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几个种类兰花的转基因抗病毒新品种培育研究

花匠小妙招
2024-09-19 00:30

几个种类兰花的转基因抗病毒新品种培育研究

【摘要】： 兰花是兰科(Ocrhidaceae))植物的总称,是开花植物中最大的一个科,属于单子叶植物,是目前花卉中价值最高的种类之一。由于兰花比较难以进行遗传转化,并且兰科植物的花有许多独有的特征,因此进行兰花转基因的研究不仅可以为兰花分子生物学研究打下良好的基础而且还有很大的商业利用价值,在基础理论研究和实际应用方面都具有重要意义。本文以9个种类具有重要价值的兰花(大花蕙兰、卡特兰、中国兰属附生种类等)为材料,应用农杆菌和基因枪两种转化方法进行了转基因研究。建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus, CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus, ORSV)是危害兰花的两种主要病毒。为了使兰花具有抗病毒病的优良性状,将分别携带CyMV和ORSV两种病毒外壳蛋白基因的表达载体PBI121、PBI221分别转化大花蕙兰、卡特兰、中国兰属附生种类等9个种类的兰花。1.研究确定了各类兰花的最佳抗生素筛选浓度。表达载体中有新霉素磷酸转移酶基因(NptⅡ)作为筛选标记基因,选择具有抗卡那霉素的植株。大花蕙兰的抗生素最佳筛选浓度为25 mg/L的卡那霉素,卡特兰的抗生素最佳筛选浓度为25 mg/L的卡那霉素,中国兰属附生种类中的根状茎抗生素最佳筛选浓度为50 mg/L的卡那霉素,类原球茎最佳筛选浓度为10 mg/L的卡那霉素。2.农杆菌侵染方法和合适的共培养时间,农杆菌浸泡在菌液中20 min较为适宜,共培养时间5天较为适宜。3.基因枪转化方法中所用微粒载体为直径1.0μm钨粉,轰击压力定为1100 psi,轰击距离为9 cm、真空度为25mgHg,基因枪轰击后,恢复培养一周后,转入含有卡那霉素的抗性筛选培养基,能有效的筛选出抗性苗。4.研究获得的抗性植株进行了PCR检测,设计了合适的PCR引物,并确定了适宜的PCR反应条件和体系,最终得到PCR水平的98个阳性株系。分析比较了农杆菌和基因枪两种转化方法,在抗性苗的出苗率,抗性苗的PCR检测的阳性率方面的差异。5.对部分PCR产物进行了测序,测序结果与病毒外壳蛋白基因序列一致。

【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009

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