Top10F’菌种产品及特点
TOP10F菌株带lacIq,需加IPTG诱导表达克隆于lac启动子后的外源基因,用于蓝白斑筛选时,需加入IPTG和 X-Gal。
其基因型如下:
F´ {lac Iq Tn10 (TetR)} mcr A Δ(mrr -h s d R M S -m c r B C ) Φ 8 0l a c Z Δ M 1 5Δlac X74 rec A1 ara D139 Δ(ara -leu)7697 gal U gal K rps L end A1 nup G
低温运输,-80℃保存,有效期一年。
Top10F’菌种细菌的培养和收集:
将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。
Top10F’菌种质粒DNA少量快速提取:
质粒DNA小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
Top10F’菌种(一)、煮沸法
1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000g离心30秒。
2、弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。
3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。
5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。
7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。
8、取20ml进行电泳检查。
XY1101 细菌基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY1201 细菌基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 50次/100次/200次
XY1301 中量/大量细菌基因组DNA提取试剂盒 20次/50次
XY4101 真菌基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY1401 植物基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY1404 大量植物基因组DNA快速提取试剂盒 10次
XY1501 新型植物基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次/200次
XY3801 新型大量植物DNA快速提取试剂盒 10次
XY2001 酵母基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) 50次
XY2801 酵母基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 50次/100次
XY2901 中量/大量酵母基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 10次
XY1601 凋亡DNA Ladder快速提取试剂盒 20次/50次
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