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第十三章工业微生物菌种复壮和保藏讲课.ppt

花匠小妙招
2025-06-13 18:34

三、菌种保藏机构（一）国内重要菌种保藏机构（二）国外重要菌种保藏机构思考题 1、简答菌种保藏的基本原理和原则。2、如何防止菌种退化？3、常用的工业微生物菌种保藏技术有哪些？第十三章工业微生物菌种复壮和保藏性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡。第一节菌种的退化与复壮菌种退化，主要指生产菌种的或选育过程筛选出来的较优良的菌株，由于进行移接传代或保藏之后，群体中某些生理特性和形态特征逐渐减退或完全丧失的现象。菌种退化的才集中表现：代谢产物合成能力下降；产量低、发酵力和糖化力降低，孢子数量减少，菌落变小，生长速度减慢等。一、菌种的退化原因（一）基因突变 1. 基因突变导致菌种退化（1）表型延迟现象；（2）双核或多核孢子分离；（3）非正倍体或部分双倍体分离、纯菌种自发突变不纯菌种突变个体传代增殖原始个体衰退菌种 2. 质粒脱落导致菌种退化细胞中控制产量的质粒脱落或者核内DNA和质粒复制不一致，经过多代繁殖后，某些细胞中将出现不具有这一类对产量起决定作用的质粒，这些细胞出现的比例越来越大，以致产量下降，菌种退化。（二）连续移代菌种移接代数越多，发生突变的概率就越高。（三）培养和保藏条件的影响不良的培养条件，如培养基组成、pH值、通气等和保藏条件如营养、培养基含水量，温度、氧气等，不仅会诱导低产基因型菌株的出现，而且会造成低产基因和高产基因细胞的数量比发生变化。要采用减少传代、经常纯化、创造良好的培养条件，用单细胞移植传代以及科学的保藏方法等措施，不但可以使菌种保持优良的生产能力，而且还能使已退化的菌种得到恢复提高。二、菌种退化的防止 1. 尽量减少传代 2. 菌种经常纯化（1）注重菌落的纯化；（2）单细胞或单孢子的纯化；实际工作中，要注意观察和归纳，每次移接时，要有意识地挑选这种菌落类型进行传代，就可以较长时期地保持优良的性状。 3. 创造良好的培养条件究竟什么样的培养基能保持菌种的优良特性，应进行专门的实验研究。 4. 用单细胞移植传代对以霉菌和放线菌，由于菌丝可能是多核的，所以尽可能用单核的孢子移接，如采用棉花团沾取孢子接种。 5. 采用有效的菌种保藏方法（1）良好的保藏培养基；（2）良好的保藏的温度条件。（一）菌种复壮的原理（1）狭义的复壮：从衰退的菌种群体中把少数正常个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种。（2）广义的复壮：有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。三、菌种的复壮及其方法（二）菌种复壮的主要方法 1. 纯种分离（1）菌落纯：是只要求达到菌落纯化的水平，通过稀释平板法、划线法、表面涂血法等常规操作法，该方法较为粗放，适用于菌退化不太严重的情况。（2）细胞纯：采用单胞分离法，也可以二者结合，先用前一种方法获得较纯的菌种后再采用单胞分离法进一步纯化。通过物理、化学的方法处理菌体(或孢子)，使大部分死亡(80%以上)，存活的菌多为生长健壮者，可从中选出优良菌种来。 2. 淘汰法 3. 宿主体内复壮法对于寄生性微生物如苏云金杆菌、白僵菌、多角体病毒等，由于长期使用，其毒力会下降，导致杀虫效率降低待衰退现象。这时可以用菌种却感染菜青虫幼虫等，然后从致死的虫体上重新分离，经过几次重复感染与分离，就可以逐步恢复和提高毒力。第二节工业微生物菌种的保藏工业微生物菌种保藏与其他目的的菌种保藏要求有所不同。工业微生物菌种保藏，是要使菌种生产能力和与生产工艺相适应的优良性状保持稳定，当然做不到绝对不变，只是力求把这种衰退现象推迟减缓到最低限度。一、菌种保藏目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱，以供研究、生产、交换之用。基本原则：1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温、缺营养、缺氧） 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 1、斜面保藏法简单冷冻（低温40C冰箱），保藏3-6个月，优点是简单方便，缺点是保藏时间不长，此法细菌保存采用的较多。 2、石蜡保藏：利用缺氧、冷却。（细菌、无孢子的丝状菌，如920产生菌）石蜡使斜面与空气隔绝，造成缺氧环境。保藏期：一年左右。（视菌种