基因工程为花卉育种提供了新的技术保障。如图为花卉育种的过程（字母代表相应的物质或结构，数字代表过程或方法）。下列说法正确的是（） A.①过程需要的酶有限制酶和D
发布：2024/4/20 14:35:0组卷：422引用：14难度：0.5
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1．PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列，大小为0.9kb（1kb=1000碱基对），利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题。
（1）为获取PHB2基因，提取该动物肝脏组织的
，再经
过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
（2）如图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使PHB2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的PHB2基因两端分别引入
和
两种不同限制酶的识别序列。为此需要将两种酶的识别序列分别设计在两种引物的
端（填“3′”或“5′”）。双酶切避免了目的基因于载体的
连接，同时减少目的基因与目的基因、载体与载体的连接，以提高重组质粒的比例。经过这两种酶酶切的PHB2基因和载体进行连接时，可选用
（填“E•coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
（3）将转化后的大肠杆菌接种在含
的培养基上进行培养，随机挑取单菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图2，
号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。
（注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2kb的DNA分子条带未出现在图中）
（4）根据PHB2cDNA的核苷酸序列设计了相应的引物如图3，通过PCR扩增PHB2基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为
，PCR扩增时，目的基因往往只是DNA中的一个片段，类似于AB段，当PCR扩增至第四轮循环时等长的目的基因片段占
。
（5）将纯化得到的PHB2蛋白以一定浓度添加到人宫颈癌细胞培养液中，培养24小时后，检测处于细胞周期不同时期的细胞数量，统计结果如图4。分析该蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖可能的原因是将细胞阻滞在细胞周期的
（填“G1”或“S”或“G2/M”）期。
发布：2024/9/28 12:0:2组卷：6引用：2难度：0.5
2．如图表示某种绿色荧光蛋白基因表达载体的构建过程，绿色荧光蛋白基因有820个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp）。请据图回答问题：
（1）上述基因表达载体的构建过程需要的基本工具包括：
。过程①②用相同的两种限制酶切割，与单一酶切相比的优势有
。
（2）过程②目的基因的扩增可通过PCR技术实现，进行PCR时除提供DNA母链，4种脱氧核苷酸，还需
等基本条件（至少填两个）。PCR可成指数形式扩增目的基因，每个循环一般可分为
。
（3）已知图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，若出现了一条长度为5150bp的DNA条带，则重组质粒的长度为
的DNA片段条带。
（4）若想获得发绿色荧光的小鼠，可将重组质粒用
法导入小鼠的
（细胞）中。
发布：2024/10/1 1:0:2组卷：9引用：2难度：0.6
3．猪源大肠杆菌会引起仔猪发生肠炎、肠毒血症等疾病。LTB和ST1是猪源大肠杆菌肠毒素基因，融合基因LTB-ST1的表达产物LTB-ST1融合蛋白可有效预防仔猪黄痢。构建融合基因的方法如图1所示。请回答：
（1）猪源大肠杆菌与猪细胞在结构上最主要的区别是
，猪源大肠杆菌与猪的种间关系为
。
（2）在对LTB基因与ST1基因进行PCR过程中，DNA解旋的方法是
，若引物中C或G的碱基数量越高，则复性的温度会
（选填“升高”、“降低”或“不变”）。
（3）图1中限制酶1使得LTB基因中的
键断裂。为保证经酶处理后的LTB基因与ST1基因能够正常连接，限制酶1与限制酶2在选取时需满足
的特点，可见这种融合基因的方法具有局限性。
（4）为突破限制酶选取的局限性，研究人员通过重组PCR技术构建了LTB-ST1融合基因，如图2所示，请回答：
①重组PCR技术依据的生物学原理是
。PCR1和PCR2需要在两个不同反应体系中进行的原因是
，两个反应体系中加入的物质中不同的是
。下列序列中符合引物P2与引物P3的5′末端碱基序列要求的是：
。
A.5'ATCGGACTTG⋯3'
B.5'ATCGGAGAAC⋯3'
C.5′TAGCCTGAAC⋯3'
D.5′CAAGTCCGAT⋯3'
②重组PCR技术不仅可用于构建融合基因，还可用于研究基因定点突变。若要在两个基因连接处实现基因定点突变，可对
进行设计，后通过重组PCR，使新合成的DNA中含有突变位点，从而实现基因的定点突变。
发布：2024/10/3 11:0:1组卷：13引用：1难度：0.5
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