一种金纳米花免疫探针、其制备方法与应用技术
本发明专利技术公开了一种金纳米花免疫探针、其制备方法与应用。所述金纳米花免疫探针包括金纳米花粒子，且金纳米花粒子上修饰有示踪酶标记的抗体，其中所述金纳米花粒子主要是以表面吸附壳聚糖的纳米金种子为模板与还原剂、氧化剂反应而制得。所述示踪酶标记的抗体包括示踪酶标记单克隆抗体或多克隆抗体。本发明专利技术的金纳米花免疫探针较之传统的酶标记抗体免疫探针信号和检测灵敏度显著提升；本发明专利技术采用酶联免疫反应验证了金纳米花免疫探针的活性，该方法简便快速，重复性高；基于本发明专利技术金纳米花免疫探针的酶联免疫检测分析方法在较少改变传统检测方法成本的前提下，检测性能显著地提高。
【技术实现步骤摘要】
一种金纳米花免疫探针、其制备方法与应用
本专利技术特别涉及一种金纳米花免疫探针、其制备方法与应用，属于免疫分析
技术介绍
金纳米结构由于具有尺寸可控、形状可调等特点，在光学、电学、生物医药和生物传感中获得了广泛的应用。金纳米花(AuNFs)是一种具有多头或枝化结构的特殊的金纳米粒子，相对球形金纳米粒子，其比表面积显著增加。这一特殊的形貌，使得其在生物传感中获得了许多应用。采用方便、可控、生物相容性好的制备方法获得特定形貌的金纳米花，并将其应用于光学、电学、生物医药和生物传感中是一项具有很高应用价值的工作。酶联免疫分析(ELISA)技术是一种非常成熟的固相免疫分析模式，在临床诊断、食品安全危害物监测、环境分析等许多领域中已经获得了广泛的应用。但是，酶联免疫分析技术对痕量目标物的检测仍然面临较多的挑战，因此，许多信号放大技术，如银染色增强、酪胺信号放大、免疫-PCR等获得了人们的关注。但是，这些信号放大体系的应用在获得了超高灵敏的检测性能的同时，也使得酶联免疫分析技术的复杂性和成本大大提高，因而限制了它们的实际应用。因而，开发一种制备方法方便、成本低的纳米免疫探针，应用于ELISA，具有较高的应用价值。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的主要目的在于提供一种金纳米花(AuNFs)免疫探针、其制备方法与应用。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：在一些实施例中提供了一种金纳米花免疫探针，包括金纳米花粒子以及修饰于金纳米花粒子上的示踪酶标记的抗体；其中所述金纳米花粒子主要是以表面吸附壳聚糖的纳米金种子为模板与还原剂、氧化剂反应而制...
【技术保护点】
一种金纳米花免疫探针，其特征在于包括金纳米花粒子以及修饰于金纳米花粒子上的示踪酶标记的抗体；其中所述金纳米花粒子主要是以表面吸附壳聚糖的纳米金种子为模板与还原剂、氧化剂反应而制得。
【技术特征摘要】
1.一种金纳米花免疫探针，其特征在于包括金纳米花粒子以及修饰于金纳米花粒子上的示踪酶标记的抗体；所述金纳米花粒子主要是以表面吸附壳聚糖的纳米金种子为模板与还原剂、氧化剂反应而制得，其中的反应包括：(1)将粒径为10～15nm的金纳米粒子、氧化剂、壳聚糖于水相体系中充分混合后用频率为25kHz～45kHz的超声波处理5～10min，制得混合溶液，所述混合溶液中氧化剂的浓度为0.005wt％～0.02wt％，壳聚糖和/或壳聚糖衍生物的浓度为1.04～4.16mg/mL，所述氧化剂包括氯金酸；(2)向步骤(1)制备的混合溶液中加入还原剂，直至还原剂的浓度为3.2mM～12.8mM，之后在无光条件下搅拌反应10～15min，制得金纳米花粒子，所述还原剂包括抗坏血酸或没食子酸。2.根据权利要求1所述的金纳米花免疫探针，其特征在于所述示踪酶标记的抗体包括示踪酶标记单克隆抗体或多克隆抗体，所述示踪酶包括辣根过氧化物酶。3.如权利要求1-2中任一项所述金纳米花免疫探针的制备方法，其特征在于包括：以表面吸附壳聚糖的纳米金种子为模板与还原剂、氧化剂反应而制得金纳米花粒子，并将金纳米花粒子分散于质量浓度为0.02～0.1mg/mL的辣根过氧化物酶标记的抗体溶液中，在温度为0℃～8℃的条件下震荡1h～5h，之后加入牛血清蛋白溶液进行封闭，直至牛血清蛋白的最终浓度为0.2wt％～1wt％，然后在温度为20～27℃、转速为300～600rpm的条件下振荡0.5h～1h，获得所述金纳米花免疫探针。4.一种试剂盒，其特征在于包括权利要求1-2中任一项所述的金纳米花免疫探针。5.基于权利要求4所述试剂盒的检测方法，其特征在于包括：a、将所述的免疫探针与不同浓度的目标抗原标准样品进行酶联免疫反应，并记录检测信号，由此建立免疫探针检测信号与抗原浓度之间的标准对应关系；b、将所述的免疫探针与含有未知浓度的目标抗原的待测样品进行酶联免疫反应，并依据步骤a建立的免疫探针检测信号与抗原浓度之间的标准对应关系，确定待测样品中的目标抗原浓度。6.基于权利要求4所述试剂盒的检测方法，其特征在于包括：A、将蛋白质与半抗原的偶联物溶于碳酸盐缓冲液中形成包被液，之后加入酶标板中，并在温度为25℃～37℃的条件下孵育1～4h，再以磷酸盐缓冲液洗涤，而后加入封闭液，并在温度为0℃～8℃的条件下封闭过夜，且蛋白质与半抗原的偶联物与碳酸盐缓冲液的体积比为1:9000～1:243000，制得包被抗原溶液，所述蛋白质包括卵清蛋白或牛血清蛋白；B、向步骤A中连接上包被抗原的酶标板中加入一系列不同浓度小分子标准品的磷酸盐缓冲液，之后加入含小分子抗体的酶标稀释液，再在温度为25℃～37℃的条件下孵育0.5～1h，最后用磷酸盐缓冲液洗涤，所述酶标稀释液包括磷酸盐缓冲液，该磷酸盐缓冲液浓度为0.01M～...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭池方，潘娜，王丽英，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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