一种获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法与流程
本发明属于作物育种，具体涉及一种获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法。
背景技术：
1、烟草普通花叶病，是由烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus，tmv）引起的烟草病害，是烟草生产中的常见病害之一，在世界范围内各产烟区均有发生。目前，烟草普通花叶病的防控措施主要有培育抗病品种，加强田间管理，采用化学药剂或生物药剂进行防治等，其中培育抗病能力强的烟草品种是最为有效的防控方式。铁氧还蛋白（ferredoxin，简称fd），是一类酸性、低分子量的铁硫蛋白，在植物、动物、细菌及藻类等普遍存在。植物体内fd一般由95 ~ 100 个氨基酸残基组成，含有[2fe-2s]簇的氧化还原中心，具有较负的氧化还原电势，不仅存在于质体中，还存在于非光合作用的器官例如根中。植物fd的主要功能有参与光合作用、固氮作用、抗病过程响应等。例如，朱丽等发现水稻osfd1参与水稻碳、氮、硫的同化（cn111100867b）；赖钟雄等将龙眼铁氧还蛋白基因导入文心兰，转化植株不仅移栽成活率提高，抗软腐病能力也提高（cn103898156b）；程玉琴等在玉米原生质体中超量表达fdv可有效抑制甘蔗花叶病毒scmv的复制（cn102379305b）；孙现超等采用抗体检测表明番茄花叶病毒tomv侵染可降低烟草铁氧还蛋白fdn i的表达（中国农业科学, 2010, 43(19):3981-3987）；邓乐乐等发现烟草铁氧化还原蛋白基因ntab0899580表达降低后，编辑植株株高降低、叶数减少，叶片总糖和还原糖含量升高（cn117024541a）。以上研究表明，植物包括烟草fd的功能具有多样化，深入研究并发掘不同fd基因的潜在功能，是植物基因功能研究的重点之一。而现有技术针对烟草ntfd基因调控获得防控烟草普通花叶病的品系的研究尚处于空白。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，以填补现有烟草ntfd基因防控普通花叶病技术的空白，为烟草抗病品系培育提供材料基础。
2、为实现上述目的，本申请是通过以下技术方案实现的：
3、一种获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，利用如seq id no.1所示烟草ntfd基因的第120 -142位碱基进行人工干预突变，突变后的核苷酸片段序列如seq idno.2所示。
4、进一步的，seq id no.1所示烟草ntfd基因的编码蛋白序列如seq id no.3所示。
5、进一步的，突变后的烟草ntfd基因命名为烟草铁氧还原蛋白基因ntfd。
6、进一步的，烟草铁氧还原蛋白基因ntfd由烟草红花大金元样品获得的烟草ntfd基因通过基因编辑技术获得。
7、进一步的，烟草铁氧还原蛋白基因ntfd的pcr扩增引物序列设计如下：
8、f：5'-aactggtgaatcctgctaag-3'，
9、r：5'-agactggtccgtacttgttt-3'。
10、进一步的，pcr扩增的反应条件为：95℃ 10sec，52℃ 30sec，72℃ 2.5min，共30个循环；72℃ 10min；12℃ hold。
11、本发明的有益效果是：
12、1、本发明获得的烟草ntfd突变基因序列，在烟草普通花叶病防控方面具有显著效果。
13、2、本发明提供了烟草ntfd突变基因防控普通花叶病技术的新可能，填补了相关技术领域的空白。
技术特征：
1.一种获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，其特征在于，利用如seq id no.1所示烟草ntfd基因的第120 -142位碱基进行人工干预突变，突变后的核苷酸片段序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述的获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，其特征在于，seq id no.1所示烟草ntfd基因的编码蛋白序列如seq id no.3所示。
3.根据权利要求1所述的获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，其特征在于，突变后的烟草ntfd基因命名为烟草铁氧还原蛋白基因ntfd。
4.根据权利要求3所述的获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，其特征在于，烟草铁氧还原蛋白基因ntfd由烟草红花大金元样品获得的烟草ntfd基因通过基因编辑技术获得。
5.根据权利要求4所述的获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，其特征在于，烟草铁氧还原蛋白基因ntfd的pcr扩增引物序列设计如下：
6.根据权利要求4所述的获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，其特征在于，pcr扩增的反应条件为：95℃ 10sec，52℃ 30sec，72℃ 2.5min，共30个循环；72℃ 10min；12℃ hold。
技术总结
本发明属于作物育种技术领域，具体涉及一种获得防控烟草普通花叶病的烟草品种的方法，利用如SEQ ID NO.1所示烟草NtFd基因的第120‑142位碱基进行人工干预突变，突变后的核苷酸片段序列如SEQ ID NO.2所示。本发明基于NtFd基因序列人工干预突变而获得的ntfd编辑株系，表现出显著的防控烟草普通花叶病的效果，为烟草抗病品系培育提供了基因资源和材料基础。
技术研发人员：米其利,李雪梅,杨乾翃,苗翠苹,高茜,杨文武,曾婉俐,许力,杨叶昆
受保护的技术使用者：云南中烟工业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2025/2/24
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