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一种转基因西瓜植株的制备方法技术

花匠小妙招
2025-09-15 15:46

本发明专利技术提供了一种转基因西瓜植株的制备方法，属于转基因植物制备领域。该方法是利用转入外源基因的农杆菌侵染西瓜成熟子叶外植体；之后转入共培养基上培养，所述共培养基是由3层无菌滤纸和适量的液体共培养基组成；之后外植体转入筛选培养基，前期使用较低浓度的筛选剂，后期逐渐提高筛选剂浓度，经过芽伸长筛选、生根、炼苗、移栽，得到转入外源基因的西瓜植株，分子鉴定结果显示外源基因成功转入并能稳定表达。本发明专利技术方法提高外植体细胞活力，转化细胞数目多，转化细胞与再生细胞重叠性好，逃逸体频率低，转化率高，转基因植株生长健壮，生根好，驯化存活率高，适用于不同外源基因及农杆菌菌株类型转化，且重复性良好，具有良好的经济价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物转基因
，具体地，涉及一种转化率高的转基因西瓜植株的制备方法。
技术介绍
从1983年转基因植物诞生以来，植物基因工程成为发展最快、应用潜力最大的生物技术之一。植物转基因技术是指把从动物、植物或微生物中分离到的目的基因，导入到目的植物的基因组中，使之稳定遗传并赋予植物新的农艺性状，如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。农杆菌介导的转基因方法是一种天然的植物遗传转化系统，具有易操作、低费用、高效率、外源基因在转基因植物中的拷贝数低和遗传稳定等独特优点，已成为转基因策略中的首选方法，在植物的遗传转化中广泛应用。西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)为葫芦科一年生草本，是世界性重要瓜类蔬菜作物。1994年韩国学者Choi等首次报道，利用农杆菌LBA4404,将卡那霉素(Kanamycin)抗性基因和GUS标记基因转入了2个西瓜品种。随后，许多研究者对西瓜遗传转化进行了深入研究，将抗病、抗逆、耐贮藏等外源基因导入西...

【技术保护点】
一种转基因西瓜植株的制备方法，包括以下步骤：(1)含外源目的基因的农杆菌菌液侵染西瓜成熟子叶外植体；(2)侵染后，将外植体转入共培养基中培养，所述共培养基为三层无菌滤纸，加入液体共培养基浸透滤纸；外植体置于滤纸之上共培养；(3)共培养结束后，将步骤(2)的外植体转移到含低浓度筛选剂的筛选培养基上进行筛选培养，之后逐渐提高筛选剂的浓度进行筛选培养，挑选抗性外植体；(4)将抗性外植体幼芽转入芽伸长培养基继续筛选，取生长良好的完整幼苗，转入生根培养基，幼苗生根后炼苗、移栽，得到转基因西瓜植株。

【技术特征摘要】
1.一种转基因西瓜植株的制备方法，包括以下步骤：
(1)含外源目的基因的农杆菌菌液侵染西瓜成熟子叶外植体；
(2)侵染后，将外植体转入共培养基中培养，所述共培养基为三
层无菌滤纸，加入液体共培养基浸透滤纸；外植体置于滤纸之上共培
养；
(3)共培养结束后，将步骤(2)的外植体转移到含低浓度筛选
剂的筛选培养基上进行筛选培养，之后逐渐提高筛选剂的浓度进行筛
选培养，挑选抗性外植体；
(4)将抗性外植体幼芽转入芽伸长培养基继续筛选，取生长良好
的完整幼苗，转入生根培养基，幼苗生根后炼苗、移栽，得到转基因
西瓜植株。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述
的西瓜子叶外植体获得方法为：取健康饱满的西瓜种子，剥去种皮，
避免伤及种仁，用70％乙醇溶液消毒30sec，无菌水清洗；有效氯浓度
为0.2％-0.3％的次氯酸钠溶液消毒10-15min，无菌水清洗后接入BM
培养基，28℃暗培养3天，切取健康萌动的种仁，自子叶近轴端，
1.5mm×1.5mm切片，及时接入MS液体培养基中。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)侵染
方法为将OD600为0.8-1.0的含外源基因的农杆菌菌液与西瓜子叶外植
体混匀，侵染10min。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述
的共培养是在28℃黑暗条件下培养4天。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述
液体共培养基的配方为1650mg/L NH4NO3，1900mg/L KNO3，170mg/L
KH2P04，370mg/L MgSO4.7H2O，332mg/L CaCl2，223mg/L MnSO4.4H2O，
6.2mg/L H3BO3，8.6mg/L ZnSO4.7H2O，0.83mg/L KI，0.025mg/L