊剂。实施例3取七叶莲药材粗粉，回流提取3次，第1次加入10倍量70％乙醇回流提取3小时，第2次加入8倍量70％乙醇回流提取1.5小时，第3次加入8倍量70％乙醇回流1.5小时，滤过，合并滤液，回收乙醇后上hpd-100大孔吸附树脂柱层析，依次用2倍柱体积水和4倍柱体积85％乙醇洗脱，取85％乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩、喷雾干燥，得到七叶莲总提取物(收率2.78％)，经hplc检测，绿原酸、异绿原酸a、异绿原酸c、紫云英苷、槲皮素-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷和山奈酚-3-o-β-d-葡萄糖醛酸苷6成分总含量为3.8％，加入药用辅料制成颗粒剂。实施例4七叶莲提取物对小鼠常压缺氧耐受性的影响1.实验方法选取spf级km雄性小鼠90只，体重18～22g，随机分为6组，每组15只，分别为溶媒对照组、益脉康组(250mg/kg.bw)、血塞通组(300mg/kg.bw)、七叶莲提取物低剂量组(1.6g/kg.bw)、中剂量组(2.4g/kg.bw)和高剂量组(3.2g/kg.bw)，其中七叶莲提取物选取实施例3制备的提取物。除溶媒对照组给予等剂量的纯水灌胃外，其余各组给予相应药物灌胃，每天1次，连续15d。于末次给药后1h，将各组小鼠放入缺氧瓶(瓶内放钠石灰10g，用以吸收二氧化碳，钠石灰上垫有滤纸，用以吸收尿液)中，盖紧瓶塞，开始记录实验开始时间。观察各组小鼠活动情况、呼吸状况，准确记录其存活时间(从盖紧瓶塞到小鼠死亡时间)，并进行统计学检验。2.实验结果实验结果如表1所示，各组小鼠连续灌胃给药15d后，与溶媒对照组比较，益脉康250mg/kg.bw剂量和血塞通300mg/kg.bw剂量组可显著延长常压缺氧条件下小鼠的存活时间(p<0.05或p<0.01)，延长率分别为18.52％、25.31％；七叶莲提取物各剂量组亦可显著延长常压缺氧条件下小鼠的存活时间(均p<0.01)，延长率分别为31.48％、30.86％和29.63％。结果提示：七叶莲提取物可能具有明显的耐缺氧作用。表1七叶莲提取物对小鼠常压缺氧耐受性的影响(n＝15)注：与空白对照组比较：*p<0.05，**p<0.01。实施例5七叶莲提取物对血小板聚集的影响取10只spf级雄性sd大鼠，麻醉并腹主动脉取血，按枸橼酸钠(3.8％)1:9抗凝，800r/min离心15min，取上层富血小板血浆(prp)，剩余部分3000r/min离心15min，取贫血小板血浆(ppp)。测试杯通道加入搅拌棒，加受试药物10μl，再加480μlprp。空白对照组加入等量的生理盐水，温育5min，放入测试通道，加入10μladp诱导剂，终浓度为10μmol/l。用ppp(加入与待测样本相同的药物10μl，消除药物自身颜色影响)调零，对照组加入等量的生理盐水，用血小板聚集仪测定血小板5min内的最大聚集率，并按下公式计算药物对血小板聚集的抑制率。血小板抑制率＝(空白对照组的最大聚集率-给药组的最大聚集率)/空白对照组的最大聚集率×100％。实验共分为5组，分别为空白对照组、七叶莲提取物低剂、中、高剂量组(其中七叶莲提取为实施例3所制得样品)和注射用尿激酶组，每组6管。实验结果如表2所示：与空白对照组比较，七叶莲提取物各剂量均能显著地抑制adp诱导的体外血小板聚集(均p<0.01)。表2七叶莲提取物对血小板聚集的影响(n＝6)注：与空白对照组比较：*p<0.05，**p<0.01实施例6七叶莲提取物对大鼠急性血瘀模型的影响选取spf级雄性sd大鼠，按体重分层随机分为7组，每组13只。分别为正常对照组、模型对照组、七叶莲提取物低、高剂量组(其中七叶莲提取为实施例3所制得样品)和金纳多组。各给药组按照相应剂量灌胃给药，每天1次，连续10d，正常对照组和模型对照组灌胃给予等量饮用水。末次给药后0.5h，除正常对照组外，其他各组大鼠尾静脉注射5％右旋糖酐，注射容量为5ml/kg，注射后0.5h，各组大鼠麻醉，腹主动脉取血测定大鼠的全血黏度。实验结果如表3所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠全血黏度在不同切变率下(高切、中切a、中切b和低切)均显著升高(p<0.01)，提示模型建立成功。大鼠连续给予受试物10d后，与模型对照组比较，zsq-4各剂量组大鼠全血黏度在不同切变率下(高切、中切a、中切b和低切)均显著降低(p<0.05或p<0.01)。表3七叶莲提取物对大鼠急性血瘀模型的影响(n＝13)注：与正常对照组比较，##p<0.01；与模型对照组比较，*p<0.01，**p<0.01。实施例7七叶莲提取物对胶原-肾上腺素诱导小鼠体内血栓形成的影响选取spf级km雄性小鼠90只，体重18～22g，随机分为6组，每组15只，分别为空白对照组、阿司匹林组(120mg/kg.bw)、血塞通组(300mg/kg.bw)、七叶莲提取物低剂量组(1.6g/kg.bw)、中剂量组(2.4g/kg.bw)和高剂量组(3.2g/kg.bw)(其中七叶莲提取为实施例3所制得样品)。除溶媒对照组给予等剂量的纯水灌胃外，其余各组给予相应药物灌胃，每天1次，连续15d。于末次给药后1h，各组小鼠尾静脉注射胶原蛋白-肾上腺素混合物诱导剂0.1ml(1ml诱导剂含i型胶原蛋白0.41mg，含盐酸异丙肾上腺素0.04mg)，观察并记录5min内小鼠死亡数和15min内小鼠偏瘫的恢复数，各给药组取平均数与空白对照组比较，进行统计学检验。(各组超过5min未死亡或偏瘫恢复的小鼠存活时间以5min记录)。实验结果如表4所示，各组小鼠连续灌胃给药15d后，与溶媒对照组比较，血塞通300mg/kg.bw剂量和阿司匹林120mg/kg.bw剂量可显著延长尾静脉注射胶原-肾上腺素诱导小鼠体内血栓形成后的存活时间(p<0.01或p<0.001)，延长率分别为59.95％和67.86％；七叶莲提取物各剂量组亦可显著延长尾静脉注射胶原-肾上腺素诱导小鼠体内血栓形成后的存活时间(p<0.05或p<0.01)，延长率分别为41.07％、41.44％和42.36％。与溶媒对照组比较，除阳性对照药血塞通和阿司匹林的偏瘫恢复率分别为40.00％和60.00％，七叶莲提取物各剂量组对偏瘫恢复率均无显著性影响。表4七叶莲提取物对胶原-肾上腺素诱导小鼠体内血栓形成的影响(n＝15)注：与空白对照组比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001实施例8七叶莲提取物对大鼠颈内血栓形成的影响选取480～500gsd雄性大鼠84只，按体重随机分为7组，每组12只，分别为：空白对照组、七叶莲提取物低、高剂量组(其中七叶莲提取为实施例3所制得样品)、血塞通组(阳性药)和阿司匹林组(阳性药)。除空白对照组给予等剂量的0.5％羧甲基纤维素钠溶液灌胃外，其余各组动物给予相应药物灌胃，每天1次，连续7d。于末次给药后1h，使用3.5％水合氯醛麻醉后，仰卧于动物解剖板上，将颈部备皮乙醇消毒，沿颈部正中进行切口，暴露并钝性分离出右侧的颈总动脉，剥离长度约13mm，将yls-14b小动物血栓形成仪血栓探头上的压板打开，将剥离好的颈总动脉勾入探头的沟槽内，探头上标出的血流方向应与被测动物颈总动脉的血流方向一致，调整方向和高度，使搏动信号在某一数值上稳定且机器提示准备就绪，开始刺激，刺激电流为1.4ma，当被测动物血管堵塞率达到95％以上时可视为全堵塞。记录刺激时间，即为血栓形成时间。将被测动物血栓段两端用手术线扎死，将血栓段剪下，将血管内的血栓赶出，去其血管，烘干血栓称重。将血栓形成时间及血栓重量进行统计学检验。实验结果如表5、表6所示，七叶莲各剂量(1g/kg.bw、1.5g/kg.bw和2g/kg.bw)连续给药7d，对显著缩短大鼠颈内血栓形成的时间，且能显著降低血栓的重量，与空白对照组比较，无显著性差异(p<0.05)。表5七叶莲提取物对大鼠颈内血栓形成的影响(n＝15)注：与空白对照组比较：*p<0.05，**p<0.05实施例9七叶莲提取物对线栓法致大鼠脑缺血再灌注的影响选取spf级sd雄性大鼠165只，体重180～220g，按体重随机分为6组，分别为假手术组、模型对照组、七叶莲提取物样品低剂量组(1g/kg.bw)、中剂量组(1.5g/kg.bw)、高剂量组(2g/kg.bw)和血塞通组(100mg/kg.bw)，其中假手术组15只，其余各组各30只。除假手术组、模型对照组给(其中七叶莲提取为实施例3所制得样品)予等剂量的纯水灌胃外，七叶莲提取物各剂量组和血塞通组动物给予相应药物灌胃，每天1次，连续7d。模型对照组和各给药组于末次给药后1h，使用3.5％水合氯醛麻醉后，仰卧于动物解剖板上，将颈部备皮乙醇消毒，沿颈部正中进行切口，暴露并钝性分离出右侧的颈总动脉和迷走神经至分叉处，向上继续分离出颈内动脉和颈外动脉，夹闭颈总动脉近心端，将线栓从颈外动脉插至颈内动脉，线栓标记处到分叉处，停止继续插入。缝合颈部切口，在缝合口上洒青霉素消毒。手术后2h将线栓轻轻拔出0.5cm左右，造成缺血再灌注损伤模型。假手术组只分离颈总动脉不插线栓。各组手术结束后将大鼠放置于恒温清洁笼中卫生饲养，并于手术后2h、12h、24h和36h继续连续给药4次。手术后2h、12h、24h、36h和48h观察动物神经功能缺失症状并进行评分，大鼠神经功能损害程度评分标准如下，取评分＞10分进行统计。评分项目分值1、运动测试：提起鼠尾，进行运动测试32、将鼠置于地板行走(正常＝0；偏瘫≤3)33、横杆平衡测试(正常＝0；不能平衡≤6)64、耳廓、角膜、惊恐反射缺失或异常运动35、癫痫发作，肌阵挛，肌张力障碍1合计1648h评分后处死：①取血并分离血清，进行超氧化物歧化酶(sod)和丙二醛(mda)的检测。②动物取脑，部分大脑称量其湿重，使用1.5％ttc溶液对大脑进行染色，然后使用10％福尔马林固定，待大脑固定后进行拍照，计算脑梗死率，随后烘干大脑称量大脑干重；剩余大脑进行组织匀浆，并取上清进行超氧化物歧化酶(sod)和丙二醛(mda)的检测。实验结果如表6-9及图1所示，与假手术组比较，各给药组及模型对照组手术后2h神经功能评分具明显差异(p＜0.001)，提示造模成功。各给药组连续给药7d、手术后连续给药4次后，与模型对照组比较，血塞通组、七叶莲提取物各剂量组手术后36h对线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤神经功能评分有明显影响(p＜0.05或p＜0.001)；手术后48h，由于模型对照组存活动物较少(3只)，故无统计学意义。表6七叶莲提取物对线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤神经功能评分的影响注：与空白对照组比较：###p<0.001；与模型对照组比较：*p<0.05、***p<0.001与假手术组比较，模型对照组与各给药组对线栓法致大鼠脑缺血损伤脑含水量及脑梗死率均显著升高，提示造模成功。血塞通100mg/kg.bw剂量组连续给药7d、手术后连续给药4次后，与模型对照组比较，脑含水量及脑梗死率显著降低(p＜0.05或p＜0.01)；七叶莲提取物2g/kg.bw剂量组连续给药7d、手术后连续给药4次后，与模型对照组比较，脑含水量及脑梗死率显著降低(p＜0.05)。表7对线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤脑含水量及脑梗死率的影响注：与模型对照组比较：*p<0.05、**p<0.01各给药组连续给药7d、手术后连续给药4次后，与模型对照组比较，各给药组血清中sod活性、mda水平均无明显影响。表8对线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤血液中生化指标的影响各给药组连续给药7d、手术后连续给药4次后，与模型对照组比较，血塞通100mg/kg.bw剂量组脑组织中sod活性显著升高(p＜0.05)，mda水平显著降低(p＜0.001)；七叶莲各剂量组脑组织中mda水平显著降低(p＜0.05或p＜0.01)，且七叶莲2g/kg.bw剂量组脑组织中sod活性显著升高(p＜0.05)。表9对线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织中生化指标的影响注：与模型对照组比较，*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001在本实验所设计剂量范围及条件下，七叶莲提取物可能对脑缺血及缺血再灌注损伤具有一定改善和保护作用。实施例10七叶莲提取物对家兔急性心肌缺血的影响选取spf级2.5～3kg雄性家兔67只，按体重随机分为5组，模型对照组、七叶莲提取物低、高剂量组(其中七叶莲提取为实施例3所制得样品)和金纳多组(阳性药)，每组各15只，假手术组7只。除假手术组、模型对照组外，七叶莲各剂量组和金纳多组动物给予相应药物灌胃，每天1次，连续7d。各组动物于末次给药后1h，使用30％乌拉坦按3ml/kg.bw麻醉后，仰卧于动物手术板上，四肢皮下连接心电图电极，记录标准ii导联心电图。左前胸去毛并进行消毒，沿胸骨正中线左侧旁1～2cm处切开皮肤，切口约为5cm，显露肋骨，从第四、五肋间使用骨用牵开器撑开胸部肋骨，可暴露心脏，用眼科剪将心包膜剪开，然后用无齿镊将心脏轻轻抬起，于左冠状动脉前降支上、中1/3处将血管结扎，然后迅速将心脏复位，关闭胸腔，行胸外按压恢复自主呼吸，缝合胸部切口并进行消毒。假手术组动物仅在左前降支相应位置穿针而不打结，其余操作与手术组相同。各组手术结束后将家兔放置于恒温垫上，并于手术后5min、30min、1h、2h、3h、4h、5h和6h将家兔四肢皮下连接心电图电极，记录手术造模后ii导联心电图(手术组以5min心电图st段抬升作为造模成功的标志)，并对心电图st段的变化值进行数据统计。手术后6h进行心电图检测后，打开腹腔经腹主动脉取血，血样3500转/min，离心15min，分离血清。剪取心脏，进行ttc染色。腹腔采血后剪取心脏，用生理盐水冲洗，并将心脏放入-20℃冰冻30min后，将其沿长轴均匀切成5片心肌组织切片，置于2％ttc磷酸缓冲溶液中进行染色，然后使用10％中性甲醛固定，待心脏固定完成后进行拍照保存，使用superimage软件测量梗死面积，并对结果进行统计。心肌梗死率＝(心肌梗死区面积/心肌总面积)×100％来表示。使用乳酸脱氢酶(ldh)测试盒、丙二醛(mda)测试盒和超氧化物歧化酶(sod)测试盒(测总)对家兔血清中的ldh、mda和sod含量进行检测，并对结果进行统计。实验结果表明(结果见表10-12)：与假手术组比较，各给药组及模型对照组手术后5min心电图st段显著抬升(p＜0.001)，提示造模成功。与模型对照组比较，金纳多40mg/kg剂量连续给药7d，手术后1h-6h各时间点心电图st段明显下降，具有显著性差异(p＜0.05或p＜0.01或p＜0.001)；七叶莲1.5g/kg.bw剂量连续给药7d，手术后2h～6h心电图st段明显下降(p＜0.05)。表10七叶莲提取物对家兔心电图st段变化值的影响注：与假手术组比较：###p<0.001；与模型对照组比较：*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001与假手术组比较，模型对照组与各给药组大鼠心脏梗死率均显著升高，提示造模成功(p＜0.001)。金纳多40mg/kg.bw剂量组与七叶莲提取物1.5g/kg.bw剂量组连续给药7d，与模型对照组比较，心脏梗死率显著降低(p＜0.05或p＜0.01)。表11七叶莲提取物对心脏梗死率的影响注：与空白对照组比较：###p<0.001；与模型对照组比较：*p<0.05，**p<0.01与假手术组比较，模型对照组血清中sod活性显著降低(p＜0.001)，mda水平显著升高(p＜0.05)，提示造模成功；金纳多40mg/kg连续给药7d，与模型对照组比较，家兔血清中sod活性显著升高，mda水平显著降低(均p＜0.01)；七叶莲提取物1.5g/kg.bw剂量组连续给药7d，与模型对照组比较，家兔血清中sod活性显著升高，mda水平显著降低(均p＜0.05)。与假手术组比较，模型对照组与各给药组家兔血清中ldh活性无显著性变化。表12七叶莲提取物对血清中生化指标的影响注：与空白对照组比较：#p<0.05、###p<0.001；与模型对照组比较：*p<0.05，**p<0.01在本实验所设计剂量范围及条件下，七叶莲提取物可能对急性心肌缺血具有一定改善和保护作用。综上所诉，七叶莲提取物在降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、降低全血粘度、延长血栓形成时间、改善脑缺血及缺血再灌注损伤及改善心肌缺血损伤方面具有一定的保护作用。当前第1页12