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梅花花胚提取物及其制备方法和应用与流程

花匠小妙招
2025-08-13 07:50

本发明属于植物提取领域及日化领域，具体涉及一种梅花花胚提取物及其应用。

背景技术：

皮肤覆盖于整个人体表面，与外界环境直接接触，除了保护机体免受外界各种因素的伤害外，又是反应全身健康状态的一面镜子。

透明质酸是一种酸性粘多糖，又称糖醛酸、玻尿酸；透明质酸具有非常好的保水作用，同时也是一种多功能基质，透明质酸广泛分布于人体各部位。其中皮肤也含有大量的透明质酸。人类皮肤成熟和老化过程也随着透明质酸的含量和新陈代谢而变化，它可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、延缓衰老。

胶原是哺乳动物体内含量最多的蛋白质，是细胞外基质中的主要成分，广泛分布于于人体的皮肤、骨骼、肌肉、软骨、关节、头发组织中，起着支撑、修复、保护的三重延缓衰老作用。胶原位于人皮肤的真皮层中由成纤维细胞合成，约占真皮成分的95％，其中大部分为i型胶原(90％)还有少部分iii型胶原(10％)；所以i型胶原是皮肤真皮层所含的主要成分，随着年龄增长，皮肤中i型胶原流失，含量下降，皮肤出现萎缩，皱纹等衰老现象。

弹性蛋白是弹性纤维的主要成分。弹性蛋白存在于韧带，主动脉，皮肤和软骨中。在皮肤中虽然胶原能够给细胞外基质以强度和韧性，但是还需要富有弹性，因此弹性蛋白在维持肌肤弹性方面担当着重要的角色。弹性蛋白让肌肤有伸展和褶合的能力，负责维持与支撑肌肤的弹性。弹性蛋白决定着皮肤的弹性和柔软性，对光线等理化因素引起的皮肤生理性老化过程，具有防止老化和促进再生的作用。随着年龄增长，肌肤中的弹性蛋白的含量减少，连带地降低对维持紧致肌肤所需要的网络支持，皮肤开始松弛、有细纹等老化现象。

因此，研究如何增加皮肤的含水量及增强弹性，对于保护皮肤的健康、延缓皮肤衰老具有重要意义。提高细胞内透明质酸含量、促进i型胶原及弹性蛋白的合成，能够起到延缓衰老的功效。

梅花是蔷薇科李属植物梅(prunusmumesieb.etzucc.)的花蕾，梅树为早春开花的落叶小乔木，分布中心在我国四川、云南和西藏交界的横断山区和云贵高原。梅花栽培容易，寿命长；对温度极为敏感，花期受环境影响最大，为耐寒植物，在0℃左右即能开花，在早花期年份，当旬平均气温4℃左右时，就可进入盛花期。

梅花是我国的传统名花，有花魁之称，具有怡人的香气，其不畏严寒的精神品格历来受到文人墨客的推崇与盛赞，与松、竹并称“岁寒三友”，又是“四君子”(梅、兰、竹、菊)之一，深受人们的喜爱，已有3000多年的栽培历史，现在是中华人民共和国候选国花之一。

梅花应用广泛，除供观赏外，梅花的干花、叶、根、核仁等均可入药，鲜花可提香精，有些梅花品种可花果兼用，所结梅子可制梅干、青梅、话梅、乌梅等加工品，酸梅膏更是防治肠道传染病的抑菌、杀菌良药。

梅花的主要活性成分有黄酮类和有机酸类化合物。目前从梅花中分离鉴定的黄酮类成分有17种，包括黄酮苷元(如槲皮素、异鼠李素)、寡糖苷(如，芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷)和多糖苷及其衍生物；梅花中的有机酸类成分主要为绿原酸类物质。日本京都药科大学用梅花某些成分对实验鼠进行实验发现，白梅花总黄酮提取液对蘑菇酪氨酸酶有抑制活性，从而干扰黑素的生物合成，减轻皮肤色素沉着，改善肤色。研究表明白梅花甲醇提取物及其乙酸乙酯层、正丁醇层、水层部分均显示较强的dpph·自由基和o2—：自由基清除活性。

目前还没有将梅花提取物用于改善、延缓皮肤衰老，维持皮肤功能的报道，也没有发现其他方法从梅花中获得活性成分，用于延缓皮肤衰老的报道。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种梅花花胚提取物及制备方法。

本发明还将上述梅花花胚提取物应用于皮肤外用剂，尤其是具有抗衰老、保湿或修复皮肤等功能的化妆品。

技术方案为：一种梅花花胚提取物，是梅花花胚的全果浆。

优选的，所述的梅花花胚处于花芽至花蕾期。更优选的，梅花花胚处于花蕾期。

优选的，所述的梅花花胚为绿萼梅的花胚。

上述梅花花胚提取物可通过以下方法制备：取新鲜的梅花花胚(全花胚)压榨和/或打浆，获取全果浆。优选的，在-18～-200℃下进行冷冻压榨和/或打浆。

优选的，新鲜的梅花花胚在采摘后24小时内冷冻至-18～-200℃。

优选的，在-18～-200℃下冷冻压榨获取全果浆。更为优选的，冷冻压榨的温度为-50～-200℃。在本发明的一个优选实施方式中，冷冻压榨的温度为-150～-200℃。

本发明的梅花花胚提取物，对皮肤细胞不产生毒性，能够可作为功效添加剂用于制备皮肤外用剂。

梅花花胚提取物作为活性成分，能够促进透明质酸合成、提高细胞内透明质酸含量，促进i型胶原合成及促进弹性蛋白的合成，可作为保湿、抗衰老或修复皮肤功能的活性成分或功效添加剂用于皮肤外用剂，实现延缓衰老功效。梅花花胚提取物还可以显著提高皮肤成纤维细胞的透明质酸含量，有助于保持皮肤湿润，具有保湿效果，减少产生皱纹；还可以有效提高i型胶原合成量以及弹性蛋白的表达量，从而维持肌肤弹性，延缓皮肤衰老。

采用上述梅花花胚提取物作为活性成分的皮肤外用剂具有保湿、抗衰老或修复皮肤的功能。

采用本发明的梅花花胚提取物作为活性成分的皮肤外用剂，如护肤品或化妆品，具有促进透明质酸、i型胶原蛋白或弹性蛋白合成等功能。

皮肤外用剂可以是化妆水、精华液、乳液、乳霜等。

透明质酸是一种酸性粘性多糖，广泛分布于人体各部位，皮肤中也含有大量的透明质酸，具有非常好的保水作用。胶原是细胞外基质中的主要成分，其在人体皮肤细胞中由成纤维细胞合成，起支撑、修护和保护的作用。弹性蛋白是弹性纤维的主要成分，其负责维持和支撑肌肤的弹性。透明质酸的保湿作用有利于皮肤保持水分，可减少干纹的产生；i型胶原和弹性蛋白表达的提高能够维持肌肤弹性，进一步达到抗衰老的功效。

用0.03wt％梅花花胚提取物处理后，成纤维细胞中的透明质酸含量、i型胶原合成量以及弹性蛋白的表达量有显著增加，从而验证了梅花花胚提取物能够维持肌肤弹性，延缓皮肤衰老。

梅花花胚提取物在皮肤外用剂中的添加量为0.0001wt％～20wt％，优选为0.001wt％～2wt％，更优选为0.005wt％～0.5wt％。

本发明首次提出梅花花胚提取物及其复合物具有提高细胞内透明质酸含量、促进i型胶原及弹性蛋白合成的作用，适用于具有延缓衰老功效的化妆品中。提取物的制备方法简单，无溶剂残留，能够保证其有效成分不流失，抗氧化以及抗衰老效果显著。

附图说明

图1为实施例2梅花花胚提取物对细胞活性影响的实验结果

图2为实施例3梅花花胚提取物促进透明质酸合成的实验结果

图3为实施例4梅花花胚提取物促进i型胶原蛋白合成的实验结果

图4为实施例5梅花花胚提取物促进弹性蛋白合成的实验结果

具体实施方式

实施例1

选取绿萼梅处于高活性阶段的花胚，即处于花蕾期的花，进行人工手工采摘；采摘后24小时内将其迅速冷冻至-28度；再于-196度下采用冷冻压榨技术获得新鲜的全果浆，即为梅花花胚提取物。

冰鲜速冻及提取过程全程低温进行，全花胚在低温下被压榨粉碎和匀浆，且无溶剂残留，以保证其鲜活能量成分全被锁住不失活，性能更稳定。

实施例2细胞毒性试验

取实施例1所获取的梅花花胚提取物，加入双蒸水或超纯水稀释，用于后续实验。

细胞培养：人原代成纤维细胞，以3000个细胞/孔种于96孔板中，37℃、5％co2条件下用完全培养基(dmem90％，fbs10％，双抗p/s1％)，在细胞培养箱中培养48小时。

细胞毒性试验步骤为：经过培养的细胞中加入梅花花胚提取物(终浓度0.03wt％)共培养24小时后，移除培养基，加入mtt0.5mg/ml，3小时后小心吸去上清，加入dmso，于550nm下进行检测；以未加入样品处理组为对照，定义样品孔为t，未处理孔为nt，以t与nt的比值(t/nt)≥90％视为无细胞毒性，比值＜90％视为有细胞毒性。

在细胞毒性试验中，如果添加了提取物的生长状况良好，细胞没有出现明显死亡。则可初步判断梅花花胚提取物对细胞没有毒性，可以进行后续试验。

结果如图1，梅花花胚提取物在0.03wt％浓度下不会对细胞造成细胞毒性。

用0.03wt％的浓度进行下一步透明质酸含量测定、胶原含量测定及弹性蛋白合成的试验。如果相对于未添加提取物的细胞组，透明质酸含量明显升高，胶原含量升高，弹性蛋白合成也升高，可推断梅花花胚提取物有利于与衰老相关的结构的稳固，最终起到有助于延缓皮肤衰老的作用。

实施例3促进透明质酸合成

细胞培养方法如实施例2。

经过培养的细胞中加入梅花花胚提取物(终浓度0.03wt％)共培养24小时后，去上清，加入不含血清培养基(dmem100％,双抗p/s1％)继续培养24小时，之后取孔板中上清，根据hyaluronanelisakit说明书操作，进行透明质酸含量的测定，于450nm下检测，以透明质酸标准品(30～0ng/ml)系列做标准曲线。定义样品孔为t，未处理孔为nt。

结果显示如图2所示，梅花花胚提取物在浓度0.03％时，透明质酸含量显著增加到为123.43％(相对于未处理100％)促进透明质酸合成的延缓皮肤衰老功效，

实施例4促进i型胶原合成

经过培养的细胞中加入梅花花胚提取物(终浓度0.03wt％)共培养24小时后，去上清，加入不含血清培养基(dmem100％,双抗p/s1％)使胶原富集48小时，之后取孔板中上清，根据col–ielisakit说明书操作，进行人i型胶原含量的测定，于450nm下检测，以人i型胶原标准品(20～0ng/ml)系列做标准曲线。以picogreendna试剂盒测得的dna量来标定每孔的细胞数。

结果如图3，由图3可知，梅花花胚提取物在浓度为0.03％时，胶原含量比未处理孔高，说明加入的梅花花胚提取物具有促进i型胶原合成的作用，且显著增加，i型胶原含量为127.35％(相对于未处理孔100％)。

实施例5弹性蛋白elastin荧光免疫表达分析

人原代成纤维细胞以5000/孔接种于12孔板细胞爬片上，培养96小时，之后饥饿培养6小时，然后分别用加入及不加入活性物(梅花花胚提取物终浓度0.03wt％)进行培养24小时，之后固定细胞做elastin的免疫荧光染色。

分别取加入及未加入提取物的细胞爬片，吸掉爬片上的培养基，pbs清洗2次；冷甲醇4℃固定,pbs清洗2次；triton0.5％透膜15min,pbs清洗2次，之后用1％bsa/pbs封闭，加入elastin的1抗，4过夜；次日加入对应的二抗及dapi室温避光孵育1h。染色，最后加入封片剂封片，荧光显微镜下观察、拍照。

结果如图4，且由免疫荧光分析可以看出加入0.03％梅花花胚提取物的样品组有增加elastin表达的趋势，比未处理的elastin表达提高了24％，这说明提取物可以提高真皮中重要结构蛋白弹性蛋白elastin的表达，有助于延缓皮肤衰老。

实施例6

实施例1的梅花花胚提取物，可作为皮肤外用剂的活性成分花胚生肌精萃，能够显著促进透明质酸、胶原蛋白尤其是i型胶原蛋白、弹性蛋白表达及合成。花胚生肌精萃作为有效成分或活性成分添加到皮肤外用剂如化妆品或护肤品中，所获得的化妆品或护肤品具有保湿、抗皱除皱、抗衰老或延缓皮肤衰老、增加皮肤弹性以及修复皮肤功能等功效。

也可以由梅花花胚提取物加入分散剂、稳定剂、乳化剂、增稠剂等制成花胚生肌精萃活性添加剂，如加入棕榈酰六肽-12等，最终在化妆品中使用的浓度为0.3％。

结论：实施例2～5的实验结果采用means±cv表示，用microsoftexcel统计软件进行分析处理。两两比较采用t检验，*p<0.05表示有统计学差异。图像分析使用image-proplus7.0进行处理分析，所有结果的数据与未处理的进行比较，并以未处理作为100％，每种条件下至少3个平行样(n＝3)。

一、细胞毒性mtt实验显示，梅花花胚提取物在浓度0.03％时没有细胞毒性。

二、梅花花胚提取物在延缓皮肤衰老方面的功效

为了验证梅花花胚提取物在延缓皮肤衰老方面的功效，我们从样品处理后的透明质酸含量、胶原合成量和弹性蛋白表达量三个方面进行分析。如果添加梅花花胚复合物后，细胞生长状态良好，通过测定透明质酸含量、胶原含量及弹性蛋白的合成量，如果相对于未添加梅花花胚复合物的对照组含量均上升，即可反映梅花花胚复合物对于维持肌肤弹性具有作用，进一步达到抗衰老的功效。

梅花花胚提取物在浓度为0.03％时，透明质酸含量测定、人i型胶原含量测定及弹性蛋白elastin免疫荧光表达实验显示，透明质酸、人i型胶原含量都有明显增加。

1.添加梅花花胚提取物(0.03wt％)具有促进透明质酸合成的延缓皮肤衰老功效，透明质酸含量提高到123.43％，相对于未处理(100％)增加了23.43％。

2.梅花花胚提取物(0.03wt％)处理后i型胶原的含量显著增加，含量为未处理孔的127.35％，提高了27.35％。

3.免疫荧光分析结果显示，加入梅花花胚提取物(0.03wt％)的样品组有增加弹性蛋白elastin表达的趋势；梅花花胚提取物处理后，真皮中重要结构蛋白弹性蛋白表达有显著提高，与对照组相比提高了24％。

由此可见，加入梅花花胚提取物可以促进透明质酸的合成，具有保湿和延缓皮肤衰老的功效；可以促进i型胶原的合成，提高真皮中重要结构弹性蛋白的表达量，有利于与衰老相关的结构的稳固，有助于延缓皮肤衰老。